疟疾检验技术课件

疟原虫检验技术疟原虫检验技术烟台市疾病预防控制中心 2015年3月疟原虫检验技术烟台市疾病预防控制中心 1授课内容授课内容1.厚薄血膜的制作厚薄血膜的制作 2.四种疟原虫的基本特征3.厚、薄血膜中间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态结构及其鉴别。4.镜检示教。授课内容1.厚薄血膜的制作 2分子生物学、血清学技术发展迅猛分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是确诊但是确诊疟疾的疟疾的“金标准金标准”仍然是血液显微镜检查仍然是血液显微镜检查显微镜检查是唯一可鉴别显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方法种疟原虫的方法厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代的疟厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代的疟疾诊断的金标准疾诊断的金标准实验室技术实验室技术分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是确诊疟疾的“金标准”3厚薄血膜的制作厚薄血膜的制作 血片制作血片制作在制作血片前，首先要核对患者的姓名、在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址年龄和住址厚薄血膜的制作 血片制作在制作血片前，首先要核对患者的姓名、4取血部位和血量取血部位和血量采血部位和取血方法：采血部位和取血方法：耳垂耳垂或无名指，通常在耳垂取或无名指，通常在耳垂取血，先用血，先用75%75%酒精棉球消毒酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒米大小。厚血膜血量约一粒米大小。取血部位和血量采血部位和取血方法：耳垂或无名指，通常在耳垂取5厚血膜厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约用推片的一角，从取血部位刮取约45微升微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转24圈，涂成直径圈，涂成直径0.81厘米大小圆形厚血膜。厘米大小圆形厚血膜。薄血膜薄血膜再取一小滴血再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血将血置于第一张玻片离厚血膜适当远的地方膜适当远的地方.将采血玻片将采血玻片(推片推片)的边缘紧贴的边缘紧贴载玻片使载玻片使 血液沿边缘散开血液沿边缘散开(如图示如图示).厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约45微升血量（相当6正确的推片姿势正确的推片姿势正确的推片姿势7标准的疟疾厚薄血膜片位置标准的疟疾厚薄血膜片位置标准的疟疾厚薄血膜片位置8各种不同的疟疾血片涂制法：各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片标准血片门诊发热病人血片门诊发热病人血片居民普查血片居民普查血片各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片门诊发热病人血片居民普查血9厚薄血膜的标准厚薄血膜的标准 厚血膜血量适宜，不宜过多或过少厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄薄血膜平整血膜平整,无皱折和空泡无皱折和空泡.红细胞单层排列红细胞单层排列厚薄血膜的标准 厚血膜血量适宜，不宜过多或过少10血片染色血片染色 两种染色方法两种染色方法:吉氏染色法吉氏染色法瑞氏染色法瑞氏染色法 常用吉氏染色法常用吉氏染色法血片染色 两种染色方法:11吉氏染液吉氏染液(原液原液)的配置的配置 吉氏染粉吉氏染粉 (Azure B type)5g 甘油甘油 (纯纯)250ml 甲醇甲醇(纯纯)250mlv吉氏粉放入研钵中，加少量甘油充分研磨吉氏粉放入研钵中，加少量甘油充分研磨,然后边加边磨，直然后边加边磨，直至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在 研钵中加入少研钵中加入少许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀，置于复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀，置于室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。保存室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。保存时间越长染色效果越好。时间越长染色效果越好。v整个染色液配制时间不能少于整个染色液配制时间不能少于5个小时个小时吉氏染液(原液)的配置 吉氏染粉 (12稀释吉氏原液稀释吉氏原液原液需经原液需经pH7.0盐酸缓冲液（盐酸缓冲液（PBS）或净）或净水稀释后，方可用于厚薄血片染色。水稀释后，方可用于厚薄血片染色。吸取母液时，不要晃动瓶子吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物以免沉淀物泛起影响染色效果泛起影响染色效果.稀释吉氏原液原液需经pH7.0盐酸缓冲液（PBS）或净水稀13操作操作1（快染）（快染）配制配制5%染液，（每张血片约需染液染液，（每张血片约需染液2ml）：量筒内量：量筒内量2ml缓冲液或净水，直接滴加吉缓冲液或净水，直接滴加吉氏原液氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色染色10min，清水细缓冲洗，晾干镜检。