第九章治疗性抗体课件

章治疗性抗体（章治疗性抗体（CureAntibody）节概述节概述(Introduction)1890年年Behring和北里柴三郎发现了可和北里柴三郎发现了可特异中和外毒素的血清组合白喉抗毒素，特异中和外毒素的血清组合白喉抗毒素，建立了血清疗法，开抗体制药之先河。建立了血清疗法，开抗体制药之先河。至今，以破伤风抗毒素血清为首紧急预至今，以破伤风抗毒素血清为首紧急预防和治疗以毒血症为主要发病机制的疾防和治疗以毒血症为主要发病机制的疾病的有利武器。病的有利武器。抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。血清中存在一种能特异中和外毒素的组血清中存在一种能特异中和外毒素的组分称之为抗毒素。将血清中这种具有特分称之为抗毒素。将血清中这种具有特异性反应的组分称为抗体。异性反应的组分称为抗体。1章治疗性抗体（CureAntibody）1一、抗体分子的基本结构（一、抗体分子的基本结构（Structure of Antibody）抗体指能及相应抗原特异性结合的具有免疫功抗体指能及相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。和分泌的球蛋白。具有抗体活性及化学结构及抗体相似的球蛋白，具有抗体活性及化学结构及抗体相似的球蛋白，统称为统称为免疫球蛋白免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。）。2一、抗体分子的基本结构（Structure of Antib二二、抗抗 体体 分分 子子 的的 生生 物物 学学 功功 能能（Biological function of Ab）抗抗体体是是体体液液免免疫疫应应答答中中发发挥挥免免疫疫功功能能最最主主要要的的免免疫疫分分子，其功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。子，其功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。p轻轻链链（Light chain）上上有有一一个个轻轻链链易易变变区区（Variable region of light chain，VL）及及 一一 个个 轻轻 链链 恒恒 定定 区区（Constant region of light chain，CL）。）。p重重链链（Heavy chain）有有一一个个重重链链易易变变区区（Variable region of heavy chain，VH）及及3-43-4个个重重链链恒恒定定区区（CH1-CH1-CH4CH4）。）。p抗体分子的各种功能区分别发挥不同的生物学效应。抗体分子的各种功能区分别发挥不同的生物学效应。3二、抗体分子的生物学功能（Biological functiFab及及Ag结合结合PapainFab2Fc木瓜木瓜EPepsinF(ab)2pFc胃蛋白酶胃蛋白酶FcFc通过胎盘及通过胎盘及补体及补体及Fc受体受体c结合结合 N端端C端端铰链区 IgIg分子的结构模式图分子的结构模式图4Fab及Ag结合PapainFab2木瓜EPepsinF(CDR(CDR(互补决定区）互补决定区）5CDR(互补决定区）51、特异性地结合抗原（、特异性地结合抗原（Specific combine Ag）是由是由V区（尤其是区（尤其是V区中的超变区）的空间构型决区中的超变区）的空间构型决定的，是可逆的，并受到定的，是可逆的，并受到pH、温度和电解质浓度的、温度和电解质浓度的影响。影响。aa极大变化的超变区（极大变化的超变区（Hypervariable region，HV）或互补决定区（）或互补决定区（Complementarity determining region，CDR），），CDR1-CDR3（各（各5-16aa）：）：可特异性结合可特异性结合Ag框架区（框架区（Framework region，FR）：为）：为片层片层结构，结构，aa序列相对稳定，序列相对稳定，不及不及Ag直接结合。直接结合。61、特异性地结合抗原（Specific combine Ag2、活化补体（、活化补体（Activate complement）IgM、IgG1、IgG2和和IgG3 可可通过经典途径活化补体。凝聚通过经典途径活化补体。凝聚的的IgA、IgG4和和IgE等可通过等可通过替代途径活化补体。替代途径活化补体。72、活化补体（Activate complement）73、结合、结合Fc受体受体(Combined Fc receptor)不同细胞表面具有不同不同细胞表面具有不同Ig的的Fc受体，分别用受体，分别用FcR、FcR等表示。当抗体及相应抗原结合后，等表示。当抗体及相应抗原结合后，由于构型的改变，其由于构型的改变，其Fc段可及具有相应受体的段可及具有相应受体的细胞结合，发挥不同的生物学作用：细胞结合，发挥不同的生物学作用：（1 1）介导）介导）介导）介导 型变态反应型变态反应型变态反应型变态反应 IgE及嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面及嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲和高亲和力受体力受体FcRI结合，发生脱颗粒，引起结合，发生脱颗粒，引起型变态型变态反应。反应。83、结合Fc受体(Combined Fc receptor（2）调理吞噬作用）调理吞噬作用抗抗体体在在抗抗原原颗颗粒粒及及吞吞噬噬细细胞胞之之间间“搭搭桥桥”，加强了吞噬细胞的吞噬作用；，加强了吞噬细胞的吞噬作用；抗抗体体及及相相应应颗颗粒粒性性抗抗原原接接合合后后，改改变变抗抗原原表表面面电电荷荷，降降低低吞吞噬噬细细胞胞及及抗抗原原之之间间的的静静电电斥斥力；力；抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质；抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质；吞吞噬噬细细胞胞FcR结结合合抗抗原原抗抗体体复复合合物物后后，吞吞噬噬细胞可被活化。