流感医学知识培训培训ppt课件

流感医学知识培训流感医学知识培训流感医学知识培训1流感流感侵入人体的魔鬼侵入人体的魔鬼“Influenza”“被魔鬼侵入被魔鬼侵入”据据WHO提供的材料，目前得到确证的第提供的材料，目前得到确证的第1次流感大流行是次流感大流行是在在1918年的欧洲大陆。年的欧洲大陆。1915年春，英格兰就发现了零星的流感病人。到年春，英格兰就发现了零星的流感病人。到1917年，欧年，欧洲大陆也发现少量流感患者。洲大陆也发现少量流感患者。1918年美国被卷入战争。大年美国被卷入战争。大批运输船将美国士兵从大西洋彼岸运到欧洲。在批运输船将美国士兵从大西洋彼岸运到欧洲。在1个多月个多月的海上航行期间，流感病毒在美军士兵中肆虐。幸存的士的海上航行期间，流感病毒在美军士兵中肆虐。幸存的士兵又将流感病毒带到欧洲战场，引发了欧洲乃至世界的流兵又将流感病毒带到欧洲战场，引发了欧洲乃至世界的流感大流行。感大流行。全世界在这次流感大流行中死亡人数高达全世界在这次流感大流行中死亡人数高达20002000万（万（4-54-5千千万）万）西班牙西班牙流感流感。流感医学知识培训2流感侵入人体的魔鬼“Influenza”“被魔鬼侵入流感流感 Influenza此后，流感又有此后，流感又有2 2次世界性大流行次世界性大流行:19571957年年 1958 1958年年 香港香港 亚洲亚洲流感流感 200万万19681968年年 1969 1969年年香港香港 香港流感香港流感 100万万此外，在不同国家和地区，流感还有较小的流行。此外，在不同国家和地区，流感还有较小的流行。19771977俄罗斯流感俄罗斯流感急性呼吸道传染病急性呼吸道传染病:骤发高热、头痛、全身酸痛、乏力及骤发高热、头痛、全身酸痛、乏力及轻微呼吸道症状。轻微呼吸道症状。流感病毒尤其是甲型流感病毒，易发生变异，而且传染性流感病毒尤其是甲型流感病毒，易发生变异，而且传染性强，传播迅速，易引起流行强，传播迅速，易引起流行epidemic及大流行及大流行pandemic。流感病毒经流感病毒经空气飞沫空气飞沫传播，人群普遍易感。传播，人群普遍易感。流感医学知识培训3流感 Influenza此后，流感又有2次世界性大流行:流感流感病毒属正粘病毒科，病毒颗粒呈球形，直径为流感病毒属正粘病毒科，病毒颗粒呈球形，直径为80-12080-120nmnm。病毒。病毒基因组是分节段的基因组是分节段的（甲，乙型毒株含（甲，乙型毒株含8 8个节段，而丙型仅含个节段，而丙型仅含7 7个节段，少一个编码神经氨酸个节段，少一个编码神经氨酸酶蛋白的节段），酶蛋白的节段），-ssRNA。根据病毒粒根据病毒粒核蛋白（核蛋白（NPNP）和膜蛋白（和膜蛋白（MPMP）抗原特性及抗原特性及其基因特性其基因特性不同，流感病毒分为甲、乙、丙三型。不同，流感病毒分为甲、乙、丙三型。乙、丙型只感染人类。乙、丙型只感染人类。甲型流感病毒可感染人及其他物种。又可以分成甲型流感病毒可感染人及其他物种。又可以分成H H1-15 1-15 N N1-91-9亚型。理论上甲型流感可分为亚型。理论上甲型流感可分为135135种之多。种之多。流感病毒流感病毒 Influenza virus流感医学知识培训4流感病毒属正粘病毒科，病毒颗粒呈球形，直径为80-120nmThe envelope contains two species of glycoprotein(haemagglutinin and neuraminidase)and a non-glycosylated protein(M2).Underlying the envelope is a layer of M1(membrane or matrix)protein,which encloses the helical