，清水细缓冲洗，晾干镜检。操作操作2 (慢染慢染)在染色量筒内量在染色量筒内量2ml蒸馏水或净水，蒸馏水或净水，再再滴加吉氏原液滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染滴，混匀，滴入待染标本上，染色色3040min。清水细缓冲洗，晾干镜检。清水细缓冲洗，晾干镜检。吉氏染液浓度吉氏染液浓度门诊染色门诊染色操作1（快染）配制5%染液，（每张血片约需染液2ml14将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液或净水毫升吉氏原液加缓冲液或净水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。检。成批血片染色成批血片染色将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%成批血片染色15v质量好的染色质量好的染色:核呈红色核呈红色,胞浆呈蓝色胞浆呈蓝色 v如果血片偏红如果血片偏红,说明染液偏酸性说明染液偏酸性v如果血片偏蓝如果血片偏蓝,说明染液偏硷性说明染液偏硷性外观吉氏染色血片外观吉氏染色血片质量好的染色:外观吉氏染色血片16染色过程染色过程将血片平置于染色板上。将血片平置于染色板上。用吸管吸取已稀释的吉氏液约用吸管吸取已稀释的吉氏液约2ml于厚薄血于厚薄血膜上，染色膜上，染色10 min。用清水细缓冲去染液。用清水细缓冲去染液。置玻片于插板上，自然晾干。置玻片于插板上，自然晾干。血片干燥后血片干燥后,用甲醇固定薄血膜。用甲醇固定薄血膜。染色过程将血片平置于染色板上。血片干燥后,用甲醇固定薄血膜17血片制作与染色注意事项血片制作与染色注意事项 使用前载玻片一定要清洁，不然会影响使用前载玻片一定要清洁，不然会影响 血片血片制作和镜检结果制作和镜检结果 厚血膜干燥时不要加热，加热会使原虫变形，厚血膜干燥时不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果影响镜检结果 配置母液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提配置母液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量高镜检质量 固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜 冲洗染液时，不要冲走厚血膜。冲洗染液时，不要冲走厚血膜。血片制作与染色注意事项 使用前载玻片一定要清洁，不然会影响18原虫密度计算原虫密度计算估计疟原虫感染程度有三种方法：估计疟原虫感染程度有三种方法：半定量计数法半定量计数法 检查厚血膜检查厚血膜白细胞原虫密度计数法检查厚血膜白细胞原虫密度计数法检查厚血膜红细胞感染率计算法检查薄血膜红细胞感染率计算法检查薄血膜原虫密度计算估计疟原虫感染程度有三种方法：19用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略地估计出疟原虫密度。这种方法简便，缺点是计数地估计出疟原虫密度。这种方法简便，缺点是计数的疟原虫数受血膜厚薄影响，只能定性，不宜作定的疟原虫数受血膜厚薄影响，只能定性，不宜作定量分析。量分析。国内常用。此方法将密度分为国内常用。此方法将密度分为6级：级：1.全厚血膜查见疟原虫数在全厚血膜查见疟原虫数在10个以内，记录实际数个以内，记录实际数字字2.全厚血膜查见疟原虫数在全厚血膜查见疟原虫数在10个以上，但平均每个个以上，但平均每个视野不到视野不到1个虫，记录个虫，记录“少少”3.平均每个视野平均每个视野15个虫，记录个虫，记录“”4.平均每个视野平均每个视野610个虫，记录个虫，记录“+”5.平均每个视野平均每个视野11100个虫，记录个虫，记录“+”6.平均每个视野平均每个视野100个虫以上，记录个虫以上，记录“+”。半定量计数法半定量计数法用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略地估计出疟原虫密20白细胞疟原虫密度计数法（白细胞疟原虫密度计数法（WHOWHO推荐）推荐）白细胞疟原虫密度计数法重要性白细胞疟原虫密度计数法重要性 用于疟疾研究用于疟疾研究 用于临床诊断用于临床诊断 用于抗疟后疟疾考核用于抗疟后疟疾考核白细胞疟原虫密度计数法（WHO推荐）白细胞疟原虫密度计数法重21在厚血膜，按要求选择视野，计数在厚血膜，按要求选择视野，计数200个白细胞中的个白细胞中的疟原虫数（可分有性体和无性体），如果原虫密度疟原虫数（可分有性体和无性体），如果原虫密度较低，可增加白细胞计数（较低，可增加白细胞计数（500 1 000 个）。个）。白细胞疟原虫计算公式：白细胞疟原虫计算公式：疟原虫数疟原虫数 患者每微升血的白细胞数患者每微升血的白细胞数 计数的白细计数的白细胞数胞数=疟原虫数疟原虫数/l血。血。如果不知患者的白细胞数，则每微升血以如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8 000个白个白细胞计数细胞计数(国际标准国际标准)。白细胞疟原虫密度计数法（白细胞疟原虫密度计数法（WHOWHO推荐）推荐）在厚血膜，按要求选择视野，计数200个白细胞中的疟原虫数（22白细胞疟原虫计数法举例白细胞疟原虫计数法举例假设计数假设计数200 WBC中有中有35个疟原虫，在不知患个疟原虫，在不知患 者白细胞数的情况下，以每微升血者白细胞数的情况下，以每微升血8000个白细个白细 胞为数胞为数,由此计算出每微升血液疟原虫密度为由此计算出每微升血液疟原虫密度为：35（原虫数）（原虫数）x 8000200（白细胞数）（白细胞数）=1400/l答：该患者原虫密度为答：该患者原虫密度为1400/l。