第六章外源化学物的一般毒性作用解读课件

6/16/20241 第六章第六章 一般毒性作用一般毒性作用8/9/20231 第六章 一般毒性作用1第六章、一般毒性作用 1 概述概述 2 急性毒性作急性毒性作用用 3 局部毒性作用局部毒性作用 4 短期、短期、亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用第六章、一般毒性作用 1 概述2掌握一般毒性作用的概念、实验目的掌握一般毒性作用的概念、实验目的熟悉一般毒性试验方法要点熟悉一般毒性试验方法要点6/16/20243急性毒作用：概念、试验目的、试验方法急性毒作用：概念、试验目的、试验方法的要点、分级和评价的要点、分级和评价局部刺激：试验目的、试验类型局部刺激：试验目的、试验类型短期、亚慢性和慢性毒性作用：概述、研短期、亚慢性和慢性毒性作用：概述、研究方法、结果评价究方法、结果评价掌握一般毒性作用的概念、实验目的8/9/20233急性毒作用3毒性作毒性作用用一般毒性作用一般毒性作用-基础毒性基础毒性（急性毒性、（急性毒性、重复剂量毒性、重复剂量毒性、亚慢性毒亚慢性毒性、慢性毒性）性、慢性毒性）特殊毒性作用特殊毒性作用（致突变作用、致癌（致突变作用、致癌作用、致畸作用、作用、致畸作用、生殖发育生殖发育毒性）毒性）第一节、概述第一节、概述毒性作用一般毒性作用-基础毒性特殊毒性作用（致突变作用、致4基本概念基本概念一般毒性作用一般毒性作用(general toxicity)(general toxicity)，又称基础毒性，又称基础毒性(basic toxicity)(basic toxicity)，是指外源化学物在一定剂量、一定接，是指外源化学物在一定剂量、一定接触时间和接触方式下对试验动物产生的触时间和接触方式下对试验动物产生的综合毒效应综合毒效应。根据接触毒物的时间长短，可分为：根据接触毒物的时间长短，可分为：急性毒性急性毒性 急性毒性急性毒性实验实验亚急性毒性（亚急性毒性（重复剂量毒性重复剂量毒性）重复剂量毒性重复剂量毒性实验实验亚慢性毒性亚慢性毒性 亚慢性毒性亚慢性毒性实验实验慢性毒性慢性毒性 慢性毒性慢性毒性实验实验重要基本概念一般毒性作用(general toxicity)，又5一般毒性试验项目一般毒性试验项目一般毒性测试一般毒性测试污染物理化特性污染物理化特性了解毒性大小和特征了解毒性大小和特征确定阈和阈下剂量确定阈和阈下剂量了解对机体毒作用了解对机体毒作用靶点和指标靶点和指标急性毒性试验急性毒性试验亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验慢性毒性试验重复剂量毒重复剂量毒性试验性试验致死试验致死试验非致死试验非致死试验3个月及以内个月及以内3-6个月个月6个月至终身个月至终身一般毒性试验项目一般毒性测试污染物理化特性了解毒性大小和特征6第六章外源化学物的一般毒性作用解读课件7一般毒性评价一般毒性评价n一般毒性评价一般毒性评价的主要目的：的主要目的：确定受试物毒作用表现和性质确定受试物毒作用表现和性质确定受试物毒作用的剂量确定受试物毒作用的剂量-反应关系反应关系确定毒作用的靶器官确定毒作用的靶器官确定损害的可逆性确定损害的可逆性n一一般般毒毒性性评评价价：(evaluation(evaluation for for general general toxicity)toxicity)按按接接触触化化学学毒毒物物时时间间长长短短而而进进行行哺哺乳乳动动物物试试验验以以观观察察毒毒效效应应、评评价价化化学学毒毒物物综综合合毒毒性性的的试试验验，根根据据试试验验结结果果对对化化学学毒毒物物的的毒毒性性进进行行评评价价称为一般毒性评价。称为一般毒性评价。一般毒性评价一般毒性评价的主要目的：一般毒性评价：(eval8一般毒性一般毒性评价的意义评价的意义1 1是毒理学工作中非常重要的内容；是毒理学工作中非常重要的内容；2 2是是化化学学物物毒毒理理学学安安全全性性评评价价和和危危险险度度评评定定的基础；的基础；3 3对防治化学毒物对防治化学毒物急、慢性急、慢性中毒中毒，制订制订卫生卫生标准以及管理毒理学标准以及管理毒理学的决策方面的决策方面有重要意义。有重要意义。重要一般毒性评价的意义1是毒理学工作中非常重要的内容；重要9一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的二、急性毒性试验二、急性毒性试验方法、要点方法、要点经典急性毒性试验经典急性毒性试验急性毒性替代实验急性毒性替代实验急性毒作用观察急性毒作用观察三、急性毒性分级三、急性毒性分级6/16/202410急急 性性 毒毒 性性 作作 用用第二节 急性毒性作用一、急性毒性和急性毒性试验的目的8/9/202310急性毒性10急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)：是指机体是指机体(人或试人或试验动物验动物)一次接触或一次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后化学物后在在短期短期(最长到最长到1414天天)内所发生的内所发生的毒性效应毒性效应，包，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应亡效应，最主要的观察指标是最主要的观察指标是LD50。2424小时多次：国内规定小时多次：国内规定24h24h内一般不超过内一般不超过3 3次。次。6/16/202411急急 性性 毒毒 性性 作作 用用重要急性毒性(acute toxicity)：是指机体(人或试验111.1.