nucleocapsid(eight segments of ssRNA coated with nucleoprotein)and several other proteins.Influenza A virus流感医学知识培训5The envelope contains two specn19181918年年 西班牙流感西班牙流感 H H1 1N N1 1n19571957年年 香港流感香港流感 H H2 2N N2 2n19681968年年 香港流感香港流感 H H3 3N N2 2流感医学知识培训61918年 西班牙流感 H1N1流感医学知识培训6侵入人体的魔鬼侵入人体的魔鬼流感流感 流感病毒不耐热流感病毒不耐热,在在5656以上的环境中数以上的环境中数minmin即失即失去致病力去致病力,酸、乙醚、甲醛、紫外线和各种消毒剂酸、乙醚、甲醛、紫外线和各种消毒剂如酒精、石炭酸和漂白粉等均可使病毒灭活。如酒精、石炭酸和漂白粉等均可使病毒灭活。甲型流感病毒命名法甲型流感病毒命名法：型别型别/宿主宿主/分离地点分离地点/毒株序号（指采样时标本号）毒株序号（指采样时标本号）/分离年代（血凝素和神经氨酸酶亚型），如分离年代（血凝素和神经氨酸酶亚型），如:A/A/马马/黑龙江黑龙江/1/98/1/98（H3N8H3N8）流感医学知识培训7侵入人体的魔鬼流感 流感病毒不耐热,在56以上的环境中致病机制致病机制 感染鼻黏膜的纤毛上皮细胞感染鼻黏膜的纤毛上皮细胞侵犯气管、支气管侵犯气管、支气管遇到以往抗体；遇到以往抗体；若不同，若不同，V V进入细胞进入细胞进行性感染，进行性感染，12 d内引起呼吸道炎症内引起呼吸道炎症细胞细胞病变病变坏死、崩解；坏死、崩解；炎症反应有助于血液成分外渗（免疫细胞、抗体等）灭活炎症反应有助于血液成分外渗（免疫细胞、抗体等）灭活V或破坏感染或破坏感染的细胞的细胞缩短病程；缩短病程；发病初期发病初期13 d鼻咽分泌物中含大量病毒鼻咽分泌物中含大量病毒传染性最强，病程数天；传染性最强，病程数天；少数患者病毒向下呼吸道扩散少数患者病毒向下呼吸道扩散间质性肺炎；间质性肺炎；流感引起的死亡多为流感引起的死亡多为继发性细菌感染或体质弱并患其它慢性疾病继发性细菌感染或体质弱并患其它慢性疾病。特异性免疫特异性免疫体液免疫体液免疫HAHA抗体结合并覆盖病毒吸附位点；（抗体结合并覆盖病毒吸附位点；（NA抗体抑制抗体抑制V释放）释放）细胞免疫细胞免疫CTLCTL 流感医学知识培训8致病机制 感染鼻黏膜的纤毛上皮细胞侵犯气管、支气管遇在流感病毒包膜上，有两种糖蛋白突起，血凝素在流感病毒包膜上，有两种糖蛋白突起，血凝素(HA)和神和神经氨酸酶经氨酸酶(NA)流感病毒的吸附只与流感病毒的吸附只与HA有关，有关，而与而与NA无关无关 （病毒的感染性只能被抗血凝素的抗血清所中和，不能被病毒的感染性只能被抗血凝素的抗血清所中和，不能被抗神经氨酸酶的抗血清中和抗神经氨酸酶的抗血清中和）流感病毒包膜上血凝素流感病毒包膜上血凝素(HA)三聚体结构（三亚基）三聚体结构（三亚基）流感医学知识培训9在流感病毒包膜上，有两种糖蛋白突起，血凝素(HA)和神经氨酸流感病毒包膜上血凝素流感病毒包膜上血凝素(HA)分分4个区个区1.细胞受体结合区：细胞受体结合区：流感病毒的流感病毒的VAP与宿主细胞表面糖蛋白受与宿主细胞表面糖蛋白受体的体的唾液酸唾液酸结合，这是结合，这是HA的主要功能。其受体结合位点位于的主要功能。其受体结合位点位于三聚体的顶端，形似一个裂缝或小口袋。它是病毒包膜糖蛋白三聚体的顶端，形似一个裂缝或小口袋。它是病毒包膜糖蛋白HA与细胞受体相互作用的分子基础。与细胞受体相互作用的分子基础。2.融合区：融合区：HA蛋白具有促膜融合的活性，但蛋白具有促膜融合的活性，但HA只有经蛋白酶只有经蛋白酶切割产生切割产生HA1和和HA2后才具有融合活性。