白细胞疟原虫计数法举例假设计数200 WBC中有35个疟原23薄血膜不同区域的红细胞疟原虫感染率有较薄血膜不同区域的红细胞疟原虫感染率有较大差别，通常血膜后端和边缘部疟原虫密度大差别，通常血膜后端和边缘部疟原虫密度常比前半部或中央部高，所以，镜检时不宜常比前半部或中央部高，所以，镜检时不宜只检查一个角落，应顺玻片的横轴检查。只检查一个角落，应顺玻片的横轴检查。镜检时，应当记录下所观察到的各种疟原虫镜检时，应当记录下所观察到的各种疟原虫虫期，不要笼统地记录为虫期，不要笼统地记录为Pv或或Pf。红细胞感染率计算法（薄血膜）红细胞感染率计算法（薄血膜）薄血膜不同区域的红细胞疟原虫感染率有较大差别，通常血膜后端和241.按以下公式计算：按以下公式计算：红细胞原虫感染率（红细胞原虫感染率（%）=疟原虫数疟原虫数 X 100 计数的红细胞数计数的红细胞数2.显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视野（野（300-500红细胞红细胞/视野）视野）3.按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟原虫数原虫数4.如果能见到疟原虫，但是记数如果能见到疟原虫，但是记数500010000个红细个红细胞时却没有感染红细胞，那么设定感染率为胞时却没有感染红细胞，那么设定感染率为 红细胞感染率计算法（薄血膜）红细胞感染率计算法（薄血膜）1.按以下公式计算：4.如果能见到疟原25如何确定疟原虫血片为阴性如何确定疟原虫血片为阴性 检查全部厚血膜未查见疟原虫检查全部厚血膜未查见疟原虫 最少检查最少检查100个厚血膜油镜视野未查见个厚血膜油镜视野未查见 疟原虫疟原虫如何确定疟原虫血片为阴性 检查全部厚血膜未查见疟原虫26人类四种疟原虫的人类四种疟原虫的 基基 本特征本特征人类四种疟原虫的 基 本特征27感染人的疟原虫有四种感染人的疟原虫有四种:v恶性疟原虫恶性疟原虫 P.falciparum v间日疟原虫间日疟原虫 P.vivaxv三日疟原虫三日疟原虫 P.malariae v卵形疟原虫卵形疟原虫 P.ovale 感染人的疟原虫有四种:恶性疟原虫 P.falcipar28恶性疟恶性疟 P.falciparum 四种疟原虫中致病力最强四种疟原虫中致病力最强 无免疫力者感染后出现急性症状无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治不及时治 疗可危及生命疗可危及生命 在我国主要流行云南省和海南省在我国主要流行云南省和海南省 恶性疟 P.falciparum 四种疟原虫中29间日疟间日疟 P.vivax 间日疟原虫分布于我国大部分地区，间日疟原虫分布于我国大部分地区，主要是中部地区主要是中部地区 引起间日疟引起间日疟,病程呈良性病程呈良性,但有复发但有复发 间日疟 P.vivax 间日疟原虫分布于我国大部分地区30三日疟三日疟 P.malariae 三日疟在我国已基本消灭三日疟在我国已基本消灭主要发生在晚秋及初冬主要发生在晚秋及初冬,无复发无复发 卵形疟卵形疟 P.ovale又称蛋形疟原虫又称蛋形疟原虫,在我国已基本消灭在我国已基本消灭引起症状与间日疟相似引起症状与间日疟相似,但很少复发但很少复发三日疟 P.malariae 三日疟在我国已基本消灭31疟原虫的镜下疟原虫的镜下形态及鉴别形态及鉴别疟原虫的镜下形态及鉴别32人体疟原虫的基本结构v疟原虫基本构造为细胞质（胞浆）、核和疟细胞质（胞浆）、核和疟色素色素这三要素。三要素。v1.1.细胞浆细胞浆 被染成蔚蓝色或深蓝色蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。vv2.2.2.2.核核核核 即细胞核或染色质粒。在正常情况即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈下核呈鲜红色。鲜红色。鲜红色。鲜红色。vv3.3.3.3.疟色素疟色素疟色素疟色素 不着色，不着色，不着色，不着色，颜色和颗粒的形状，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，呈短棒状，黄褐色；黄褐色；黄褐色；黄褐色；恶性疟原虫的色素颗粒恶性疟原虫的色素颗粒呈细砂状，呈细砂状，黑褐色。黑褐色。黑褐色。黑褐色。人体疟原虫的基本结构疟原虫基本构造为细胞质（胞浆）、核和疟色33薄血膜中间日疟、恶性疟薄血膜中间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态结构特点各期疟原虫的形态结构特点薄血膜中间日疟、恶性疟34薄血膜中常见的血液成分薄血膜中常见的血液成分中性粒细胞嗜酸性粒细胞血小板单核细胞淋巴细胞红细胞薄血膜中常见的血液成分中性粒细胞嗜酸性粒细胞血小板单核细胞淋35薄血膜疟原虫形态薄血膜疟原虫形态间日疟间日疟 环状体环状体感染的红细胞：感染的红细胞：胀大胀大不明显，基本正常。不明显，基本正常。虫体大小：虫体大小：较大，约较大，约为红细胞直径为红细胞直径1/3。胞浆：胞浆：环状，浅蓝色。环状，浅蓝色。核：核：红色，一个，偶红色，一个，偶有二个。有二个。疟色素：疟色素：无。无。薄血膜疟原虫形态间日疟 环状体36 约占寄生红细胞的约占寄生红细胞的1/31/3，很少见到一个红细胞，很少见到一个红细胞寄生寄生2 2个环状体和一个环状体有个环状体和一个环状体有2 2个核。个核。约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状37薄血膜疟原虫形态 恶性疟恶性疟环状体环状体感染的红细胞：大小正常,颜色较深。虫体大小：较小，约为红细胞直径1/5-1/6。胞浆：蓝色，环状纤细,有时位于红细胞的边缘。常见多个原虫同寄生于一红细胞的现象。核：红色一个,常有二个。疟色素：无。