细胞可被活化。9（2）调理吞噬作用9（3）发挥抗体依赖的细胞介导的细）发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（胞毒作用（ADCC作用）当作用）当IgG抗体抗体及带有相应抗原靶细胞结合后，可及及带有相应抗原靶细胞结合后，可及嗜中性粒嗜中性粒C、单核、单核C、巨嗜、巨嗜C、NKC等效应等效应C结合，发挥结合，发挥ADCC作用。作用。10（3）发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC作用）当I4、通过胎盘（、通过胎盘（Through placenta）在人类，在人类，IgG是唯一可通过胎盘从是唯一可通过胎盘从母体转移给胎儿的母体转移给胎儿的Ig，是一种重要的，是一种重要的自然被动免疫，对于新生儿抗感染有自然被动免疫，对于新生儿抗感染有重要作用。重要作用。114、通过胎盘（Through placenta）11三、抗体分子的治疗作用（三、抗体分子的治疗作用（Cure effect of Ab）各种抗体被广泛地应用于疾病的的诊断、预防及治各种抗体被广泛地应用于疾病的的诊断、预防及治疗，在体外诊断上，用于检测各种抗原，包括感染性疗，在体外诊断上，用于检测各种抗原，包括感染性病原体抗原、血清肿瘤可溶性抗原、细胞表面抗原、病原体抗原、血清肿瘤可溶性抗原、细胞表面抗原、受体、激素、神经递质、细胞因子等。肿瘤检测方面，受体、激素、神经递质、细胞因子等。肿瘤检测方面，同位素标记的单克隆抗体可及肿瘤组织表面的抗原结同位素标记的单克隆抗体可及肿瘤组织表面的抗原结合，起到免疫扫描、免疫成像的作用，优于超声波和合，起到免疫扫描、免疫成像的作用，优于超声波和核磁共振。在预防方面，抗体主要可用于感染性疾病核磁共振。在预防方面，抗体主要可用于感染性疾病的预防，如流感、乙肝等。本节将着重介绍抗体的治的预防，如流感、乙肝等。本节将着重介绍抗体的治疗作用。疗作用。12三、抗体分子的治疗作用（Cure effect of Ab）1、抗体的治疗机制、抗体的治疗机制Cure mechanism of Ab（1）中和作用）中和作用(Neutrilization)用于感染性疾病，使病原体或其产生的毒素用于感染性疾病，使病原体或其产生的毒素丧失致病力。丧失致病力。（2）示踪或导向作用）示踪或导向作用Tracer or targeted effect 使使及及其其相相连连的的功功能能性性分分子子特特异异性性地地激激活活或或封封闭、破坏靶细胞或靶分子。闭、破坏靶细胞或靶分子。131、抗体的治疗机制Cure mechanism of Ab（3）竞竞争争性性抑抑制制作作用用/拮拮抗抗作作用用（Competitive inhibition）及及体体内内产产生生或或体体外外进进入入的的物物质质结结合合，阻阻止止其其及及靶靶分子作用产生毒性损害。分子作用产生毒性损害。（4）抗抗体体依依赖赖性性细细胞胞介介导导的的细细胞胞毒毒效效应应（Ab dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）及及补补体体 依依 赖赖 性性 细细 胞胞 溶溶 解解 作作 用用（Complementarity dependent cytolysis，CDC）。）。（5）通通过过内内影影像像作作用用模模拟拟抗抗原原，使使疫疫苗苗更更具具安安全全性性及广泛性。及广泛性。14（3）竞争性抑制作用/拮抗作用（Competitive in2、抗体的治疗应用（、抗体的治疗应用（Cure application of Ab）随着抗体制备技术的进步，治疗随着抗体制备技术的进步，治疗性抗体已逐渐从实验室走向临床，性抗体已逐渐从实验室走向临床，并在多种疾病的治疗方面展示了光并在多种疾病的治疗方面展示了光辉的前景。辉的前景。152、抗体的治疗应用（Cure application of（1）抗肿瘤作用（）抗肿瘤作用（Anti-tumor）由于多克隆抗体本身的局限性，所以直到单克隆由于多克隆抗体本身的局限性，所以直到单克隆抗体出现，抗体用于抗肿瘤治疗才真正得以实现，抗体出现，抗体用于抗肿瘤治疗才真正得以实现，自从自从1978年成功制备第一株抗黑色素瘤单抗以来，年成功制备第一株抗黑色素瘤单抗以来，出现了抗胃肠癌、肺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、出现了抗胃肠癌、肺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、神经胶质瘤等的单克隆抗体，并于胰腺癌、神经胶质瘤等的单克隆抗体，并于1980年年首次在美国开展了单克隆抗体肿瘤治疗的临床试验。首次在美国开展了单克隆抗体肿瘤治疗的临床试验。1983年年Miller等报道了一例经单克隆抗体治疗的等报道了一例经单克隆抗体治疗的淋巴瘤患者，在放疗、化疗及干扰素治疗后，使用淋巴瘤患者，在放疗、化疗及干扰素治疗后，使用单克隆抗体治疗存活超过了单克隆抗体治疗存活超过了4年。年。16（1）抗肿瘤作用（Anti-tumor）16单克隆抗体杀伤肿瘤细胞的机制可能是：单克隆抗体杀伤肿瘤细胞的机制可能是：抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（ADCC）及补体依赖性细胞溶解作用（及补体依赖性细胞溶解作用（CDC）。）。单单克克隆隆抗抗体体及及药药物物、毒毒素素或或放放射射性性物物质质偶偶联联，成为一种全新的成为一种全新的“生物导弹生物导弹”，可用于导向治疗。，可用于导向治疗。单单抗抗给给予予T细细胞胞所所必必需需的的重重要要表表面面信信号号分分子子交交联联的的刺刺激激信信号号和和生生长长信信号号，体体外外诱诱导导肿肿瘤瘤特特异异性性细细胞胞 毒毒 T淋淋 巴巴 细细 胞胞（tumor specific cytolytic T lymphocytes，TS-CTLs）可可用用于于特特异异性性、被被动动性性的免疫治疗。