后才具有融合活性。3.跨膜区：跨膜区：在靠近在靠近HA分子的羧基端大约有分子的羧基端大约有25个个AA残基组成非残基组成非极性区即极性区即HA的跨膜区。的跨膜区。4.膜内区：膜内区：HA分子羧基端最后分子羧基端最后10个个AA在病毒包膜内表面。在病毒包膜内表面。流感医学知识培训10流感病毒包膜上血凝素(HA)分4个区1.细胞受体结合区：流感医学知识培训11流感医学知识培训11流感病毒的变异流感病毒的变异Error rates of DNA polymerases and RNA polymerasesRNA聚合酶无校正功能聚合酶无校正功能流感医学知识培训12流感病毒的变异Error rates of DNA poly流感病毒的变异流感病毒的变异Recombination between the DNAs of two virus strains流感医学知识培训13流感病毒的变异Recombination between tTemplate switching mechanism of recombination in ssRNA viruses.流感病毒的变异流感病毒的变异流感医学知识培训14Template switching mechanism oInfluenza virus reassortment流感病毒的变异流感病毒的变异流感医学知识培训15Influenza virus reassortment流感病流感病毒的抗原变异流感病毒的抗原变异抗原漂移抗原漂移 antigenic drift 编码表面抗原（编码表面抗原（HA、NA）基因点突变累积导）基因点突变累积导致抗原位点的改变，属量变，变异幅度小。致抗原位点的改变，属量变，变异幅度小。epidemic流感医学知识培训16流感病毒的抗原变异抗原漂移 antigenic drifte抗原转变抗原转变 antigenic shift 由于基因组重排导致新的亚型出现，由于基因组重排导致新的亚型出现，属质变，变异幅度大。属质变，变异幅度大。流感病毒的抗原变异流感病毒的抗原变异pandemic流感医学知识培训17抗原转变 antigenic shift流感病毒的抗原变异禽流感禽流感(Avian Influenza)Avian Influenza Virus(AIV)n禽类的病毒性流行性感冒禽类的病毒性流行性感冒 n由由A A型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多中症狀的传染病，禽类在严重全身败血症等多中症狀的传染病，禽类在感染后死亡率很高感染后死亡率很高 n禽流感的病症及发病初期，都与一般流感类似，禽流感的病症及发病初期，都与一般流感类似，但发烧可高至但发烧可高至4141度，且较一般流感容易影响肝度，且较一般流感容易影响肝功能，也较易引致淋巴細胞減少及呼吸衰竭，功能，也较易引致淋巴細胞減少及呼吸衰竭，甚至甚至多器官功能衰竭而死亡多器官功能衰竭而死亡流感医学知识培训18禽流感(Avian Influenza)Avian In兽医焚烧已感染禽流感鸡鸭的尸体兽医焚烧已感染禽流感鸡鸭的尸体 法国让泽农民在一家农场检查鸡法国让泽农民在一家农场检查鸡 流感医学知识培训19兽医焚烧已感染禽流感鸡鸭的尸体 法国让泽农民在一家农场检查鸡流感医学知识培训20流感医学知识培训20美国疾病控制和预防中心公布的一张未标明日期的彩美国疾病控制和预防中心公布的一张未标明日期的彩色电子显微照片。它显示出色电子显微照片。