急性接触急性接触的次数的次数：一次一次或或2424小时内多次小时内多次u“一次接触一次接触”是含有时间因素的。是含有时间因素的。经经口口接接触触和和各各种种注注射射接接触触，“一一次次接接触触”，是是指指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；而而经经呼呼吸吸道道吸吸入入与与经经皮皮肤肤接接触触，“一一次次接接触触”是是指指在在一一个个特特定定期期间间内内实实验验动动物物持持续续地地接接触触受受试试化化合物的过程合物的过程;u“多多次次”是是指指当当化化学学物物毒毒性性很很低低，需需要要给给予予动动物物较较大大剂剂量量时时，可可在在2424小小时时内内分分多多次次给给予予(一一般般不不超过超过3 3次次)。急性接触的次数：一次或24小时内多次122.2.中毒效应出现的时间中毒效应出现的时间:短期内短期内 “一一次次或或2424小小时时内内多多次次接接触触”后后所产生的毒性效应。所产生的毒性效应。观观察察时时间间一一般般为为7 7天天-14-14天天，如如有有必要可延长至必要可延长至1414天以上。天以上。3.3.中毒效应的强度中毒效应的强度：与与亚亚慢慢性性、慢慢性性中中毒毒相相比比，一一般般行行为为、外外观观、大大体体形形态态的的改改变变十十分分明明显显，中中毒毒症症状状严严重重，常常常常发发生死亡。生死亡。2.中毒效应出现的时间:短期内13求求出出LD50以以及及其其它它的的急急性性毒毒性性参参数数，了了解解急性毒作用强度。急性毒作用强度。通通过过观观察察动动物物中中毒毒表表现现和和死死亡亡的的情情况况，初初步步评评价价受受试试物物对对动动物物的的毒毒性性和和对对人人体体产产生生损损害害的的危危险险性性大大小小、毒毒效效应应特特征征、靶靶器器官和官和剂量剂量反应关系反应关系等等急性中毒资料急性中毒资料。为为亚亚慢慢性性、慢慢性性毒毒性性作作用用试试验验的的染染毒毒剂剂量设计提供参考依据。量设计提供参考依据。为毒理学为毒理学机制机制研究提供研究提供初步初步线索。线索。6/16/202414急急 性性 毒毒 性性 作作 用用急性毒性急性毒性试验的目的试验的目的:重要求出LD50以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。814常用的急性毒性参数：常用的急性毒性参数：LD50/LC50急性毒作用带急性毒作用带（Zac=LD50/Limac）LD100100/LD0101(或或LC100100LC0101)剂量剂量反应曲线斜率反应曲线斜率 6/16/202415急急 性性 毒毒 性性 作作 用用常用的急性毒性参数：8/9/202315急性毒性作用15（一一）LDLD5050 (或或LCLC5050)：是是急急性性毒毒性性评评价价中中重重要要的的参参数数，是是比比较较不不同同化化学学毒毒物物急急性性毒毒性性的重要基础。的重要基础。局限：局限：LDLD5050 (或或LCLC5050 )的的测测定定受受许许多多因因素素的的影影响响；不不能能反反映映化化学学毒毒物物致致死死作作用用的的中中毒特征；毒特征；LDLD5050波动性很大。波动性很大。（一）LD50(或LC50)：是急性毒性评价中重要的参数16（二）其他指标（二）其他指标 1.1.急性毒作用带急性毒作用带 （Zac=LDZac=LD5050/Lim/Limacac）：）：可可反反应应急急性性阈阈剂剂量量距距离离LDLD5050的的宽宽窄窄，即即表表示示引引起起实实验验动动物物的的死死亡亡剂剂量量与与最最低低毒毒作作用用剂剂量量之之间间剂剂量量范范围围的的宽宽窄窄。其其越越大大，表表示示化化学学物物引引起起急急性性死亡的死亡的危险性越小危险性越小。2.LD 2.LD8484/LD/LD1616(或或LCLC8484/LC/LC1616)：灵敏性好、重复性强而且容易求。灵敏性好、重复性强而且容易求。3.LD 3.LD100100、LDLD0101 4.4.剂量反应曲线斜率剂量反应曲线斜率 （二）其他指标17死亡率死亡率 死亡率死亡率%（概率（概率 100单位）单位）A B C 50 剂量（剂量（mg/kg）图图 两种化学物的毒性比较两种化学物的毒性比较死亡率 18LD50只能说明某毒物引起受试动物半数死只能说明某毒物引起受试动物半数死亡的剂量，亡的剂量，不能反应不能反应毒物致死作用的毒物致死作用的中毒中毒特征特征。当两种毒物当两种毒物LD50相等时，要正确评价毒物相等时，要正确评价毒物致死中毒特征，需利用剂量致死中毒特征，需利用剂量-死亡曲线死亡曲线斜率斜率。A和和B的的LD50相等，但剂量相等，但剂量-反应曲线斜率反应曲线斜率不同，在不同，在低浓度剂量下，低浓度剂量下，B毒性大；高剂量毒性大；高剂量下，下，A毒性大。毒性大。C毒性最低毒性最低LD50只能说明某毒物引起受试动物半数死亡的剂量，不能反应毒19急性毒性试验可以得到的毒性参数：急性毒性试验可以得到的毒性参数：绝对致死剂量或浓度绝对致死剂量或浓度(LD100或或LCl00)半数致死剂量或浓度半数致死剂量或浓度(LD50或或LC50)最小致死剂量或浓度最小致死剂量或浓度(MLD，LD01或或MLC，LC01)最大耐受剂量或浓度最大耐受剂量或浓度(MTD，LD0或或MTC，LC0)或称为最大非致死剂量或称为最大非致死剂量(MNLD)急性毒性急性毒性LOAEL(观察到有害作用的最低剂量观察到有害作用的最低剂量)急性毒性急性毒性NOAEL(未观察到有害作用的剂量未观察到有害作用的剂量)急性毒性的下限参数急性毒性的下限参数非致死性非致死性急性毒性急性毒性作用为终点作用为终点急性毒性的上限参数急性毒性的上限参数以死亡为终点以死亡为终点通过病理组织学和中毒症状观察等手段测定通过病理组织学和中毒症状观察等手段测定 急性毒性试验可以得到的毒性参数：绝对致死剂量或浓度(LD1201.1.