的免疫治疗。17单克隆抗体杀伤肿瘤细胞的机制可能是：17（2）抗感染作用（）抗感染作用（Anti-infection）应用疫苗、免疫球蛋白，预防和治疗感应用疫苗、免疫球蛋白，预防和治疗感染性疾病，但对不能获得相应疫苗的病毒染性疾病，但对不能获得相应疫苗的病毒感染，感染，AIDS及一些危重情况，如内毒素休及一些危重情况，如内毒素休克等则无效。克等则无效。被动抗体疗法主要机制是中和病毒，并被动抗体疗法主要机制是中和病毒，并已证明抗体在体外及体内中和病毒的效应已证明抗体在体外及体内中和病毒的效应不依赖于不依赖于Fc介导介导 的功能和双价的存在，但的功能和双价的存在，但可能受抗体亲和力影响。可能受抗体亲和力影响。18（2）抗感染作用（Anti-infection）18体外无中和病毒作用的抗体外无中和病毒作用的抗Gag单抗在体单抗在体内试验中表现出预防及治疗效应，显著内试验中表现出预防及治疗效应，显著延迟了疾病的发作，降低了中枢神经系延迟了疾病的发作，降低了中枢神经系统的病毒水平，且及剂量相关，呈单间统的病毒水平，且及剂量相关，呈单间依赖性。这些结果提示非中和性抗体的依赖性。这些结果提示非中和性抗体的效应及病毒感染的细胞表面表达效应及病毒感染的细胞表面表达Gag蛋蛋白有关，但机制不清。白有关，但机制不清。19体外无中和病毒作用的抗Gag单抗在体内试验中表现出预防及治疗（3）抗抗器器官官移移植植排排斥斥反反应应（Anti-repelling of organ transplant）抗体主要通过阻断异体抗原的识别及排斥途抗体主要通过阻断异体抗原的识别及排斥途径和分子机制中的某一环节，产生免疫抑制效径和分子机制中的某一环节，产生免疫抑制效应，预防排斥反应发生。应，预防排斥反应发生。Tc共有的分化抗原共有的分化抗原CD3（Cluster of differentiation）分子及）分子及IL-2R 对对T细胞的活化、细胞的活化、增殖起重要作用，因此抗增殖起重要作用，因此抗CD3及抗及抗IL-2R工程工程抗体的研究较为多见。抗体的研究较为多见。20（3）抗器官移植排斥反应（Anti-repelling of（4）抗抗 血血 栓栓 形形 成成（Anti-formation of thrombus）封封闭闭血血小小板板糖糖蛋蛋白白b/a 整整合合素素受受体体，是是血血栓栓性疾病治疗上的突破（性疾病治疗上的突破（Tubeliverst，1999）。）。近近年年来来许许多多关关于于抗抗GPb/a单单抗抗C7E3的的研研究究表表明明，C7E3能能对对90%以以上上的的受受体体产产生生阻阻断断效效应应，减减 少少 了了 35%高高 危危 的的 经经 皮皮 腔腔 冠冠 脉脉 介介 入入 治治 疗疗（PTCA）后后缺缺血血性性并并发发症症及及27%6个个月月内内的的临临床床再再狭狭窄窄的的发发生生，并并证证明明C7E3能能预预防防动动脉脉但但不不能能预预防静脉的血栓再形成。防静脉的血栓再形成。21（4）抗血栓形成（Anti-formation of thr（5）解毒（）解毒（Detoxicating）对药物或动物毒素中毒患者，免疫治疗是应对药物或动物毒素中毒患者，免疫治疗是应用抗该药物或毒素特异性抗体或其片段。抗体用抗该药物或毒素特异性抗体或其片段。抗体及毒素形成复合物，改变了毒素的药物动力学，及毒素形成复合物，改变了毒素的药物动力学，使毒素及受体解离，从其结合部位呈梯度流出，使毒素及受体解离，从其结合部位呈梯度流出，进入血循环中。进入血循环中。这种方法对强心苷中毒有明确疗效。基因工这种方法对强心苷中毒有明确疗效。基因工程抗体对百草枯及蛇毒中毒也有一定作用。程抗体对百草枯及蛇毒中毒也有一定作用。22（5）解毒（Detoxicating）22（6）构构 建建 抗抗 独独 特特 型型 抗抗 体体 疫疫 苗苗（Constuction of anti-idiotype vaccine）抗抗独独特特型型抗抗体体在在结结构构和和功功能能上上均均能能模模拟拟抗抗原原（内内影影像像作作用用）而而发发挥挥效效应应。据据此此构构建建的的独独特特型型疫疫苗苗模模拟拟肿肿瘤瘤相相关关蛋蛋白白抗抗原原，能诱导抗肿瘤免疫反应。能诱导抗肿瘤免疫反应。23（6）构建抗独特型抗体疫苗（Constuction of a（7）在自身免疫性疾病及变态反应性）在自身免疫性疾病及变态反应性疾病中的应用疾病中的应用自身免疫病多及单或寡克隆抗体的异常增自身免疫病多及单或寡克隆抗体的异常增多有关。多有关。利用基因工程技术制备针对这些异常抗体利用基因工程技术制备针对这些异常抗体独特型的抗抗体或及自身抗体结合并抑制其独特型的抗抗体或及自身抗体结合并抑制其作用；或制备能模拟抗原的内影像抗体用于作用；或制备能模拟抗原的内影像抗体用于中和体内的自身抗体。针对不同发病机制，中和体内的自身抗体。针对不同发病机制，治疗方法趋于多样化。治疗方法趋于多样化。24（7）在自身免疫性疾病及变态反应性疾病中的应用24n 许许多多变变态态反反应应及及IgE有有关关。Fc片片段段可可及及变变应应原原特特异异性性IgE竞竞争争结结合合嗜嗜碱碱性性粒粒细细胞胞，封封闭闭变变应应原原介介导导的的组组胺胺释释放放。还还可可生生产产出出及及患患者者IgE竞竞争争结结合合变变应应原原的的Fab样分子。样分子。25 许多变态反应及IgE有关。Fc片段可及变应原特异性IgE第二节第二节 抗体的分类、结构、功能特点抗体的分类、结构、功能特点（Class、structure and function of Ab）一、抗体的分类（一、抗体的分类（Class）抗体分为单克隆抗体、多克隆抗体及基因工抗体分为单克隆抗体、多克隆抗体及基因工程抗体三类。程抗体三类。