它显示出H5N1型禽流感病毒（金型禽流感病毒（金黄色）在黄色）在MDCK细胞（绿色）培养液中的活动状态细胞（绿色）培养液中的活动状态流感医学知识培训21美国疾病控制和预防中心公布的一张未标明日期的彩色电子显微照片放大放大15万倍的万倍的H5N1型禽流感病毒电镜照片型禽流感病毒电镜照片流感医学知识培训22放大15万倍的H5N1型禽流感病毒电镜照片流感医学知识培训2国际疫情国际疫情地区地区(时间时间)感染数感染数死亡数死亡数越南越南10106 65252泰国泰国30302020柬埔寨柬埔寨7 77 7埃及埃及50502222阿塞拜疆阿塞拜疆8 85 5香港香港20207 7印尼印尼137137112112 土耳其土耳其12124 4人人全球全球 387人感染人感染 死死245人人（从（从20032008/9）禽流感禽流感 2008/9/10中国大陆中国大陆 25人人 17人人流感医学知识培训23国际疫情地区(时间)感染数死亡数越南10652泰国3020柬流感医学知识培训24流感医学知识培训24流感医学知识培训25流感医学知识培训25禽流感病毒禽流感病毒于环境中存活情形于环境中存活情形 WHOWHO研研究究指指出出禽禽流流感感病病毒毒能能长长期期存存活活在在受受感感染染的的禽禽类类粪粪便便、水水和和纸纸巾巾中中，且且在在低低温温环环境境中中存存活活时时间间更更久久，如如在在水水中中于于2222可可生生存存4d4d，00以以下下生生存存30d30d；在在冰冰冻物品冻物品中更可中更可无限期生存无限期生存。流感医学知识培训26禽流感病毒于环境中存活情形 WHO研究指出禽流感病毒能长期NATURE|2003(6 MAR):422流感医学知识培训27NATURE|2003(6 MAR):422流感医学知识流感医学知识培训培训ppt课件28传染途径传染途径 n消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等途径，消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等途径，主要主要经由呼吸道粘液或粪便直接接触传染或间经由呼吸道粘液或粪便直接接触传染或间接由污染的水及饲料等传播。接由污染的水及饲料等传播。n有有专家认为主要是通过粪便中大量的病毒粒子专家认为主要是通过粪便中大量的病毒粒子污染空气而传播，人员和车辆往來是传播禽流污染空气而传播，人员和车辆往來是传播禽流感的重要因素，另外吸血昆虫可传播病毒，带感的重要因素，另外吸血昆虫可传播病毒，带毒的种蛋可進行垂直传播毒的种蛋可進行垂直传播。n水棲候水棲候鸟鸟在自然界中在自然界中携帶携帶H H5 5N N1 1病毒最多病毒最多。流感医学知识培训29传染途径 消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等途径，主要经由呼禽流感禽流感潜伏期潜伏期 n感染禽流感感染禽流感临床症状潜伏期从几小時到临床症状潜伏期从几小時到几天不等几天不等n一般发病率高、死亡率低一般发病率高、死亡率低n但高致病力毒株感染时，发病率和死亡但高致病力毒株感染时，发病率和死亡率可达率可达100%100%流感医学知识培训30禽流感潜伏期 感染禽流感临床症状潜伏期从几小時到几天不等流感禽流感禽流感症状症状n人人类患上禽流感后，潜伏期一般为类患上禽流感后，潜伏期一般为7(1-4)d以內，以內，早期早期症状与其它流感非常相似，主要表现为发热、症状与其它流感非常相似，主要表现为发热、流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、全身不适时，流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、全身不适时，部分患者可有结膜炎、恶心、腹痛、腹泻、稀水部分患者可有结膜炎、恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症狀，样便等消化道症狀，通常通常27d內內会自然痊愈会自然痊愈n年龄较大、治疗过迟的患者年龄较大、治疗过迟的患者病情病情会迅速发展成进会迅速发展成进行性肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔行性肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、全血細胞減少、肾衰竭、败血症休克及积液、全血細胞減少、肾衰竭、败血症休克及Reye综合征等多种并发症而死亡综合征等多种并发症而死亡 