试验动物试验动物的选择原则的选择原则化化学学毒毒物物的的代代谢谢和和毒毒效效应应表表现现与与人的反应尽可能一致的试验动物。人的反应尽可能一致的试验动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。检疫检疫6/16/202421急急 性性 毒毒 性性 作作 用用(一一)经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验1.试验动物的选择原则8/9/202321急性毒性作用(一)211 1）试验动物的）试验动物的种属和品系种属和品系最好用两最好用两个个种属的动物种属的动物啮齿类（为主）啮齿类（为主）:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。急急性性皮皮肤肤毒毒性性试试验验：成成年年大大鼠鼠、豚豚鼠鼠或或家家兔兔，优先考虑白色家兔。优先考虑白色家兔。急急性性吸吸入入和和经经口口急急性性毒毒性性试试验验：大大鼠鼠（优优先先）、小鼠、小鼠6/16/202422急急 性性 毒毒 性性 作作 用用经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验1）试验动物的种属和品系8/9/202322急性毒性作用经222 2）试验动物的）试验动物的年龄和体重年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常急性试验动物不宜过老或过幼，通常未曾交配未曾交配和和受孕的刚成年动物受孕的刚成年动物：大鼠大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、BeagleBeagle犬犬4-6kg4-6kg、杂种犬、杂种犬8-15kg8-15kg。（年龄与体年龄与体重一般是呈正比关系重一般是呈正比关系，因此常根据体重来推算因此常根据体重来推算其年龄其年龄）同一批试验动物同一批试验动物体重变异范围体重变异范围不应超过该批动不应超过该批动物物平均体重的平均体重的2020。6/16/202423急急 性性 毒毒 性性 作作 用用经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验2）试验动物的年龄和体重：8/9/202323急性毒性作用经233 3）试验动物的）试验动物的性别性别：一般一般急性毒性试验对动物性别要求为急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各半雌雄各半。如果在预试验时发现化学毒物如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的分别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的动物的LDLD5050测试。测试。6/16/202424急急 性性 毒毒 性性 作作 用用经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验3）试验动物的性别：8/9/202324急性毒性作用经典的急244）动物数量与随机分组：）动物数量与随机分组：至少至少3 3个剂量组，一般个剂量组，一般5-75-7剂量组剂量组大、小鼠等大、小鼠等小动物小动物 每组每组10只只狗等狗等大动物大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化随机化原则原则5）禁食：）禁食：经消化道染毒（如灌胃）时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒（如灌胃）时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在，但在禁食时要保障饮水禁食时要保障饮水。6）实验动物的预检：）实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物12周的检疫期周的检疫期，动物在实验前需饲养观察动物在实验前需饲养观察3-5d3-5d。25急急 性性 毒毒 性性 作作 用用经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验4）动物数量与随机分组：25急性毒性作用经典的急性毒性试验25 2.试验动物的饲养环境试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：3070%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格6/16/202426急急 性性 毒毒 性性 作作 用用 2.试验动物的饲养环境8/9/202326急性毒性作用263.受试物及处理 检检索索与与受受试试物物化化学学结结构构和和理理化化性性质质相相似似的的化化学学物物毒毒性性资料资料一次备齐全部实验用量一次备齐全部实验用量应以同一批号为宜应以同一批号为宜受试物成分和配方稳定不变受试物成分和配方稳定不变急性毒性试验受试物配制的急性毒性试验受试物配制的常用剂型常用剂型：水溶液、混悬液、油溶液。水溶液、混悬液、油溶液。