薄血膜疟原虫形态 恶性疟环状体38恶性疟原虫恶性疟原虫-环状体环状体环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫恶性疟原虫-环状体环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不39薄血膜间日疟大滋养体形态薄血膜间日疟大滋养体形态感染的红细胞：感染的红细胞：胀大褪色，胀大褪色，出现形状大小相等、分出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。红色的薛氏小点。虫体大小：虫体大小：较大。较大。胞浆：胞浆：不规则，浅蓝色，不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空出现阿米巴伪足，有空泡。泡。核：核：红色，一个。红色，一个。疟色素：疟色素：有，细小杆状，有，细小杆状，黄褐色，分布不均匀。黄褐色，分布不均匀。薄血膜间日疟大滋养体形态感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小40间间 日日 疟疟 大大 滋滋 养养 体体 虫体不规则，较大；阿虫体不规则，较大；阿米巴样空泡明显；疟色米巴样空泡明显；疟色素细小，黄褐色。素细小，黄褐色。间 日 疟 大 滋 养 体 虫体不规则，较41 间日疟大滋养体间日疟大滋养体 间日疟大滋养体42恶性疟大滋养体恶性疟大滋养体受感染红细胞：受感染红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不匀、数目较少红色茂氏小点。虫体大小：虫体大小：较小。胞浆：胞浆：蓝色，圆形，坚实，体积小。核：核：一个，红色。疟色素：疟色素：较细的黑褐色颗粒，常集成块。恶性疟大滋养体受感染红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、43恶性疟大滋养体恶性疟大滋养体恶性疟大滋养体44红细胞：胀大，褪色，可有薛氏小点。胞浆：较不规则，空泡小或消失，浅蓝色。核：红色，分裂为二个以上。色素：黄褐色，分布不均匀。间日疟间日疟未成熟裂殖体未成熟裂殖体红细胞：胀大，褪色，可有薛氏小点。间日疟未成熟裂殖体45薄血膜疟原虫形态薄血膜疟原虫形态间间日日疟疟未未成成熟熟裂裂殖殖体体 薄血膜疟原虫形态间46恶性疟未成熟裂殖体红细胞：红细胞：大小正常，颜色较大小正常，颜色较深，可有茂氏小点。深，可有茂氏小点。大小：大小：较小。较小。胞浆：胞浆：规则，圆形或卵圆形，规则，圆形或卵圆形，蓝色。蓝色。核：核：分裂为二个以上，红色分裂为二个以上，红色。色素：色素：黄褐色颗粒，常集成黄褐色颗粒，常集成黑褐色团块。黑褐色团块。恶性疟未成熟裂殖体红细胞：大小正常，颜色较深，可有茂氏小点。47间日疟间日疟成熟裂殖体成熟裂殖体红细胞红细胞：胀大，褪色，可见：胀大，褪色，可见薛氏小点。薛氏小点。大小大小：个体较大。：个体较大。胞浆和核胞浆和核：裂殖子：裂殖子1224个，个，通常为通常为1618个，排列不规个，排列不规则，核红色，胞浆浅蓝色。则，核红色，胞浆浅蓝色。疟色素疟色素：黄褐色，常集于疟：黄褐色，常集于疟原虫的一边。原虫的一边。间日疟成熟裂殖体红细胞：胀大，褪色，可见薛氏小点。48间日疟裂殖体间日疟裂殖体间日疟裂殖体49恶性疟恶性疟成熟裂殖体成熟裂殖体红细胞红细胞：大小正常，颜色大小正常，颜色 较深，可见茂氏小点。较深，可见茂氏小点。大小大小：虫体较小。虫体较小。胞浆和核胞浆和核：裂殖子裂殖子832 个，通常为个，通常为818个，个，排列不规则，核红色，胞排列不规则，核红色，胞浆蓝色。浆蓝色。色素色素：黑褐色，集中于中央黑褐色，集中于中央或一侧。或一侧。恶性疟成熟裂殖体红细胞：大小正常，颜色 50恶性疟成熟裂殖体恶性疟成熟裂殖体 v裂殖子裂殖子8 83232个，通常个，通常8 81818个，个，排列不规则排列不规则v疟色素集中成团块状疟色素集中成团块状v虫体占红细胞体积的虫体占红细胞体积的2/32/3至至3/4 3/4 恶性疟成熟裂殖体 裂殖子832个，通常818个，排列不规51薄血膜间日疟雌（大）配子体形态薄血膜间日疟雌（大）配子体形态形状大小形状大小：圆形或椭圆形，较大。胞浆胞浆：深蓝色。核核：一个，较小，深红色，常偏于一边，核周可见明显不染色带。疟色素疟色素：黄褐色，均匀散在，数目较多。薄血膜间日疟雌（大）配子体形态形状大小：圆形或椭圆形，较大。52间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体53间日疟雄（小）配子体形态形状大小形状大小：圆形，虫体较大。胞浆胞浆：浅蓝色。核核：一个，较大，疏松，位于中央，浅红色，周围有明显不着色带。疟色素疟色素：黄褐色，散在分布。间日疟雄（小）配子体形态形状大小：圆形，虫体较大。54间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体55恶性疟恶性疟雌（大）配子体雌（大）配子体形态形态形状形状：新月形，两端稍尖。胞浆胞浆：深蓝色。核核：一个，较小，致密，深红色，位于中央，核周可见透明不染色带。疟色素疟色素：黑褐色，密布于核的周围。恶性疟雌（大）配子体形态形状：新月形，两端稍尖。56薄血膜薄血膜恶性疟雄（小）配子体恶性疟雄（小）配子体形态形态形状：形状：腊肠形，两端钝腊肠形，两端钝圆。圆。胞浆：胞浆：浅蓝色或淡紫红浅蓝色或淡紫红色。色。核：核：一个，较大，疏松，一个，较大，疏松，位于中央，浅红色，位于中央，浅红色，核周可见不染色带。核周可见不染色带。疟色素：疟色素：黑褐色，松散黑褐色，松散分布于核周围。分布于核周围。薄血膜恶性疟雄（小）配子体形态形状：腊肠形，两端钝圆。