流感医学知识培训31禽流感症状人类患上禽流感后，潜伏期一般为7(1-4)d以內禽流感的治疗疗n以下抗病毒以下抗病毒药剂可抑制流感病毒，使症狀药剂可抑制流感病毒，使症狀减轻病程缩短，应在减轻病程缩短，应在发病初期发病初期24-48h服用，服用，方能有效控制病情方能有效控制病情n金刚胺金刚胺(amantadine):仅对仅对A型流感有效，会型流感有效，会产生神经及肠胃系統副作用，抗药性高，使产生神经及肠胃系統副作用，抗药性高，使用需注意用需注意nRimantadine:仅对仅对A型流感有效，抗药性高型流感有效，抗药性高n克流感克流感(tamiflu):副作用较低副作用较低流感医学知识培训32禽流感的治疗以下抗病毒药剂可抑制流感病毒，使症狀减轻病程缩短食品安全食品安全n一般只要以一般只要以56加加热热3h、60加热加热30min或或100加热加热1min均可杀灭病毒均可杀灭病毒;n只要只要将鸡肉、鸡蛋等食品确实煮熟食用，将鸡肉、鸡蛋等食品确实煮熟食用，且充分加热就可以减少被感染的几率且充分加热就可以减少被感染的几率。流感医学知识培训33食品安全一般只要以56加热3h、60加热30min或10预防措施预防措施n减少与禽类接触减少与禽类接触 n养成良好个人卫生养成良好个人卫生习惯习惯 n切勿切勿食用未烹煮的肉类食用未烹煮的肉类 n减少出入公共场所减少出入公共场所 n均衡饮食，适当运动，提升自身免疫力均衡饮食，适当运动，提升自身免疫力n出出现疑似症狀，依指示戴口罩就医现疑似症狀，依指示戴口罩就医2008年年11月月2-3日在北京召开日在北京召开 H5N1 pandemic flu流感医学知识培训34预防措施减少与禽类接触 2008年11月2-3日在北京召开 世卫组织被指夸大甲流威胁世卫组织被指夸大甲流威胁 建专家组进行调查建专家组进行调查 中新网中新网2010年年4月月13日电：日电：大约大约1年前，世界卫生组织因甲型年前，世界卫生组织因甲型H1N1流感流感出现而发出出现而发出21世纪首个流感大流行警告，但此后一直有舆论批评世纪首个流感大流行警告，但此后一直有舆论批评世卫受到商业利益影响，夸大甲流威胁。世卫世卫受到商业利益影响，夸大甲流威胁。世卫12日组成专家调查日组成专家调查小组，针对有关争议展开调查。小组，针对有关争议展开调查。世卫特别从组织以外请来世卫特别从组织以外请来29位专家，组成国际卫生条例检讨委员会，位专家，组成国际卫生条例检讨委员会，从从12日起，在瑞士日内瓦举行日起，在瑞士日内瓦举行3天的成立会议。世卫总干事陈冯富天的成立会议。世卫总干事陈冯富珍强调，专家小组应是珍强调，专家小组应是“独立、可信和透明独立、可信和透明”。甲型甲型 H1N1流感流感A H1N12010/06/08国际在线专稿：据克罗地亚国家报国际在线专稿：据克罗地亚国家报6月月7日日报道，日前，英国相关部门的一项调查显示，报道，日前，英国相关部门的一项调查显示，WHO 的的3名专家从生产达菲的药厂收受贿赂，有意制造了甲型流名专家从生产达菲的药厂收受贿赂，有意制造了甲型流感病毒的恐慌。感病毒的恐慌。流感医学知识培训35世卫组织被指夸大甲流威胁 建专家组进行调查 甲型 H1N1流n禽流感病毒致病力的变化范围很大。流感病禽流感病毒致病力的变化范围很大。