水溶性受试物的溶剂通常用蒸馏水或去离子水水溶性受试物的溶剂通常用蒸馏水或去离子水注射等胃肠道外染毒需用生理盐水，保持与体内渗透压一致注射等胃肠道外染毒需用生理盐水，保持与体内渗透压一致水水不不溶溶性性受受试试物物应应溶溶于于或或悬悬浮浮于于有有机机溶溶剂剂中中，常常用用0.5%0.5%羟羟甲甲基基纤维素钠，纤维素钠，10%10%阿拉伯乳胶，天然植物油阿拉伯乳胶，天然植物油受试物一般应临用新鲜配制受试物一般应临用新鲜配制3.受试物及处理 274.染毒途径的选择染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择）的选择需考虑：需考虑：模拟人在生活和生产环境中实模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式际接触受试物的途径和方式；有利于不有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较同化学物之间急性毒性大小的比较；受受试物的性质和用途；各种受试物毒性评试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。价程序的要求等。n最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为经口经口(胃肠道胃肠道)经呼吸道经呼吸道经皮经皮注射途径注射途径 6/16/202428急急 性性 毒毒 性性 作作 用用4.染毒途径的选择:8/9/202328急性毒性作用28经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触:（oral exposureoral exposure）灌胃法、喂饲法、吞咽胶囊灌胃法、喂饲法、吞咽胶囊 n灌胃灌胃:（准确控制剂量，最常用，（准确控制剂量，最常用，等容量灌胃等容量灌胃法法）小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.0.2 2（0.40.4）ml/10gml/10g 大鼠不超过大鼠不超过5ml/5ml/只只或或1.0(2.0)ml/100g1.0(2.0)ml/100g体重体重 家兔不超过家兔不超过10ml/2kg10ml/2kg 狗不超过狗不超过50ml/10kg50ml/10kg 6/16/202429急急 性性 毒毒 性性 作作 用用染毒途径的选择染毒途径的选择:经口(胃肠道)接触:（oral exposure）8/9/29经呼吸道接触经呼吸道接触（inhalation）:研究生产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等研究生产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等形式存在的化学毒物和评价环境空气污染物以及形式存在的化学毒物和评价环境空气污染物以及吸入给药途径的药物。吸入给药途径的药物。n静式吸入静式吸入n动式吸入动式吸入 n气管注入法气管注入法染毒途径的选择染毒途径的选择:经呼吸道接触（inhalation）:染毒途径的选择:30n静静式式吸吸入入：将将一一定定量量的的易易挥挥发发的的静静态态化化学学毒毒物物或或一一定定体体积积的的气气态态化化学学毒毒物物加加入入到到具具有有一一定定体体积积的密闭容器内，使实验动物吸入染毒。的密闭容器内，使实验动物吸入染毒。优优点点：设设备备简简单单、操操作作方方便便、受受试试物物消消耗耗量量少少，尤尤其其适适合合于于小小鼠鼠接接触触易易挥挥发发的的液液态态或或气气态态化化学物的急性毒性试验。学物的急性毒性试验。缺缺点点：随随时时间间延延长长氧氧含含量量下下降降、COCO2 2增增加加；毒毒物物浓浓度度不不易易长长期期保保持持稳稳定定，实实验验动动物物有有经经皮皮吸吸收收的可能。故一般仅用于急性实验。的可能。故一般仅用于急性实验。经呼吸道接触经呼吸道接触 静式吸入：将一定量的易挥发的静态化学毒物或一定体积的气态化学31n动式吸入：动式吸入：染染毒毒柜柜装装备备有有补补充充新新鲜鲜空空气气和和排排出出含含化化学学毒毒物物之之空空气气的的动动力力系系统统以以及及随随时时补补充充化化学学毒毒物物的配气系统。的配气系统。优优点点：染染毒毒过过程程中中受受试试物物浓浓度度和和氧氧分分压压较较稳定。稳定。缺缺点点：设设备备昂昂贵贵，操操作作复复杂杂，耗耗费费毒毒物物量量较多。较多。经呼吸道接触经呼吸道接触 动式吸入：经呼吸道接触 32经呼吸道接触经呼吸道接触 n气管注入法：气管注入法：经喉插入法、气管穿刺法。经喉插入法、气管穿刺法。优点：优点：1 1、染毒剂量较准确，用毒物量少；染毒剂量较准确，用毒物量少；2 2、形成中毒模型速度快。形成中毒模型速度快。缺点：缺点：1 1、操作易造成损伤，引起动物死亡；操作易造成损伤，引起动物死亡；2 2、不不能能发发挥挥上上呼呼吸吸道道的的防防卫卫作作用用，与与自自然然吸入有差异。吸入有差异。经呼吸道接触 气管注入法：33染毒途径的选择染毒途径的选择:经皮肤染毒经皮肤染毒（dermal exposuredermal exposure）：）：液态、固态的化学毒物液态、固态的化学毒物。首选大鼠，也可选用家兔和豚鼠。首选大鼠，也可选用家兔和豚鼠。试试验验开开始始前前24h24h，采采用用动动物物脊脊柱柱两两侧侧皮皮肤肤脱脱毛毛（剪毛法、剃毛法、化学脱毛法）。（剪毛法、剃毛法、化学脱毛法）。局局部部涂涂敷敷受受试试化化学学毒毒物物并并以以塑塑料料薄薄膜膜或或玻玻璃璃纸纸和和两两层层纱纱布布覆覆盖盖，再再用用无无刺刺激激性性胶胶布布或或绷绷带带加加以以固固定定。