57将（未）成熟雌配子体将（未）成熟雌配子体与与成熟大滋养体成熟大滋养体(核分裂前，刚要进入裂殖体前期)的形态鉴别的形态鉴别虫体大小:几乎充满被寄生的红细胞v核:一个，较大且致密，周围有一圈空白的不染色带v胞浆:边缘清楚，不含空泡v疟色素:颗粒较多较粗，均匀散在虫体大小:不超过被寄生红细胞的3/4v核:一个，延长呈带状，周围无明显的不染色带v胞浆:边缘不整齐，多有空泡v疟色素:颗粒较少较细，分布不均匀将（未）成熟雌配子体与成熟大滋养体(核分裂前，刚要进入裂殖58厚血膜中间日疟、恶性疟厚血膜中间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态结构特点各期疟原虫的形态结构特点厚血膜中间日疟、恶性疟59厚血膜中疟原虫的形态厚血膜中疟原虫的形态 厚血膜由于用血量较多，涂制的血膜小，红细胞重叠且干燥慢，致使虫体皱缩，空泡消失，胞浆变形，各期疟原虫的体积都略微缩小，其中只有大、小滋养体的形态有较大改变，而裂殖体和配子体的形态则无明显变化。厚血膜中疟原虫的形态 厚血膜由于用血量较多，涂60厚血膜环状体体形态厚血膜环状体体形态 环状体：胞浆呈环状或向核的一侧或两侧收缩，使环的中间断裂，或围绕核。间日疟原虫间日疟原虫的环较大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；恶性疟原虫恶性疟原虫的环纤细，常呈冒号“：”、飞鸟“.”、V状和断环状。间日疟小滋养体恶性疟小滋养体厚血膜环状体体形态 环状体：胞浆呈环状或向核的一侧或两侧61厚血膜间日疟大滋养体形态厚血膜间日疟大滋养体形态 间间日日疟疟大大滋滋养养体体呈阿米巴样运动，胞浆常断裂几块或缩成圆形，核和疟色素均被包在胞浆之中，着色深，只隐约可见红色的核和黄绿色的疟色素。胞浆可皱缩断裂成几个块状，大小不一，似互不连接。核位于胞浆之中或外边。疟色素分布不均匀。有些仅见胞浆和疟色素而核看不清楚。大滋养体厚血膜间日疟大滋养体形态 间日疟大滋养体呈阿米62厚血膜恶性疟厚血膜恶性疟大滋养体形态大滋养体形态 恶性疟原虫大滋恶性疟原虫大滋养体养体与薄血膜形态相似，常呈圆形，体小结实，疟色素细小，金黄色，结成块状后，呈黑褐色。大滋养体厚血膜恶性疟大滋养体形态 恶性疟原虫大滋养体与薄血膜63厚血膜裂殖体形态厚血膜裂殖体形态v裂殖体裂殖体 间日疟原虫、恶性疟原虫的裂殖体前间日疟原虫、恶性疟原虫的裂殖体前期及成熟裂殖体，除虫体略微缩小着色较深外，期及成熟裂殖体，除虫体略微缩小着色较深外，均与薄血膜相似。均与薄血膜相似。恶性疟裂殖体恶性疟裂殖体厚血膜裂殖体形态裂殖体 间日疟原虫、恶性疟原虫的裂殖体前期64厚血膜间日疟配子体形态v间日疟原虫的配子体间日疟原虫的配子体呈圆形或卵圆形，除虫体略缩小且着色深外，均与薄血膜相似。雄配子体雄配子体核大，疏松，圆形或呈星状，胞浆较少，着色淡，疟色素颗粒大，数量较多，散在分布。v雌配子体雌配子体与圆形成熟的大滋养体相似，但配子体疟色素颗粒粗大，多而散在分布。厚血膜间日疟配子体形态间日疟原虫的配子体呈圆形或卵圆形，除虫65厚血膜恶性疟配子体厚血膜恶性疟配子体 形态形态 配子体配子体呈新月形或腊肠形，如血膜干燥较慢，则可缩成圆形，核居中，疟色素围在核周，外围一圈胞浆。此外，还可见配子体的胞浆部分或全部消失，只留下核和疟色素，或核和胞浆均消失，只留下一些疟色素。厚血膜恶性疟配子体 形态 配子体呈新月形或腊肠形，如血膜干66恶性疟原虫厚血膜恶性疟原虫厚血膜67厚薄血膜的优缺点及适用范围厚薄血膜的优缺点及适用范围薄薄血血膜膜：用血量少1-1.5ul，疟原虫的形态完整，便于疟原虫虫种的鉴定。为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查；常出现漏诊。厚血膜：厚血膜：用血量较多4-5ul，疟原虫胞浆和核有一定程度的固缩，较难识别；但须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚薄血膜的优缺点及适用范围薄血膜：用血量少1-1.5ul，疟681.红细胞通红细胞通常胀大常胀大 2.薛氏点明薛氏点明显显 3.成熟环状成熟环状体粗大体粗大4.滋养体有滋养体有阿米巴样阿米巴样伪足伪足5.可见不同可见不同发育期的发育期的原虫原虫 间日疟（间日疟（P.vivax）鉴定要点）鉴定要点间日疟（P.vivax）鉴定要点691.环状体钎细环状体钎细,红红细胞不涨大细胞不涨大2.一个红细胞内一个红细胞内可有几个环状可有几个环状体体 3.环状体内可有环状体内可有2个核个核 4.环状体可贴在环状体可贴在红细胞边缘红细胞边缘 5.血片中没有其血片中没有其他发育期滋养他发育期滋养体体 6.配子体呈新月配子体呈新月形或腊肠形形或腊肠形 7.可出现茂氏点可出现茂氏点恶性疟（恶性疟（P.falciparum）鉴定要点）鉴定要点环状体钎细,红细胞不涨大恶性疟（P.falciparum）70三日疟（三日疟（P.malariae）鉴定要点）鉴定要点1.环状体可呈环状体可呈方形方形2.带状形大滋带状形大滋养体是其养体是其特点特点 3.成熟裂殖成熟裂殖体体呈菊花状，呈菊花状，内含内含612个裂殖子个裂殖子 4.红细胞不胀红细胞不胀大，略缩大，略缩小小5.有时有西门有时有西门氏点氏点三日疟（P.malariae）鉴定要点1.环状体可呈方形71卵形疟（卵形疟（P.ovale）鉴定要点）鉴定要点1.1.红细胞略胀红细胞略胀大或不变大大或不变大 2.2.红细胞边缘红细胞边缘呈车轮状呈车轮状3.3.环状体有时环状体有时呈现呈现鱼眼状鱼眼状4.4.薛氏点明显薛氏点明显 5.5.成熟裂殖体成熟裂殖体呈菊花状呈菊花状,类似三日疟类似三日疟原虫原虫,但更但更粗大粗大6.6.