流感病毒感染引发的疾病可能是不明显的或是温和毒感染引发的疾病可能是不明显的或是温和的一过性的综合征，甚至是的一过性的综合征，甚至是100%发病率和发病率和/或死亡率的疾病。或死亡率的疾病。n疾病的症状可能表现在呼吸道、肠道或生殖疾病的症状可能表现在呼吸道、肠道或生殖系统，并随病毒种类、动物种别、龄期、并系统，并随病毒种类、动物种别、龄期、并发感染、周围环境及宿主免疫状态的不同而发感染、周围环境及宿主免疫状态的不同而不同。不同。n禽流感病毒的毒力主要决定于病毒粒子的复禽流感病毒的毒力主要决定于病毒粒子的复制速率和血凝素蛋白裂解位点附近的制速率和血凝素蛋白裂解位点附近的氨基酸氨基酸组成组成。Avian Influenza Virus,(AIV)检测检测 流感医学知识培训36禽流感病毒致病力的变化范围很大。流感病毒感染引发的疾病可能是n n临床诊断：临床诊断：（1）高致病性禽流感：）高致病性禽流感：爆发时家禽大批急性爆发时家禽大批急性死亡，产蛋停止，呼吸道症状，头部、颜面死亡，产蛋停止，呼吸道症状，头部、颜面部和颈部浮肿，无毛部皮肤（冠肉髯、脚部）部和颈部浮肿，无毛部皮肤（冠肉髯、脚部）发绀、肿、出血、坏死，白绿色下痢。发绀、肿、出血、坏死，白绿色下痢。（2）低致病性禽流感：）低致病性禽流感：无症状急性感染，死无症状急性感染，死亡率为亡率为5%15%，产蛋率下降，产蛋率下降5%50%，呼吸道病变、气管水肿、干酪样渗出物、气呼吸道病变、气管水肿、干酪样渗出物、气囊炎，肾脏肿大、尿酸盐沉着。囊炎，肾脏肿大、尿酸盐沉着。禽流感病毒禽流感病毒检测检测流感医学知识培训37临床诊断：禽流感病毒检测流感医学知识培训37n n实验室诊断实验室诊断 仅根据临诊症状及剖检病变，很仅根据临诊症状及剖检病变，很难确诊，必须进行实验室诊断。难确诊，必须进行实验室诊断。（1）病毒分离）病毒分离（2）血清学检测）血清学检测（3）病毒定型及定性）病毒定型及定性（4）致病性（毒力）的测定）致病性（毒力）的测定（5）基因诊断）基因诊断 禽流感病毒禽流感病毒检测检测流感医学知识培训38实验室诊断禽流感病毒检测流感医学知识培训38生物安全实验室生物安全实验室P1实验室实验室研究的病毒研究的病毒危险性较低危险性较低，试验人员连口罩都，试验人员连口罩都不用带，穿上白大褂就可以了，试验人员在这里很放松；不用带，穿上白大褂就可以了，试验人员在这里很放松；P2实验室实验室研究的是研究的是中度危险的病源中度危险的病源，像，像肝炎、流感冒肝炎、流感冒等等，要求戴防护性较好的口罩；等等，要求戴防护性较好的口罩；P3实验室实验室研究的是研究的是高度危险病毒高度危险病毒，传染性很强，而且，传染性很强，而且无疫苗，试验人员的保护措施要比无疫苗，试验人员的保护措施要比P1/P2实验室严密得多；实验室严密得多；P4实验室实验室全球级别最高的生物安全实验室，研究的是全球级别最高的生物安全实验室，研究的是极度危险的病毒极度危险的病毒，例如令人谈之色变的，例如令人谈之色变的Ebola病毒病毒，进入这种，进入这种实验室的工作人员，处于防护服的严密保护之下，连空气都实验室的工作人员，处于防护服的严密保护之下，连空气都不能在实验室内呼吸，红色螺旋状管子，是专门用来向室内不能在实验室内呼吸，红色螺旋状管子，是专门用来向室内输送新鲜空气的，试验人员一进入实验室，要先屏住呼吸，输送新鲜空气的，试验人员一进入实验室，要先屏住呼吸，马上接上这种管子，然后才能呼吸。马上接上这种管子，然后才能呼吸。流感医学知识培训39生物安全实验室P1实验室研究的病毒危险性较低，试验人员连实验室诊断实验室诊断 （1）病毒分离）病毒分离 n n取样：取样：取样：取样：喉头、气管、肺、气囊、肝、脾、脑及直肠喉头、气管、肺、气囊、肝、脾、脑及直肠内容物等。（置于加有青霉素内容物等。（置于加有青霉素10000 U/ml，链霉素链霉素10000 U/ml组织培养液或组织培养液或50%葡萄糖磷酸盐缓冲液葡萄糖磷酸盐缓冲液中中4保存或运输，不超过保存或运输，不超过48h。）