24h24h后后取取下下固固定定物物和和覆覆盖盖物物，用用温温水水或或适适当的溶剂洗去皮肤上残留的受试样品。当的溶剂洗去皮肤上残留的受试样品。经注射途径染毒经注射途径染毒（ingestioningestion）：）：腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。染毒途径的选择:经皮肤染毒（dermal exposure）345.染毒剂量与分组染毒剂量与分组:了解化学毒物的理化特性，纯度，杂质成分与含量等。了解化学毒物的理化特性，纯度，杂质成分与含量等。有相关毒性资料可供参考者有相关毒性资料可供参考者 没有毒性资料可供查阅者没有毒性资料可供查阅者 限量试验限量试验 预试验预试验 找出大致致死范围找出大致致死范围 (即死亡率从即死亡率从0-10%0-10%至至90-100%)90-100%)设计正式试验的剂量和分组设计正式试验的剂量和分组 近近似化学物的似化学物的LD50值作预期毒性值作预期毒性的中的中间剂量，上下各设间剂量，上下各设计计1-21-2个剂量组进行个剂量组进行预实验预实验LD10、LD90LD0、LD1005.染毒剂量与分组:了解化学毒物的理化特性，纯度，杂质成分与35 1查阅文献查阅文献了了解解化化学学毒毒物物的的结结构构式式、分分子子量量、常常温温常常压压下下的的状状态态、熔熔点点、沸沸点点、密密度度、闪闪点点、挥挥发发度度、蒸蒸气气压压、水水溶溶性性和和脂脂溶溶性性等等理理化化特特性性，生生产产批批号及纯度，杂质成分与含量等。号及纯度，杂质成分与含量等。确确定定使使用用哪哪一一种种计计算算方方法法求求LD50，然然后后再再设设计计剂剂量量分分组组。LD50的的计计算算方方法法常常用用寇寇氏氏法法、概概率单位法、霍率单位法、霍恩恩法等。法等。找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物物种系种系和相同和相同接触途径接触途径所测得的所测得的LD50(LC50)值值作为受试化学物的作为受试化学物的预期毒性中值预期毒性中值。6/16/202436急急 性性 毒毒 性性 作作 用用染毒剂量与分组染毒剂量与分组:1查阅文献8/9/202336急性毒性作用染毒剂量362 2预试验预试验 设设定定以以此此预预期期值值作作为为待待测测化化学学物物的的中中间间剂剂量量组组，并并在在该剂量的上下各设计该剂量的上下各设计l l一一2 2个剂量组作为预试验剂量。个剂量组作为预试验剂量。根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。如采用如采用1010，100100，10001000mg/kgmg/kg的剂量的剂量 LDLD5050可能在可能在100-1000mg/kg 100-1000mg/kg 不见死亡不见死亡 全部死亡全部死亡 根据预试验的死亡资料确定组距。根据预试验的死亡资料确定组距。可根据以下公式可根据以下公式计算计算出出剂量分组：剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)i i为组距为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。6/16/202437急急 性性 毒毒 性性 作作 用用2预试验 8/9/202337急性毒性作用373 3正式试验正式试验 一般根据试验设计所选用的一般根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来确定计算方法来确定组数组数。例如。例如几率单位法几率单位法、寇氏法寇氏法一般设一般设6 61010个个剂量组；剂量组；霍恩法霍恩法固定设固定设4 4个个剂量组。求得剂量组。求得i i值后值后以最低剂量组以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010)的对数剂量加上一个的对数剂量加上一个i i值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。的真实值。1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 LgLD0 i+LgLD0 2i+LgLD0 3i+LgLD0 4i+LgLD0 6/16/202438急急 性性 毒毒 性性 作作 用用在实际工作中，除有特殊规定外，均不设立对照组。在实际工作中，除有特殊规定外，均不设立对照组。8/9/202338急性毒性作用在实际工作中，除有特殊规定外386.试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察毒效应（毒作用）观察：毒效应（毒作用）观察：1）.中毒症状中毒症状和发生过程和发生过程 观察动物出现的中毒症状、发生的时间、症状发观察动物出现的中毒症状、发生的时间、症状发展的经过、死亡前的特征以及死亡时间等。展的经过、死亡前的特征以及死亡时间等。2）.体重体重3 3）.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:4）.死亡死亡情况情况和时间和时间分布分布毒作用观察时间和周期：毒作用观察时间和周期：通常通常14天天在实际工作中，对速杀型化学毒物可以仅计算在实际工作中，对速杀型化学毒物可以仅计算24h内的死亡率，求其内的死亡率，求其LD506/16/202439急急 性性 毒毒 性性 作作 用用6.