原虫呈卵圆原虫呈卵圆形形 卵形疟（P.ovale）鉴定要点红细胞略胀大或不变大 72镜检示教与镜检示教与读片练习读片练习镜检示教与读片练习73This is a thin film from a 27 year old female backpacker,with a recent history of trekking through Northern Thailand and high fever.A typical Plasmodium falciparum presentation.Numerous fine ring forms(大量环状体)Double chromatin dots(双核)Red cells are not enlarged（红细胞大小正常）This is a thin film from a 27 74A thin film from a 22 year old male holidaying in Lombok(Indonesia)one month previously.Intermittent fevers since returning.A typical Plasmodium vivax presentationring forms（环状体）trophozoite（大滋养体）Enlarged red cells（红细胞胀大）A thin film from a 22 year old75Recent travel in Africa.Pyrexia of unknown origin.A typical Plasmodium ovale（卵形疟）（卵形疟）presentationtrophozoite（大滋养体）Enlarged red cell（红细胞胀大）Recent travel in Africa.Pyrex76Female patient,arrived from Brazil two weeks previously.Flu like symptoms since arrival.A typical Plasmodium malariae（三日疟）（三日疟）presentationBroad band form of plasmodium（带状大滋养体）Red cells not enlarged（红细胞不胀大）Female patient,arrived from B77This is a thick film prepared from a 32 year old male recently returned from Vietnam.The only definitive diagnosis that can be made from this film is that Malaria is present.Thin films would have to be examined for species identification.（虫种需观察薄血膜来定）（虫种需观察薄血膜来定）Numerous ring form of Plasmodium can be seen(as indicated by the arrows).大量环状体大量环状体（箭头所指处）（箭头所指处）Note size of neutrophils(for comparison).中性粒细胞中性粒细胞（作对照）（作对照）This is a thick film prepared 782.Intermittent fever;arrived from India 2 months ago.Trophozoite（大滋养体）2.Intermittent fever;arrived793.History of round the world safari including S.America,Asia and Africa.General malaise.Plasmodiumvivax (间日疟)microgametocyte(雄配子体)3.History of round the world 804.Unspecified overseas travel.Presented with temperature 38.4C vPlasmodiumvivax (间日疟)vSchizont (裂殖体)4.Unspecified overseas travel815.Male recently returned to Australia after backpacking through Asia.History of flu like symptoms.vRingform(环状体)vTrophozoite（大滋养体）（大滋养体）5.Male recently returned to A827.Aches and pains,with fever.?Glandular Fever,?malaria.vRingform (环状体)vSchizont (裂殖体)7.Aches and pains,with fever8314.50 year old male patient presented with fever after holidaying in Viet Nam.vP.Falciparum (恶性疟)vRingform (环状体)14.50 year old male patient p8421.A member of the UN forces in East Timor.Presented with high temperature.P.Falciparum (恶性疟)Ringform (环状体)21.A member of the UN forces 85P.Falciparum(恶性疟)macrogametocyte(雌配子体)疟疾检验技术课件86P PMalarae Malarae(三日疟三日疟)Trophozoite（大滋养体）（大滋养体）疟疾检验技术课件87vPlasmodiumvivax(间日疟间日疟)vTrophozoite（大滋养体）（大滋养体）疟疾检验技术课件88vSchizont (裂殖体裂殖体)vTrophozoite（大滋养体）（大滋养体）疟疾检验技术课件89Plasmodiumvivax(间日疟)microgametocyte(雄配子体)疟疾检验技术课件90P.Falciparum(恶性疟)microgametocyte(雄配子体)疟疾检验技术课件91v灰尘和染色液的色素沉着灰尘和染色液的色素沉着 灰尘和染色液的色素沉着在血膜的表面上时，易被误认为是疟色素，可依据其颗粒的形状、大小、色泽、有无核与胞浆的结构来鉴别也可转动显微镜的微调，看是否在同一水平面上。