26第二节 抗体的分类、结构、功能特点26（一）多克隆抗体（一）多克隆抗体(Polyclone Ab）传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经各种途径免疫动物，由于抗原物质具有多种各种途径免疫动物，由于抗原物质具有多种抗原决定簇，可刺激机体产生多种抗体形成抗原决定簇，可刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体分泌到血清或体液中，在其血清中是含多种分泌到血清或体液中，在其血清中是含多种抗体的混合物，称为抗体的混合物，称为多克隆抗体，是第一代多克隆抗体，是第一代抗体抗体。精制破伤风抗毒素就是一例。精制破伤风抗毒素就是一例。27（一）多克隆抗体(Polyclone Ab）27（二）单克隆抗体（二）单克隆抗体（Monoclone Ab）识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，称之为的均一性抗体，称之为单克隆抗体单克隆抗体。p其其特异性高、亲和力强、效价高、血清交叉特异性高、亲和力强、效价高、血清交叉反应少反应少等优点，已经在基础研究、临床诊断及等优点，已经在基础研究、临床诊断及治疗、免疫预防等领域发挥了重要作用。近年治疗、免疫预防等领域发挥了重要作用。近年来用单抗及核素、各种毒素或药物偶联或基因来用单抗及核素、各种毒素或药物偶联或基因重组制备成导向药物，用于肿瘤的治疗成为研重组制备成导向药物，用于肿瘤的治疗成为研究的重点。究的重点。28（二）单克隆抗体（Monoclone Ab）28p在在治治疗疗中中应应用用的的单单抗抗，分分两两种种形形式式：一一种种是是全全抗抗，另另一一种种是是其其酶酶解解片片段段，由由于于治治疗疗用用的的单单抗抗均均非非人人源源的的，所所以以去去除除Fc段段的的酶酶解解片片段段可可以以降降低低抗抗原原性性，减少人抗鼠反应，主要用于导向治疗减少人抗鼠反应，主要用于导向治疗。29在治疗中应用的单抗，分两种形式：一种是全抗，另一种是其酶解片1、木瓜蛋白酶的水解片段、木瓜蛋白酶的水解片段（1）裂解部位：）裂解部位：IgG铰链区铰链区H链链间二链链间二硫键近硫键近N端侧切断。端侧切断。（2）裂解片段：）裂解片段：两个两个Fab段（抗原结合段）段（抗原结合段）一个一个Fc段（可结晶段）段（可结晶段）301、木瓜蛋白酶的水解片段302、蛋白酶的水解片段、蛋白酶的水解片段（1）裂解部位：铰链区）裂解部位：铰链区H链链间二硫键近链链间二硫键近C端切端切（2）裂解片段：）裂解片段：F（ab）/2包包括括一一对对完完整整的的L链链和和由由链链间间二二硫硫键键相相连连一一对对略略大大于于Fab中中Fd的的H链链，称称为为Fd/含含235个个氨氨基基酸酸残残基基；F（ab）/2具具有有双双价价抗抗体体活活性。性。Fc可可继继续续被被胃胃蛋蛋白白酶酶消消化化成成更更小小的的片片段段，失失去去其生物学活性。其生物学活性。312、蛋白酶的水解片段313232应用单克隆抗体全抗或酶解片段在动物试验应用单克隆抗体全抗或酶解片段在动物试验及临床试验中已经取得了较为良好的结果，一及临床试验中已经取得了较为良好的结果，一些实验结果报告如下：些实验结果报告如下：p 131I-CMU72在人胃癌细胞系在人胃癌细胞系MGC80-3裸鼠移植模型的导向裸鼠移植模型的导向治疗中显示有明显的抑制作用，且清除率低，显像时间长，治疗中显示有明显的抑制作用，且清除率低，显像时间长，提示在胃癌临床导向研究上将有光辉的应用前景。提示在胃癌临床导向研究上将有光辉的应用前景。p131I标记抗人扁豆凝聚素结合型甲胎蛋白异质性抗体（标记抗人扁豆凝聚素结合型甲胎蛋白异质性抗体（AFP-R-LCA-McAb）后，在裸鼠实验性肝癌模型中获得良好的治）后，在裸鼠实验性肝癌模型中获得良好的治疗效果，疗效果，85%的肿瘤生长明显抑制，表明的肿瘤生长明显抑制，表明AFP-R-LCA-McAb对人肝癌细胞有较高的特异性和亲和力，有希望成为肝癌放对人肝癌细胞有较高的特异性和亲和力，有希望成为肝癌放免治疗的理想载体。免治疗的理想载体。33应用单克隆抗体全抗或酶解片段在动物试验及临床试验中已经取得了抗淋巴细胞单克隆抗体（抗淋巴细胞单克隆抗体（SALM）治疗恶性淋巴）治疗恶性淋巴瘤临床试验显示对非何杰金氏淋巴瘤疗效显著，可瘤临床试验显示对非何杰金氏淋巴瘤疗效显著，可能及抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用有关，另外能及抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用有关，另外可能由于可能由于SALM对此类淋巴瘤有特异性疗效。对此类淋巴瘤有特异性疗效。抗绿脓杆菌单抗进行保护小鼠抗绿脓杆菌感染实抗绿脓杆菌单抗进行保护小鼠抗绿脓杆菌感染实验中作外敷治疗，证明可显著增强人体中性粒细胞验中作外敷治疗，证明可显著增强人体中性粒细胞对绿脓杆菌的吞噬，应用于烧伤创面抗绿脓杆菌感对绿脓杆菌的吞噬，应用于烧伤创面抗绿脓杆菌感染获得满意效果，且未见过敏反应。染获得满意效果，且未见过敏反应。34抗淋巴细胞单克隆抗体（SALM）治疗恶性淋巴瘤临床试验显示对抗抗人人脑脑胶胶质质瘤瘤单单抗抗S2-39及及阿阿霉霉素素结结合合、胃胃癌癌单单抗抗3H11及及丝丝裂裂霉霉素素交交联联及及抗抗人人胰胰腺腺癌癌YPC3单单抗抗介介导导的的LAK细细胞胞体体外外、体体内内的的试试验验也也均均显显示示较较好好的的结结果果。单单克克隆隆抗抗体体具具有有许许多多优优点点，但但其本身也其本身也存在一些问题存在一些问题。35抗人脑胶质瘤单抗S2-39及阿霉素结合、胃癌单抗3H11及丝（1 1）单克隆抗体的免疫原性）单克隆抗体的免疫原性 l由于人由于人/人杂交瘤技术还存在很难人杂交瘤技术还存在很难克服的障碍，目前绝大多数单克隆抗体克服的障碍，目前绝大多数单克隆抗体为鼠源性，因此对人体仍有较强的免疫为鼠源性，因此对人体仍有较强的免疫原性，使用后可产生人抗鼠抗体，从而原性，使用后可产生人抗鼠抗体，从而干扰了单克隆抗体在体内的合理分布，干扰了单克隆抗体在体内的合理分布，重复使用会降低抗体疗效或发生超敏反应。重复使用会降低抗体疗效或发生超敏反应。