试验周期与毒效应观察8/9/202339急性毒性作用39啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目1）.中毒症状中毒症状啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目1）.中毒症状40 2）体重）体重体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重改变的原因体重改变的原因很多，很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。体重也会减轻。化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于所以，对存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活剂量组的存活动物动物应在观察期应在观察期1414天内称量其体重的变化以便天内称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。了解受试物引起毒效应的持续时间。6/16/202441急急 性性 毒毒 性性 作作 用用试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:2）体重8/9/202341急性毒性作用试验周期与毒效应观413 3）.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:对死亡的动物对死亡的动物，均应及时进行大体解剖和病理组织均应及时进行大体解剖和病理组织学检查学检查。肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病理学检查理学检查对存活动物对存活动物，在观察期结束时进行大体病理检查在观察期结束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。些生化指标测定等。6/16/202442急急 性性 毒毒 性性 作作 用用试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:8/9/202342急性毒性作用试验周期与毒效应观察:424）.死亡和死亡时间死亡和死亡时间重点观察和记录重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。亡数。分析中毒死亡时间的规律分析中毒死亡时间的规律也也可为深人研究化学可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。物的毒作用机制提供参考。6/16/202443急急 性性 毒毒 性性 作作 用用试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:8/9/202343急性毒性作用试验周期与毒效应观察:437.经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大消耗的动物量大2.获得的信息有限获得的信息有限3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。性信息。6/16/202444急急 性性 毒毒 性性 作作 用用重要重要7.经典急性毒性试验的局限性8/9/202344急性毒性作用44各各种种急急性性毒毒性性分分级级标标准准是是以以LDLD5050/LC/LC5050值值为为基基础础划划分分的，以往没有统一标准。的，以往没有统一标准。如如19941994年年颁颁布布实实施施的的食食品品安安全全性性毒毒理理学学评评价价程程序序和方法中提出急性毒性分级的和方法中提出急性毒性分级的六级标准六级标准(表表6-6-2 2)。20032003年年联联合合国国世世界界卫卫生生组组织织(WHO)(WHO)推推荐荐了了一一个个五五级级标准。标准。各种急性毒性分级标准是以LD50/LC50值为基础划分的，以456/16/202446急急 性性 毒毒 性性 作作 用用GB15193.3食品安全性毒理学评价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法急性毒性急性毒性评价评价8/9/202346急性毒性作用GB15193.3食品安全性466/16/202447急性毒性急性毒性评价评价8/9/202347急性毒性评价47WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度（度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒性急性毒性评价评价WHO于2003年公布全球化学品统一分类和标签制度（GH48急性毒性试验报告急性毒性试验报告受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。试验动物的种属、品系和来源。试验动物的种属、品系和来源。所用剂量和动物分组、每组所用动物性别、数量级所用剂量和动物分组、每组所用动物性别、数量级体重范围。体重范围。染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见。解剖及病理所见。计算计算LDLD50 50 值的方法及其值的方法及其LDLD5050和和95%95%可信限。可信限。结论。结论。急性毒性试验报告受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。