免疫凝集反应及临床应用培训 参考ppt课件

免疫凝集反应及临床应用免疫凝集反应及临床应用刘刘 静静 2014.11.261免疫凝集反应及临床应用刘 静 1细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性颗粒性抗抗原，或原，或可溶性可溶性抗原（或抗体）与抗原（或抗体）与载体颗粒载体颗粒结合成致敏结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在在一定条件一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。下，形成肉眼可见的凝集现象。凝集反应定义凝集反应定义2细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原反应阶段：反应阶段：抗原抗体的特异性结合阶段抗原抗体的特异性结合阶段出现肉眼可见的凝集现象出现肉眼可见的凝集现象凝集反应凝集反应反应特点：反应特点：IgMIgM的作用比的作用比IgGIgG大数百倍大数百倍IgGIgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体抗体3反应阶段：凝集反应反应特点：3可见反应形成可见反应形成4可见反应形成4电解质：电解质：稀释液或缓冲液（稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl8.5g/L NaCl）pHpH：pH6pH6pH9pH9（pH3 pH3为细菌抗原的等电点）为细菌抗原的等电点）温度：温度：15154040，3737最适（最适（4 4特例特例 ）反应时间：反应时间：不同反应时间不同不同反应时间不同外力：外力：震荡或搅拌震荡或搅拌环境因素环境因素5电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl）环境因素5分类：直接与间接凝集反应6分类：直接与间接凝集反应6 颗粒性抗原颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。包括：包括：玻片凝集试验玻片凝集试验试管凝集试验试管凝集试验直接凝集反应直接凝集反应direct agglutinationdirect agglutination7 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见玻片凝集试验：玻片凝集试验：l定性定性l已知抗体检测抗原已知抗体检测抗原l简便、快速简便、快速l菌种的诊断或分型菌种的诊断或分型lABO血型的鉴定血型的鉴定8玻片凝集试验：8试管凝集试验：试管凝集试验：l半定量半定量l已知抗原检测抗体已知抗原检测抗体l易引起抗原的非特异性凝集易引起抗原的非特异性凝集l肥达试验肥达试验9试管凝集试验：90.50.50.50.50.50.5 0.50.50.50.5弃掉弃掉0.50.5 试管凝集试验原理试管凝集试验原理结结果果 1 2 3 4 5 6 7菌液菌液100.50.50.50.50.5弃掉0.5 +很小的凝集颗粒很小的凝集颗粒混浊混浊-无凝集现象无凝集现象与对照相同与对照相同+小、部分凝集块小、部分凝集块中等混浊中等混浊+大多凝集管底大多凝集管底轻度混浊轻度混浊+大的凝集块大的凝集块清亮清亮凝集程度凝集程度沉淀沉淀上清上清试管凝集试验结果判断试管凝集试验结果判断11+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同+小、部分凝集块管底沉淀管底沉淀凝集程度凝集程度最高稀释比例最高稀释比例待测血清的滴度待测血清的滴度试管凝集试验试管凝集试验结果判断结果判断12管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度试管凝集试验12 将将可溶性抗原或抗体可溶性抗原或抗体吸附于吸附于颗粒性载体颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象间接凝集反应间接凝集反应indirect agglutinationindirect agglutination13 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体RBCRBC、白陶土、活性炭、某些细菌、白陶土、活性炭、某些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒聚苯乙烯胶乳颗粒良好载体有如下几点基本要求：良好载体有如下几点基本要求：在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；大小均大小均匀；匀；比重与介质相似，短时间内不能沉淀；比重与介质相似，短时间内不能沉淀；无化学或血清学活性；无化学或血清学活性；吸附吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。抗原（或抗体）后，不影响其活性。目前应用最广的是人的目前应用最广的是人的O O型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其来源型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约1 0001 000个以上）糖蛋白受体，极易吸个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。附某些抗原物质，吸附性能好。