36（1）单克隆抗体的免疫原性 36（2 2）半衰期短）半衰期短 杂杂交交瘤瘤制制备备的的单单克克隆隆抗抗体体半半衰衰期期一一般般较较短短，不不利于其发挥生物学效应。利于其发挥生物学效应。（3 3）靶吸收差）靶吸收差 单单克克隆隆为为完完整整的的抗抗体体分分子子，相相对对分分子子质质量量很很大大，很很难难通通过过血血管管进进入入细细胞胞间间隙隙，因因此此在在靶靶部部位位（特特别别是是肿肿瘤瘤），单单克克隆隆抗抗体体的的摄摄取取量量非非常常低低，大大大大降降低低了了治治疗疗效效果果。酶酶解解片片段段较较全全抗抗在在这这方方面面有有所所改善。改善。（4 4）生产复杂，价格昂贵）生产复杂，价格昂贵 37（2）半衰期短 37（三）基因工程抗体（三）基因工程抗体（Gene Engineering Ab）目前绝大多数单克隆抗体是鼠源的，临床重复给药目前绝大多数单克隆抗体是鼠源的，临床重复给药时体内产生抗鼠抗体，使临床疗效减弱或消失。时体内产生抗鼠抗体，使临床疗效减弱或消失。因此，临床应用理想的单克隆抗体应是人源的，但因此，临床应用理想的单克隆抗体应是人源的，但人人人杂交瘤技术目前未突破，即使研制成功，也还人杂交瘤技术目前未突破，即使研制成功，也还存在人存在人人杂交瘤体外传代不稳定，抗体亲和力低及人杂交瘤体外传代不稳定，抗体亲和力低及产量不高等问题。较好的解决办法是研制基因工程抗产量不高等问题。较好的解决办法是研制基因工程抗体，以代替鼠源单克隆抗体。体，以代替鼠源单克隆抗体。38（三）基因工程抗体（Gene Engineering Ab）基因工程抗体兴起于基因工程抗体兴起于20世纪世纪80年代早期。这一技年代早期。这一技术是将对抗体基因结构及功能的了解及术是将对抗体基因结构及功能的了解及DNA重组技重组技术相结合，根据研究者的意图在基因水平对抗体分术相结合，根据研究者的意图在基因水平对抗体分子进行切割、拼接或修饰，甚至人工全合成后导入子进行切割、拼接或修饰，甚至人工全合成后导入受体细胞表达，产生新型抗体，也称受体细胞表达，产生新型抗体，也称第三代抗体第三代抗体。本章将分四个部分本章将分四个部分：鼠单克隆抗体的人源化、小：鼠单克隆抗体的人源化、小分子抗体、特殊类型的基因工程抗体、人源性抗体，分子抗体、特殊类型的基因工程抗体、人源性抗体，对基因工作抗体的原理、制备及近年的进展加以详对基因工作抗体的原理、制备及近年的进展加以详细介绍。细介绍。39基因工程抗体兴起于20世纪80年代早期。这一技术是将对抗体基1、鼠单克隆抗体的人源化、鼠单克隆抗体的人源化（Humanization of Mouse McAb）鼠单克隆抗体的人源化，就是为克服鼠源鼠单克隆抗体的人源化，就是为克服鼠源McAb的免疫原性而将其进行改造，使之和人体的免疫原性而将其进行改造，使之和人体内的抗体分子具有极其相似的轮廓，从而逃避人内的抗体分子具有极其相似的轮廓，从而逃避人免疫系统的识别，避免诱导人抗鼠免疫反应。免疫系统的识别，避免诱导人抗鼠免疫反应。因而抗体的人源化有两个基本的原则：保持或因而抗体的人源化有两个基本的原则：保持或提高抗体的亲和力和特异性；大大降低或消除抗提高抗体的亲和力和特异性；大大降低或消除抗体的免疫原性。体的免疫原性。401、鼠单克隆抗体的人源化（Humanization of M第一代人源化抗体第一代人源化抗体是将鼠是将鼠McAb的可变区的可变区和人抗体的恒定区组成嵌合抗体（和人抗体的恒定区组成嵌合抗体（Billeta 1993）。其独特的抗原亲和力保持得很好，）。其独特的抗原亲和力保持得很好，但因为有鼠单抗可变区的存在，仍有强烈的但因为有鼠单抗可变区的存在，仍有强烈的HAMA反应。（人抗鼠抗体反应）反应。（人抗鼠抗体反应）41第一代人源化抗体是将鼠McAb的可变区和人抗体的恒定区组成嵌 进进一一步步将将鼠鼠McAb可可变变区区中中相相对对保保守守的的FR按按成成人人的的FR框框架架区区（frame-work region），仅仅仅仅保保留留抗抗原原结结合合部部位位CDR（即即CDR移移植植互互补补决决定定区区），这这才才是是真真正正意意义义上上的的抗抗体体人人源源化化，该该种种抗抗体体又又称称为为CDR移植抗体或改型抗体。移植抗体或改型抗体。42 进一步将鼠McAb可变区中相对保守的FR按成（1）人）人-鼠嵌合抗体（鼠嵌合抗体（Human-mouse Chimeric Ab）由于人抗鼠免疫反应（由于人抗鼠免疫反应（HAMA）90%是针对是针对C区的，区的，因此设计用人因此设计用人C区替代鼠区替代鼠C（constant）区，则可能使）区，则可能使鼠源性单克隆抗体的免疫原性明显减弱。鼠源性单克隆抗体的免疫原性明显减弱。嵌合抗体的基本原理就是从分泌某种鼠单克隆抗体嵌合抗体的基本原理就是从分泌某种鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠IgV区基因，经基因重组及人区基因，经基因重组及人IgC 区基因按一定方式区基因按一定方式相拼接，克隆到表达载体中构建鼠相拼接，克隆到表达载体中构建鼠/人嵌合的轻重链人嵌合的轻重链基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体。异性嵌合抗体。43（1）人-鼠嵌合抗体（Human-mouse Chimeri通过构建嵌合抗体，用人通过构建嵌合抗体，用人C区取代鼠区取代鼠C区，可区，可以较好解决鼠源性单克隆抗体诱发以较好解决鼠源性单克隆抗体诱发HAMA等不等不良反应，延长单克隆抗体的半衰期，改善单克良反应，延长单克隆抗体的半衰期，改善单克隆抗体的药物动力学。隆抗体的药物动力学。嵌合抗体已经用于抗肿嵌合抗体已经用于抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫等疾病的治疗，并已瘤、抗感染、抗自身免疫等疾病的治疗，并已显示出良好的治疗效果。显示出良好的治疗效果。嵌合抗体诱发嵌合抗体诱发HAMA率仍较高，在导向诊断、导向治疗等方面的应率仍较高，在导向诊断、导向治疗等方面的应用将会受到限制。