。）n n接种：接种：接种：接种：用上述溶液将病料制成用上述溶液将病料制成10%乳剂乳剂-70保存保存或或3000 r/m离心离心5min，取上清液用取上清液用0.2-0.45um的滤的滤膜过滤除菌，取滤液膜过滤除菌，取滤液0.3ml，尿囊腔接种尿囊腔接种9-11日龄日龄SPF鸡胚，每份样品至少接种鸡胚，每份样品至少接种5个鸡胚。个鸡胚。禽流感病毒禽流感病毒检测检测流感医学知识培训40实验室诊断禽流感病毒检测流感医学知识培训40实验室诊断实验室诊断（1）病毒分离）病毒分离 n n孵化孵化孵化孵化:374d(剔除接种后剔除接种后24h内死亡鸡胚内死亡鸡胚)，置于，置于4 612h杀死鸡胚，吸取尿囊液，同时采取绒毛尿杀死鸡胚，吸取尿囊液，同时采取绒毛尿囊膜。尿囊液中若含有囊膜。尿囊液中若含有AIV时，时，HA试验呈阳性。试验呈阳性。n n判断：判断：判断：判断：若初代尿囊液若初代尿囊液HA试验呈阴性，需再传一代，试验呈阴性，需再传一代，取尿囊液取尿囊液1:10稀释接种稀释接种0.3ml/胚，再呈阴性则判断为胚，再呈阴性则判断为阴性反应；若呈阳性，用阴性反应；若呈阳性，用ND抗血清进行抗血清进行HI试验，若试验，若呈阴性反应时再结合以下血清学诊断可初步判定为呈阴性反应时再结合以下血清学诊断可初步判定为AIV感染。感染。禽流感病毒禽流感病毒检测检测流感医学知识培训41实验室诊断禽流感病毒检测流感医学知识培训41（2）血清学检测）血清学检测n利用利用AGP(琼脂凝胶扩散试验琼脂凝胶扩散试验)、ELISA方法可检测方法可检测A型流感病毒共有的特异性抗体或抗原，已鉴定的型流感病毒共有的特异性抗体或抗原，已鉴定的标准标准AIV制备的抗原可用检测可疑鸡群的血清抗体制备的抗原可用检测可疑鸡群的血清抗体（此步骤可在病毒分离前进行）。（此步骤可在病毒分离前进行）。n将上述病毒分离时采用的鸡胚尿囊膜用将上述病毒分离时采用的鸡胚尿囊膜用PBS（pH=7.2）洗净，排尽囊中液体，研磨乳剂，反复冻融洗净，排尽囊中液体，研磨乳剂，反复冻融3次，次，3000r/m离心离心10min，取上清液，用终浓度取上清液，用终浓度0.1%的福尔马林经的福尔马林经3736h灭活，即可用作灭活，即可用作AGP抗抗原（原（3个膜可制做约个膜可制做约1ml抗原）。用已知的标准抗抗原）。用已知的标准抗血清与其进行血清与其进行AGP试验，鉴定分离病毒试验，鉴定分离病毒。禽流感病毒禽流感病毒检测检测流感医学知识培训42（2）血清学检测禽流感病毒检测流感医学知识培训42（3）病毒定型及定性）病毒定型及定性 nH和和N亚型：确定亚型需用已定型（亚型：确定亚型需用已定型（H1H5，N1 N9）的一系列单特异性抗血清做的一系列单特异性抗血清做HI(血凝抑制血凝抑制)试验，因此应交专门机构进行试验，因此应交专门机构进行。（4）致病性（毒力）的测定）致病性（毒力）的测定 nHPAIV的判定标准（美国家畜卫生协会）的判定标准（美国家畜卫生协会）（5）基因诊断）基因诊断 利用利用PCR方法直接检出病毒的基因，较常规的病毒方法直接检出病毒的基因，较常规的病毒分离法速度快，特异性高，而且可克服因野外取分离法速度快，特异性高，而且可克服因野外取料混有其他病毒造成的误诊。料混有其他病毒造成的误诊。禽流感病毒禽流感病毒检测检测某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集红细胞凝集红细胞凝集反应（反应（HA）。这种凝集反应克被加入的特异性血清所抑制）。这种凝集反应克被加入的特异性血清所抑制红细胞凝集抑制试验（红细胞凝集抑制试验（HI）。）。流感医学知识培训43（3）病毒定型及定性 禽流感病毒检测某些病毒能够与人或动物的