载体种类载体种类14RBC、白陶土、活性炭、某些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒载体种类1正向间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验协同凝集试验协同凝集试验间接凝集反应间接凝集反应15正向间接凝集试验间接凝集反应15用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗体检测抗体正向间接凝集反应正向间接凝集反应16用抗原致敏载体-检测抗体正向间接凝集反应16反向间接凝集反应反向间接凝集反应用抗体致敏载体用抗体致敏载体-检测抗原检测抗原17反向间接凝集反应用抗体致敏载体-检测抗原17间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测抗原检测抗原有凝集颗有凝集颗粒为粒为阴性阴性18间接凝集抑制反应用抗原致敏载体-检测抗原有凝集颗粒为阴性1反向间接凝集试验，载体为金黄色葡反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌萄球菌金黄色葡萄球菌的细胞壁成分金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A A蛋白，蛋白，和和IgGIgG的的FcFc段结合，使段结合，使FabFab段暴露在菌段暴露在菌体表面，体表面，Fab Fab段仍然保持正常的抗体段仍然保持正常的抗体活性。活性。利用这种特性可以将特异性利用这种特性可以将特异性IgGIgG结合在结合在菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性抗原。抗原。协同凝集反应协同凝集反应19反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌协同凝集反应19 原理图原理图IgGSPASPA-IgG 待测抗原待测抗原SPA-IgG-SPA-IgG-待测抗原待测抗原凝集颗粒凝集颗粒混混合合 加入加入20 原理图IgGSPASPA-IgG 待间接血凝试验间接血凝试验胶乳凝集试验胶乳凝集试验明胶凝集试验明胶凝集试验按载体分类间接凝集试验按载体分类间接凝集试验21间接血凝试验按载体分类间接凝集试验21以红细胞为载体的间接凝集试验。以红细胞为载体的间接凝集试验。将已知抗原将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，或抗体）致敏红细胞，与相应抗体（或抗原）特异结合，出与相应抗体（或抗原）特异结合，出现红细胞凝集现象。现红细胞凝集现象。间接血凝试验间接血凝试验22以红细胞为载体的间接凝集试验。间接血凝试验22红细胞红细胞抗原抗原致敏致敏致致敏敏红红细细胞胞红红细细胞胞凝凝集集 间接血凝试验待测抗体待测抗体间接血凝试验原理间接血凝试验原理23红细胞抗原致敏致敏红细胞红细胞凝集 间-：红细胞沉积于孔底+：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集+：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散+：红细胞形成片层凝集，面积略多于+：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状血凝试验强度血凝试验强度24-：红细胞沉积于孔底血凝试验强度24与一般间接血凝试验不同与一般间接血凝试验不同之处为反应中的之处为反应中的红细胞是未红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞经致敏的受检者新鲜红细胞主要试剂材料为主要试剂材料为抗红细胞抗红细胞单克隆抗体单克隆抗体，能与红细胞结，能与红细胞结合，但不引起凝集反应合，但不引起凝集反应这种抗体与另一特异性抗这种抗体与另一特异性抗体连接成的体连接成的双功能抗体双功能抗体可用可用于检测标本中的抗原于检测标本中的抗原如与特异性抗原连接，则如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体可用于检测标本中的抗体反应中的反应中的标本为受检者的标本为受检者的全血全血HIV抗体、抗体、HBV抗原检测抗原检测自身红细胞凝集试验自身红细胞凝集试验25与一般间接血凝试验不同之处为反应中的红细胞是未经致敏的受检者胶乳凝集试验胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定，均一性好但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度不及血凝试验26胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应26明胶凝集试验明胶凝集试验以明胶为载体颗粒的间接凝集反应用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体的检测梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)27明胶凝集试验以明胶为载体颗粒的间接凝集反应27抗球蛋白参与的血凝试验抗球蛋白参与的血凝试验28抗球蛋白参与的血凝试验28抗球蛋白参与的血凝试验抗球蛋白参与的血凝试验又称又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集使红细胞凝集用于检测抗红细胞不完全抗体用于检测抗红细胞不完全抗体不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不出现可见反应，多为出现可见反应，多为7S7S的的IgGIgG诊断免疫性溶血性贫血的主要方法诊断免疫性溶血性贫血的主要方法29抗球蛋白参与的血凝试验又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体抗球蛋白参与的血凝试验抗球蛋白参与的血凝试验分为两种方法：分为两种方法：直接直接CoombsCoombs试验试验间接间接CoombsCoombs试验试验30抗球蛋白参与的血凝试验分为两种方法：30直接直接CoombsCoombs试验试验检测红细胞上的不完全抗体检测红细胞上的不完全抗体31直接Coombs试验检测红细胞上的不完全抗体31新生儿溶血症新生儿溶血症自身免疫性溶血症自身免疫性溶血症特发性自身免疫性贫血特发性自身免疫性贫血医源性溶血医源性溶血临床应用临床应用32新生儿溶血症临床应用32间接间接CoombsCoombs试验试验检测血清中游离的不完全抗体检测血清中游离的不完全抗体33间接Coombs试验检测血清中游离的不完全抗体33检测母体检测母体Rh(D)Rh(D)抗体抗体检测红细胞不相容的输血所产生检测红细胞不相容的输血所产生的血型抗体的血型抗体临床应用临床应用34检测母体Rh(D)抗体临床应用343535