用将会受到限制。44通过构建嵌合抗体，用人C区取代鼠C区，可以较好解决鼠源性单克u嵌嵌合合抗抗体体已已经经用用于于治治疗疗黑黑色色素素转转移移瘤瘤，该该抗抗体体含含有有人人IgG1链链C区区及及鼠鼠V区区14.18，可可特特异异识识别别神神经经母母细细胞胞瘤瘤及及黑黑色色素素瘤瘤表表面面的的GD2糖糖脂脂。大大部部分分患患者者症症状状得得到到完完全全或或部部分分缓缓解解，也也出出现现了了一一些些副副作作用用，如如关关节节痛痛、瘙瘙痒痒、短短时时瞳瞳孔孔反反应应消消失失等等。一一些些嵌嵌合合抗抗体体分分别别用用于于胰胰腺腺癌癌、结结肠肠癌癌、乳乳腺腺癌癌、卵卵巢巢癌癌、骨骨髓髓瘤瘤、急急性性白白血血病病等的治疗，证明嵌合抗体有较好的抗肿瘤活性。等的治疗，证明嵌合抗体有较好的抗肿瘤活性。45嵌合抗体已经用于治疗黑色素转移瘤，该抗体含有人IgG1链C（2）改型抗体（）改型抗体（Human ization Antibody人源化人源化Ab）又称人源化抗体，尽管绝大多数又称人源化抗体，尽管绝大多数HAMA反应是反应是针对针对C区的，但有些单克隆抗体如区的，但有些单克隆抗体如OKT3用于人用于人体时，其体时，其HAMA反应则主要是针对反应则主要是针对V区的，如果区的，如果再把嵌合抗体的鼠再把嵌合抗体的鼠FR区替换成人区替换成人FR区，则可能区，则可能减少单克隆抗体的免疫原性。研究指出，抗体及减少单克隆抗体的免疫原性。研究指出，抗体及抗原结合的特异性和亲和力主要取决于其抗原结合的特异性和亲和力主要取决于其V区的区的6个互补个互补CDR区（互补区（互补Ag决定区）。决定区）。46（2）改型抗体（Human ization Antibodyn 如如果果把把人人单单克克隆隆抗抗体体的的CDR区区置置换换成成鼠鼠单单克克隆隆抗抗体体CDR区区，这这样样的的重重组组抗抗体体的的人人源源化化可可达达97%，在在保保留留鼠鼠源源单单克克隆隆抗抗体体特特异异性性及及亲亲和和力力的的同同时时，又又可可大大大大降降低低单单克克隆隆抗抗体体的的免疫原性，发挥更佳疗效。免疫原性，发挥更佳疗效。n但但是是，由由于于人人源源化化抗抗体体的的构构建建需需要要替替换换CDR区区，而而且且还还得得预预先先得得到到抗抗体体基基因因序序列列，技术相当复杂。技术相当复杂。47 如果把人单克隆抗体的CDR区置换成鼠单克隆抗体CDR区，这抗肿瘤治疗抗肿瘤治疗:人源化抗人源化抗CDw52抗体用于治疗两例非何杰抗体用于治疗两例非何杰金氏淋巴瘤，金氏淋巴瘤，43d后仍未发生后仍未发生HAHA反应，反应，血液及骨髓中的淋巴瘤细胞全部消失，脾肿血液及骨髓中的淋巴瘤细胞全部消失，脾肿大消退，且不抑制骨髓的正常增殖，在治疗大消退，且不抑制骨髓的正常增殖，在治疗白血病的临床试验中表明，抗体无明显的毒白血病的临床试验中表明，抗体无明显的毒性及抗原性。性及抗原性。48抗肿瘤治疗:48抗类风湿性关节炎抗类风湿性关节炎:人人源源化化抗抗体体可可用用于于RARA的的临临床床治治疗疗，但但具具有有轻轻度度到到中中度度的的毒毒性性，且且只只能能短短暂暂改改善善RARA症症状状，说说明明尚尚需需进进一一步步的的改改进。进。49抗类风湿性关节炎:49抗移植反应抗移植反应:人人源源化化抗抗体体，包包括括IL-2T，抗抗CD3等等抗抗体体已已经经用用于于抗抗移移植植反反应应这这方方面面的的治治疗疗。抗抗IL-2R人人源源化化抗抗体体抗抗-Tac-H 用用于于食食蟹蟹猴猴异异体体心心脏脏移移植植，表表明明抗抗-Tac-H是是一一种种较较理理想想的的抗抗排排斥斥反反应应物物，CD3抗抗体体也也同同样样具具有有抗移植反应的作用。抗移植反应的作用。50抗移植反应:50抗病毒抗病毒:人源化抗人源化抗HSV gB及及gD糖蛋白抗体的亲糖蛋白抗体的亲和力，中和和力，中和HSV以及细胞保护力等明显以及细胞保护力等明显高于其亲本单克隆抗体，如人源化的抗高于其亲本单克隆抗体，如人源化的抗RSV抗体抗体RSHZ19。保护性明显优于人免。保护性明显优于人免疫血清球蛋白。疫血清球蛋白。51抗病毒:51抗抗TNF:人人源源化化抗抗TNF-抗抗体体Mab780具具有有部部分分中中和和TNF-能能力力，并并能能竞竞争争性性拮拮抗抗其其亲亲本本单单克隆抗体或嵌合抗体对克隆抗体或嵌合抗体对TNF-的结合。的结合。抗过敏反应抗过敏反应:人人源源化化抗抗IgE MaE11抗抗体体已已经经显显示示了了这这方面的能力。方面的能力。52抗TNF:522、小分子抗体（、小分子抗体（Small Molecular Ab）完整的抗体分子，相对分子质量较大，难以完整的抗体分子，相对分子质量较大，难以穿过血管壁，影响了靶部位对其的摄取。特别穿过血管壁，影响了靶部位对其的摄取。特别是肿瘤细胞，血供本来就不丰富，对抗体的摄是肿瘤细胞，血供本来就不丰富，对抗体的摄取量就更少了。取量就更少了。因此对抗体分子进行改造，使之成为小分子因此对抗体分子进行改造，使之成为小分子抗体。抗体。小分子抗体可分为小分子抗体可分为Fab抗体、单链抗体、单抗体、单链抗体、单域抗体、超变区多肽等四种。域抗体、超变区多肽等四种。532、小分子抗体（Small Molecular Ab）53（1）Fab抗体抗体l 抗抗体体的的Fab段段由由重重链链V区区（VH）及及CH1功功能能区区及及轻轻链链间间以以二二硫硫键键形形式式连连接接而而成成，主主要要发发挥挥抗抗体体的的抗抗原结合功能。原结合功能。lFab抗抗体体是是对对Fab段段进进行行改改造造而而获获得得的的基基因因工工程程抗抗体体。即即将将抗抗体体分分子子的的重重链链VH区区和和CH1功功能能区区的的cDNA及及轻轻链链完完整整的的cDNA连连接接在在一一起起，克克隆隆到到适适当当的的表表达达载载体体后后，在在大大肠肠杆杆菌菌等等宿宿主主中中表表达达出出有有特特异异性性抗抗原原结结合合能能力力的的Fab抗抗体体。Fab抗抗体体大大小小只只有有完完整整IgG的的1/3。下下面面介介绍绍几几个个已已应应用用于于临临床床试试验验的的治疗性治疗性Fab抗体。抗体。