49“3R“3R原则原则”：替代、减少、优化：替代、减少、优化 OCED OCED（经济合作和发展组织）推荐（经济合作和发展组织）推荐（20012001年）年）：固定剂量法固定剂量法急性毒性分级法急性毒性分级法上下移动法上下移动法 USEPAUSEPA（美国环境保护局）（美国环境保护局）三种三种+限量试验限量试验（并不算真正的替代法，受试物毒性很（并不算真正的替代法，受试物毒性很低时使用）低时使用）“3R原则”：替代、减少、优化501.固定剂量法固定剂量法（fixed dose procedure）：不以动不以动物死亡作为观察终点，而是利用预先选定的或固定的物死亡作为观察终点，而是利用预先选定的或固定的一系列剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对化一系列剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性进行分级。学物的毒性进行分级。剂量范围5、50、300mg/kg，最高位2000mg/kg。EEC欧共体分级标准为：高毒（LD502000mg/kg）观察终点：观察终点：明显毒性（明显毒性（clear sign onclear sign on toxicity toxicity）：）：明确的明确的毒作用表现，可作为危险度评价的充分依据，预期随毒作用表现，可作为危险度评价的充分依据，预期随着染毒剂量的增加可发展为严重的中毒症状直至死亡。着染毒剂量的增加可发展为严重的中毒症状直至死亡。固定法的实验结果与经典方法相比，一致性为80.2%，使用动物少，大鼠平均14.8只。51急性毒性替代试验急性毒性替代试验1.固定剂量法（fixed dose procedure）：51预试验：预试验：选择选择5 5、5050、300300和和2000mg/kg 42000mg/kg 4个固定剂量，特殊个固定剂量，特殊情况下可增加情况下可增加1 1个个5000mg/kg5000mg/kg剂量。剂量。采用单性别（一般为雌性）采用单性别（一般为雌性）1 1只只动物动物循序进行，根循序进行，根据受试物的有关资料，从上述剂量中选择据受试物的有关资料，从上述剂量中选择1 1个作为个作为初始剂量；如没有相关资料可参考，可用初始剂量；如没有相关资料可参考，可用300mg/kg300mg/kg作为初始剂量进行预试验。作为初始剂量进行预试验。根据预试验结果选择根据预试验结果选择一个一个能产生能产生明显毒性效应明显毒性效应但不但不引起死亡的剂量进行正式试验。引起死亡的剂量进行正式试验。预试验：52注：注：AA死亡；死亡；BB明显毒性；明显毒性；CC无毒性无毒性注：A死亡；B明显毒性；C无毒性53WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度（度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒性急性毒性评价评价WHO于2003年公布全球化学品统一分类和标签制度（GH54注：注：AA死亡；死亡；BB明显毒性；明显毒性；CC无毒性无毒性注：A死亡；B明显毒性；C无毒性55正式试验正式试验每个剂量组每个剂量组5 5只动物（包括预试验在该水平做过的只动物（包括预试验在该水平做过的动物）。一般只需一个剂量。动物）。一般只需一个剂量。如果正式试验选择的如果正式试验选择的起始剂量未见明显毒性起始剂量未见明显毒性，应接，应接着进行下一个较高剂量的染毒。如正式试验选择的着进行下一个较高剂量的染毒。如正式试验选择的起始剂量出现动物起始剂量出现动物死亡或严重毒性死亡或严重毒性反应时，应从保反应时，应从保护动物免受痛苦出发，选择下一个较低剂量进行。护动物免受痛苦出发，选择下一个较低剂量进行。出现下列情况出现下列情况结束试验结束试验：当出现：当出现明显的毒性明显的毒性反应或反应或已确认不多于一只动物死亡；最高剂量未出现毒性已确认不多于一只动物死亡；最高剂量未出现毒性反应；最低剂量动物出现死亡。反应；最低剂量动物出现死亡。应在确认前一个剂量组的动物存活后，才可进行下应在确认前一个剂量组的动物存活后，才可进行下一个剂量试验。一般两个剂量组试验之间要间隔一个剂量试验。一般两个剂量组试验之间要间隔3 34d4d。正式试验56限量试验限量试验限量试验限量试验：如果有相关的资料表明受试物如果有相关的资料表明受试物可能无毒可能无毒，可进行，可进行限量试验。限量试验。染毒剂量为染毒剂量为2000mg/kg2000mg/kg（5000mg/kg5000mg/kg），选择另外），选择另外4 4只动物进行。只动物进行。预试验和正式试验都不出现中毒体征，试验终止。预试验和正式试验都不出现中毒体征，试验终止。结果判定：结果判定：GHSGHS类别。类别。限量试验：57注：注：AA死亡数大于或等于死亡数大于或等于2 2只只（计量计量=LD=LD5050）；BB观察到明显毒观察到明显毒性性，大于或等于大于或等于1 1只，或者只，或者1 1只死亡只死亡（计量（计量LD=1只动物死亡）注：A死亡数大于或等于2只（计量=LD50）；B观58WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度（度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒性急性毒性评价评价WHO于2003年公布全球化学品统一分类和标签制度（GH592.