灰尘和染色液的色素沉着92v细菌细菌 细菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成红色小点，与疟原虫的核相似，最易混淆。球菌形体较大，边缘光滑，且与红细胞不在同一平面。v水中原虫水中原虫 水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养相似，但无疟色素，而空泡多如网眼v植物种子植物种子 有很清晰的厚薄一致的边界，染色较深、无疟色素，也看不到核，且有柄脱落时的痕迹细菌93小结：血片镜检中小结：血片镜检中鉴定是否为疟原虫的五条原则鉴定是否为疟原虫的五条原则1、疟原虫要有核有浆有核有浆（红核蓝浆）。2、疟原虫各期（除环状体外）均含有疟色素。均含有疟色素。3、疟原虫自然形态要像自然形态要像；疟原虫呈半透明状态呈半透明状态，模糊一团不透明者不是。4、体积最大最大的疟原虫也不不能超过中性粒细胞大。超过中性粒细胞大。5、数量极少，似是而非者判为可疑，应重新选择时机多次制片、多次检查，结合临床并交上级大夫鉴定或行药物试治。小结：血片镜检中鉴定是否为疟原虫的五条原则1、疟原虫要有核94镜检要求v1.师资培训：一定掌握，负责培训本级及下级v2.牢记三要素：红核、蓝浆、疟色素v3.厚血膜要求：至少能认出疟原虫，可不分种、期；能进行计数v4.薄血膜要求：能分出虫种、期镜检要求1.师资培训：一定掌握，负责培训本级及下级95谢谢大家96 四种疟原虫的四种疟原虫的 诊断要点诊断要点 四种疟原虫的 诊断要点 971.环状体钎细环状体钎细,红细红细胞不涨大胞不涨大2.一个红细胞内可有一个红细胞内可有几个环状体几个环状体 3.环状体内可有环状体内可有2个个核核 4.环状体可贴在红细环状体可贴在红细胞边缘胞边缘 5.血片中没有其他发血片中没有其他发育期滋养体育期滋养体 6.配子体呈新月形或配子体呈新月形或腊肠形腊肠形 7.可出现茂氏点可出现茂氏点恶性疟（恶性疟（P.falciparum）鉴定）鉴定 要点要点环状体钎细,红细胞不涨大恶性疟（P.falciparum）981.红细胞通红细胞通常涨大常涨大 2.薛氏点明薛氏点明显显 3.成熟环状成熟环状体粗大体粗大4.滋养体有滋养体有阿米巴样阿米巴样伪足伪足5.可见不同可见不同发育期的发育期的原虫原虫 间日疟（间日疟（P.vivax）鉴定要点）鉴定要点间日疟（P.vivax）鉴定要点991.环状体可环状体可呈方形呈方形2.带状形是带状形是特点特点 3.成熟滋养成熟滋养体呈菊花体呈菊花状状,内含内含612个裂个裂殖子殖子 4.红细胞不红细胞不涨大，略涨大，略缩小缩小5.有时有西有时有西门氏点门氏点 三日疟（三日疟（P.malariae）诊断要点）诊断要点环状体可呈方形三日疟（P.malariae）诊断要点100卵形疟（卵形疟（P.ovale）诊断要点）诊断要点1.红细胞略涨红细胞略涨大或不变大大或不变大 2.红细胞边缘红细胞边缘呈车轮状呈车轮状3.环状体有时环状体有时呈现鱼眼状呈现鱼眼状4.薛氏点明显薛氏点明显 5.成熟滋养体成熟滋养体类似三日疟类似三日疟原虫原虫,但更粗但更粗大大6.原虫呈卵圆原虫呈卵圆形形 卵形疟（P.ovale）诊断要点红细胞略涨大或不变大 101 薄血膜中疟原虫寄生时薄血膜中疟原虫寄生时 红细胞的变化红细胞的变化间日疟原虫间日疟原虫 三日疟原虫三日疟原虫 恶性疟原虫恶性疟原虫卵形疟原卵形疟原虫虫涨大涨大,色浅淡色浅淡,略变略变形形 可见薛氏点可见薛氏点(除早除早期环状体时期环状体时)多重感染少见多重感染少见 疟色素黄褐色疟色素黄褐色,散散在在,呈小杆状呈小杆状正常正常,或略小或略小 正常染色时点彩不正常染色时点彩不明显明显多重感染少见多重感染少见 色素见于早期色素见于早期,黑黑色颗粒状色颗粒状,多见于多见于细胞周围细胞周围正常大小正常大小 常见多重感染常见多重感染 一些细胞呈黄色边一些细胞呈黄色边缘较厚缘较厚 过度染色时茂氏点过度染色时茂氏点明显明显 疟色素颗粒较疟色素颗粒较粗粗 新月形配子体外红新月形配子体外红细胞膜见不到细胞膜见不到感染红细胞略涨感染红细胞略涨大或不变大大或不变大 通通常呈卵圆形常呈卵圆形 感染红细胞边感染红细胞边缘破碎状缘破碎状 薛氏点明显疟色薛氏点明显疟色素棕黄色素棕黄色,类似类似间日疟原虫间日疟原虫 薄血膜中疟原虫寄生时 红细胞的变化间日102种种周周 围围 血血中中 发发 育育阶段阶段红细胞形态红细胞形态疟原虫形态疟原虫形态大小大小点彩点彩胞浆胞浆疟色素疟色素裂殖子数裂殖子数恶恶性性疟疟原原虫虫环状体环状体配子体配子体正常正常常常 见见茂茂 氏氏点点环环状状体体钎钎细细，常见个核常见个核粗粗黑黑，配配子子体中明显体中明显16-32间间日日疟疟原原虫虫各各 期期 滋滋养体养体裂裂 殖殖 体体和和配子体配子体涨涨 大大,可可达达正正常常的的 1.5-2 倍倍薛薛 氏氏点点 可可出现出现阿阿米米巴巴样样滋滋养养体体，浅浅蓝蓝色色，活泼活泼金棕色金棕色不明显不明显12-24卵卵形形疟疟原原虫虫各期滋各期滋养体养体裂殖体裂殖体涨涨 大大,可可达达正正常常的的 1.25-1.5倍倍薛薛 氏氏点点 可可出现出现卵卵圆圆形形滋滋养养体体，蓝蓝色色较较深深，核核较大较大深棕色深棕色明显明显4-12三三日日疟疟原原虫虫各期滋各期滋养体养体裂殖体裂殖体和和配子体配子体正常正常西西 门门氏氏 点点少见少见圆圆形形，蓝蓝色色深深，核核紧紧缩缩，滋滋养养体带状体带状深棕色，粗深棕色，粗明显明显6-12呈菊花状呈菊花状种周围血中发育阶段红细胞形态疟原虫形态大小点彩胞浆疟色素裂殖103镜检示教镜检示教v以下血片采自现症病例以下血片采自现症病例镜检示教以下血片采自现症病例104This is a thin film from a 27 year old female backpacker,with a recent history of trekking through