54（1）Fab抗体54抗地高辛抗地高辛Fab抗体抗体:具有明显的抗地高辛中毒作用，可用于洋地具有明显的抗地高辛中毒作用，可用于洋地黄中毒患者，可恢复房室传导阻滞。黄中毒患者，可恢复房室传导阻滞。抗去郁敏抗去郁敏Fab抗体抗体:在去郁敏（在去郁敏（desipramine，DMI）心肌中毒）心肌中毒的小鼠模型中应用羊抗去郁敏的小鼠模型中应用羊抗去郁敏Fab后，可明显后，可明显改善改善QRS间隙时间及心率，而且大剂量的效果间隙时间及心率，而且大剂量的效果更佳。更佳。55抗地高辛Fab抗体:55抗血小板抗血小板GPIIbII/IIIa受体受体Fab抗体：抗体：用用不不同同剂剂量量的的抗抗血血小小板板GPIIbIIIa受受体体Fab m7E3抗抗体体治治疗疗稳稳定定型型心心绞绞痛痛患患者者，发发现现Fab抗抗体以依赖性方式抑制血小板凝聚。体以依赖性方式抑制血小板凝聚。抗抗HSV Fab抗体：抗体：抗抗HSV Fab19可可特特异异识识别别多多株株不不同同的的HSV-1及及HSV-2.有有100%的中和作用。的中和作用。56抗血小板GPIIbII/IIIa受体Fab抗体：56（2）单链抗体（）单链抗体（Single chain Ab）在重链在重链V区区cDNA3端（端（VH端）及轻链端）及轻链V区区cDNA5端（端（VL端）之间，用一寡聚核苷酸接头端）之间，用一寡聚核苷酸接头（linker，14-25个个aa为宜）连接成单链可变区为宜）连接成单链可变区基因片段，表达出一具有抗原结合能力的单链基因片段，表达出一具有抗原结合能力的单链抗体多肽，其大小只为完整抗体的抗体多肽，其大小只为完整抗体的1/6。应用现。应用现状简介如下：状简介如下：57（2）单链抗体（Single chain Ab）57放射免疫疗法放射免疫疗法 放放射射性性免免疫疫疗疗法法的的原原理理及及体体内内成成像像相相似似，必必须须有有足足够够量量的的放放射射性性标标ScFv（单单链链可可变变区区片片段段）定定位位于于靶靶部部位位，达达到到发发挥挥放放射射性性治治疗疗的的水水平平。ScFv的的快快速速清清除除使使非非结结合合的的放放射射性性标标记记ScFv迅迅速速排排出出，这这也也是是ScFv有有别别及及Fab片段的重要优点之一。片段的重要优点之一。58放射免疫疗法 58免疫毒素治疗免疫毒素治疗 ScFv免免疫疫毒毒素素的的细细胞胞毒毒作作用用有有时时比比化化学学合合成成的的免免疫疫毒毒素素高高15100倍倍以以上上，其其他他效效应应功功能能区区可可及及ScFv-毒毒素素融融合合，加加强强靶靶细细胞的杀伤作用。胞的杀伤作用。59免疫毒素治疗59体内药物解毒作用体内药物解毒作用 由于由于ScFv的清除率比的清除率比Fab快，因此快，因此ScFv可能具可能具有更强的解毒作用，如有更强的解毒作用，如26-10ScFv可用于治疗地高可用于治疗地高辛中毒。辛中毒。ScFv作为小分子抗体，保留了亲本单克隆抗体结作为小分子抗体，保留了亲本单克隆抗体结合抗原的特异性，又使其抗原性大大降低，其药物合抗原的特异性，又使其抗原性大大降低，其药物动力学优于动力学优于Fab抗体或抗体或IgG等完整抗体。等完整抗体。ScFv相对相对分子质量很小，能有效进入完整抗体无法到达的靶分子质量很小，能有效进入完整抗体无法到达的靶部位，如病毒的部位，如病毒的“峡谷峡谷”部位及肿瘤内部部位及肿瘤内部ScFv。60体内药物解毒作用 60VHcDNA3端VLcDNA5端 +寡核苷酸 linker 重组DNA+分子载体（vector）限制酶连接酶体外重组DNA分子 转化E.coli表达ScAb 单链抗体的制备流程图单链抗体的制备流程图61VHcDNA3端+寡核苷酸 linker 重组DNA（3）单域抗体（）单域抗体（Single domain Ab）抗抗体体结结合合抗抗原原主主要要由由V区区决决定定，只只含含有有V区区基基因因片片段段表表达达的的小小分分子子抗抗体体，即即只只有有VH 或或VL 一一个个功功能能结结构构域域，也也能能保保持持原原单单克克隆隆抗抗体体的的特特异异性性。这这种种小小分分子子就就称称为为单单域域抗抗体体（single domain antibody），其其相相对对分分子子质质量量仅仅为为完完整整抗抗体体分分子子的的1/12，故故也也称称之之为为小小抗抗体。体。62（3）单域抗体（Single domain Ab）62 单单域域抗抗体体仅仅有有一一个个结结构构域域，制制备备相相当当简简单单，表表达达出出有有活活性性的的抗抗体体片片段段，因因此此也也不不失失为为一一种种有有良良好应用前景的基因工程抗体。好应用前景的基因工程抗体。63 单域抗体仅有一个结构域，制备相当简单，表达及及Fab、ScFv相相比比，单单域域抗抗体体的的相相对对分分子子质质量量更更小小，更更容容易易穿穿过过靶靶组组织织，可可以以阻阻断断病病毒毒表表面面的的“峡峡谷谷”部部位位，加加强强对对实实体体瘤瘤的的渗渗透透，得得到到分分辨辨率率更更高高的的成成像像图图谱谱。但但由由于于VH单单域域抗抗体体不不含含有有VL片片段段，VH的的疏疏水水面面暴暴露露较较大大面面积积，致致使使其其抗抗原原亲亲和和力力大大幅幅度度下下降降，非非特特异异性性吸吸附附有有所所增增加加，因因此此将将单单域域抗抗体体作作为为一一种种治治疗疗性性抗抗体应用还有许多问题要解决。体应用还有许多问题要解决。64及Fab、ScFv相比，单域抗体的相对分子质量更小，更容易穿（4）超超变变区区多多肽肽（hypervariable region polypeptide）抗抗体体结结合合抗抗原原都都要要通通过过CDR来来实实现现，因因此此CDR是抗体结合抗原的最小结构单位。是抗体结合抗原的最小结构单位。经经晶晶体体结结构构等等分分析析，发发现现抗抗体体分分子子中中6个个CDR所所起起的的作作用用是是不不同同的的。可可以以设设计计出出那那些些在在抗抗原原识识别别及及亲亲和和力力方方面面有有重重要要意意义义的的CDR多多肽肽，直直接接用用于于诊断或治疗，可望获得理想的结果。诊断或治疗，可望获得理想的结果。