Northern Thailand and high fever.A typical Plasmodium falciparum presentation.Numerous fine ring forms Double chromatin dots Marginal forms Red cells are not enlarged无数细环形式双染色点边缘形式红细胞不扩大This is a thin film from a 27 105A thin film from a 22 year old male holidaying in Lombok(Indonesia)one month previously.Intermittent fevers since returning.A typical Plasmodium vivax presentationSalient features are:Developing and thick(signet)ring forms Enlarged red cells 显著特点：发展和厚（纹章）环形式扩大红细胞A thin film from a 22 year old106Recent travel in Africa.Pyrexia of unknown origin.A typical Plasmodium ovale presentationDeveloping form of plasmodium Comet-like red cells Enlarged red cell 发展形式疟原虫彗星“红细胞的扩大红细胞Recent travel in Africa.Pyrex107Female patient,arrived from Brazil two weeks previously.Flu like symptoms since arrival.A typical Plasmodium malariae presentationBroad band form of plasmodium Red cells not enlargedFemale patient,arrived from B108This is a thick film prepared from a 32 year old male recently returned from Vietnam.Numerous ring form of Plasmodium can be seen(as indicated by the arrows).Note size of neutrophils(for comparison).The only definitive diagnosis that can be made from this film is that Malaria is present.Thin films would have to be examined for species identification.This is a thick film prepared 109读片练习读片练习读片练习1102.Intermittent fever;arrived from India 2 months ago.2.Intermittent fever;arrived1113.History of round the world safari including S.America,Asia and Africa.General malaise.3.History of round the world 1124.Unspecified overseas travel.Presented with temperature 38.4C 4.Unspecified overseas travel1135.Male recently returned to Australia after backpacking through Asia.History of flu like symptoms.5.Male recently returned to A1146.New Australian previously from Malaysia.Intermittent temperatures and headaches.6.New Australian previously1157.Aches and pains,with fever.?Glandular Fever,?malaria.7.Aches and pains,with fever11612.Businessman;history of extensive overseas travel.Has had frequent bouts of virus infections.12.Businessman;history of ex11714.50 year old male patient presented with fever after holidaying in Viet Nam.14.50 year old male patient p11818.Recent trip to Southern India-headaches and vaguely unwell.18.Recent trip to Southern In11919.Patient has been holidaying in the Dominican Republic,now feverish.19.Patient has been holidayin12020.Unwell and feverish.20.Unwell and feverish.12121.A member of the UN forces in East Timor.Presented with high temperature.21.A member of the UN forces 122