这这种种只只含含有有一一个个CDR多多肽肽的的抗抗体体，就就称称之之为为超超变区多肽（变区多肽（hypervariable region peptide）。）。65（4）超变区多肽（hypervariable region 超超变变区区多多肽肽的的氨氨基基酸酸序序列列及及CDRCDR区区完完全全一一致致，大大小小只只有有16-3016-30个个氨氨基基酸酸，相相对对分分子子质质量量很很小小，对对组组织织细细胞胞具具有有极极强强的的穿穿透透性性，能能达达到到其其他他抗抗体体不不能能到到达达的的部部位位。所所制制备备的的8787、9292、6McAb 6McAb VHVH功功能能区区的的CDR2CDR2多多肽肽，其其特特异异性性及及亲亲代代抗抗体体相相似似，能能及及某某些些细细胞胞表表面面的的呼呼肠肠孤孤病病毒毒IIIIII型型受受体体有有效效结结合合，使使该该受受体体表表达达下下降降，并并抑抑制制细细胞胞内内DNADNA的合成。的合成。66超变区多肽的氨基酸序列及CDR区完全一致，大小只有16-30 超超变变区区多多肽肽可可用用同同位位素素、荧荧光光素素标标记记或或及及毒毒素素、药药物物等等结结合合，用用于于疾疾病病的的诊诊断断及及治治疗疗，已经用于临床检测肿瘤。已经用于临床检测肿瘤。应应该该看看到到，由由于于只只含含有有一一个个CDRCDR区区，它它的的结结合合抗抗原原能能力力是是不不完完全全及及不不稳稳定定的的，其其亲亲和和力力及及非非特特异异性性吸吸附附都都可可能能明明显显增增加加，相相对对分分子子质质量量极极小小，在在体体内内相相当当不不稳稳定定，可可能能还还没没有有完完全全发挥其生物学效应时已被清除。发挥其生物学效应时已被清除。67 超变区多肽可用同位素、荧光素标记或及毒素、药3.3.特殊类型的基因工程抗体特殊类型的基因工程抗体根据构建方式的不同主要分为三种：根据构建方式的不同主要分为三种：双特异性抗体；双特异性抗体；免疫黏连素；免疫黏连素；催化抗体。催化抗体。683.特殊类型的基因工程抗体68（1 1）双双 特特 异异 性性 抗抗 体体（Bispecific Ab，BsAb）天天然然的的抗抗体体分分子子为为双双价价单单特特异异性性，如如果果对对天天然然的的抗抗体体分分子子进进行行改改造造，把把其其他他的的效效应应物物质质如如毒毒素素、酶酶、细细胞胞因因子子、受受体体分分子子通通过过一一定定方方法法及及两两种种杂杂交交抗抗体体FabFab片片段段或或V V区区（VHVH及及VLVL）连连接接起起来来，使使之之即即可可及及靶靶细细胞胞结结合合，又又可可介介导导其其他他一一些些效效应应功功能能，从从而而最最大大限限度度地地杀杀伤伤靶靶细细胞胞。这这种种具具有有双双特特异异性性的的抗抗体体分分子子就称为双特异性抗体或双功能抗体。就称为双特异性抗体或双功能抗体。69（1）双特异性抗体（Bispecific Ab，BsAb）6BsAbBsAb（双双特特异异性性抗抗体体）是是基基因因工工程程抗抗体体研研究究的的重重点点，已已经经构构建建了了大大量量的的BsAbBsAb，在在基基础础研研究究、临临床床诊诊断断、治治疗疗等等方方面面发发挥挥了了重重要要的的作用。作用。70BsAb（双特异性抗体）是基因工程抗体研究的重点，已经构建了抗肿瘤抗肿瘤介导活化的介导活化的T T淋巴细胞。淋巴细胞。介导巨噬细胞的肿瘤免疫疗法。介导巨噬细胞的肿瘤免疫疗法。除除了了介介导导肿肿瘤瘤细细胞胞及及效效应应细细胞胞的的结结合合外外，BsAbBsAb还还可可用用于于向向肿肿瘤瘤细细胞胞输输送送免疫毒素。免疫毒素。BsAbBsAb还还用用于于介介导导其其他他药药物物的的肿肿瘤瘤杀杀伤作用伤作用。71抗肿瘤71抗血栓形成抗血栓形成 通通过过化化学学交交联联物物制制备备完完整整抗抗纤纤维维蛋蛋白白单单克克隆隆抗抗体体 及及 抗抗 组组 织织 纤纤 维维 蛋蛋 白白 酶酶 原原 激激 活活 物物 抗抗 体体（抗抗tPAtPA）BsAbBsAb。在在体体内内、外外均均能能有有效效地地介介导导纤纤维维蛋蛋白白酶酶原原激激活活物物及及纤纤维维血血栓栓的的结结合合，通通过过特特异异聚聚集集tPAtPA于于血血凝凝块块处处，在在明明显显减减少少tPAtPA量量的的情情况况下下诱诱发发了了其其强强有有力力的的治治疗疗效效应应，可可以以对对抗抗血血栓栓形形成成，同同时时也也避避免纤维蛋白原的溶解及出血的副作用。免纤维蛋白原的溶解及出血的副作用。抗感染作用抗感染作用 BsAbBsAb一样适用于介导病原体的代谢。一样适用于介导病原体的代谢。72抗血栓形成72BsAbBsAb构建法：构建法：化化学学交交联联法法：SPDPSPDP（琥琥珀珀酰酰胺胺吡吡啶啶二二硫硫酚酚丙丙酸酸）随随机机交交联联2 2个个IgIg分分子子表表面面上上的的巯巯基基构构建建出出双功能双功能AbAb。生物学法（杂种生物学法（杂种杂交瘤法）：杂交瘤法）：分泌分泌McAbMcAb的杂交瘤的杂交瘤C C分泌另一种分泌另一种AbAb的脾的脾C C融合融合 杂种杂种-杂交瘤杂交瘤C C分泌杂种杂种AbAb2 2种亲代种亲代AbAb73BsAb构建法：分泌McAb的杂交瘤C融合 杂种-杂genegene工工程程法法：构构建建出出的的小小分分子子双双特特异异性性AbAb（SCFVSCFV）2 2（双双功功能能AbAb）将将不不同同AbAb的的VHVH和和VLVL区区的的genegene用用接接头头（LinkerLinker）连连接接，生生成成原原AbAb的的分分子子内内配配对对（不不能能形形成成链链内内的的分分子子配配对对）Bs AbBs Ab（SCFVSCFV）2 2。74gene工程法：构建出的小分子双特异性Ab（SCFV）2（2 2）免疫粘连素（）免疫粘连素（ImmunoadhesinImmunoadhesin）人人细细胞胞受受体体或或粘粘附附分分子子等等基基因因通通过过一一定定的的方方式式及及抗抗体体的的恒恒定定区区genegene（主主要要是是FcFc段段）的的N N端端连连接接起起来来，在在真真核核细细胞胞中中表表达达出出正正确确折折