急性毒性分级法急性毒性分级法（acute toxic class method）：是是基于生物统计法，基于生物统计法，以死亡为终点以死亡为终点的的分阶段分阶段试验试验法，每阶段法，每阶段3 3只单性别动物，根据死亡动物数，判只单性别动物，根据死亡动物数，判定大致的定大致的LDLD5050值范围值范围，平均平均2 2-4 4阶段即可判定急性阶段即可判定急性毒性。毒性。单性别单性别3 3只动物（通常为雌性，如雄性更敏感则用只动物（通常为雌性，如雄性更敏感则用雄性）。雄性）。从从5 5、5050、300300、2000mg/kg 42000mg/kg 4个固定剂量中选择个固定剂量中选择一一个个剂量开始进行试验。剂量开始进行试验。根据死亡动物数，决定下一阶段：根据死亡动物数，决定下一阶段：不需要进一步试验即可分级；不需要进一步试验即可分级；下一阶段下一阶段以相同剂量的另一种性别试验；以相同剂量的另一种性别试验；下一阶段下一阶段以较高或较低的剂量水平进行（从以较高或较低的剂量水平进行（从300mg/kg300mg/kg开始）。开始）。6/16/2024602.急性毒性分级法（acute toxic class me603.上上-下移动法下移动法（阶梯法阶梯法,up/down procedure）以以死亡为终点死亡为终点，但但也可观察不同的终点。也可观察不同的终点。推荐的剂量序列：推荐的剂量序列：1.751.75，5.55.5，17.517.5，5555，175175，550550，2000mg/kg2000mg/kg。如无毒性资料可参考，推荐从如无毒性资料可参考，推荐从175mg/kg175mg/kg开始。开始。如有资料参考，从比理论如有资料参考，从比理论LDLD5050值稍低的剂量开始。值稍低的剂量开始。一只动物一只动物序贯进行序贯进行，需单性别毒物需单性别毒物6 61010只。只。染毒后观察染毒后观察48h48h。存活：下一只动物提高一档剂量；存活：下一只动物提高一档剂量；死亡：下一只动物降低一档剂量；死亡：下一只动物降低一档剂量；每一只存活的动物都要每一只存活的动物都要观察至观察至1414天。天。后期死亡动物后期死亡动物在统计结果时也记为死亡。在统计结果时也记为死亡。上下法和经典法一致性为23/25，上下法与固定剂量法一致性为16/20,其动物数量用的较少。613.上-下移动法（阶梯法,up/down procedure61LD50意义意义LD50是统计学方法计算得值，重现性好，相对稳定是统计学方法计算得值，重现性好，相对稳定LD50反映受试动物群体中大多数动物感受的平均情反映受试动物群体中大多数动物感受的平均情况，具有代表性，从剂量况，具有代表性，从剂量-死亡曲线看，死亡曲线看，LD50处于处于曲线上升中段，是死亡率相对剂量变化最敏感的部曲线上升中段，是死亡率相对剂量变化最敏感的部位。位。LD50标准化药物毒作用强度，标准化药物毒作用强度，可比较不同可比较不同药物的毒药物的毒性大小。性大小。计算药物的治疗指数，药效剂量和毒性剂量的距离。计算药物的治疗指数，药效剂量和毒性剂量的距离。为后续重复给药毒理学实验剂量的选择提供参考为后续重复给药毒理学实验剂量的选择提供参考通过比较不同途径通过比较不同途径LD50，可获得生物利用度的信息，可获得生物利用度的信息推测人类的致死剂量推测人类的致死剂量和和中毒体征，为临床毒副反应中毒体征，为临床毒副反应提供监测参考。提供监测参考。62LD50意义6262LD50局限性局限性LD50是以死亡为观察终点，无法反映化学物的是以死亡为观察终点，无法反映化学物的作用部位和作用机制。作用部位和作用机制。评价新药或化学物时，评价新药或化学物时，LD50给予有效的信息较给予有效的信息较少，实用性有限。少，实用性有限。LD50波动性很大，影响因素很多，如波动性很大，影响因素很多，如:动物种动物种属、品系、遗传易感性、属、品系、遗传易感性、性别、性别、年龄年龄、身体状、身体状况况、染毒途径、实际环境、染毒途径、实际环境条件条件及操作者熟练程及操作者熟练程度度仅仅反映急性致死性程度，局限性较大。仅仅反映急性致死性程度，局限性较大。单次大剂量中毒试验，动物多死于中枢神经系单次大剂量中毒试验，动物多死于中枢神经系统及心血管功能障碍，不能很好地显示毒性。统及心血管功能障碍，不能很好地显示毒性。人和动物敏感性有差异。人和动物敏感性有差异。消耗的动物量大，一次试验至少需要消耗的动物量大，一次试验至少需要30-50只只动物。动物。6/16/202463LD50局限性8/9/20236363 局局部部毒毒性性是是指指化化学学毒毒物物与与机机体体直直接接接接触触部部位位处处的的损伤作用。损伤作用。用用于于评评价价机机体体接接触触化化学学毒毒物物的的局局部部（如如皮皮肤肤、眼眼睛等）所出现的损伤作用。睛等）所出现的损伤作用。局局部部毒毒性性反反应应往往往往发发生生在在全全身身毒毒性性作作用用之之前前，因因此此研研究究局局部部毒毒性性作作用用有有助助于于早早期期脱脱离离接接触触，避避免免全全身身毒性作用。毒性作用。通通常常包包括括：皮皮肤肤刺刺激激试试验验、皮皮肤肤致致敏敏试试验验（皮皮肤肤变态反应）变态反应）和眼刺激试验等。和眼刺激试验等。目的：目的：眼刺激、皮肤刺激试验眼刺激、皮肤刺激试验：了解化学物对皮肤和眼睛的了解化学物对皮肤和眼睛的局部刺激性和腐蚀性。局部刺激性和腐蚀性。皮肤致敏试验皮肤致敏试验：了解化学物对哺乳动物是否可以引起了解化学物对哺乳动物是否可以引起皮肤变态反应极其程度。皮肤变态反应极其程度。第三节第三节 局部毒性作用局部毒性作用 局部毒性是指化学毒物与机体直接接触部位处的损伤作用。64一、急性眼刺激试验 (acute eye irritation test)目目的的：确确定定和和评评价价化化学学毒毒物物对对眼眼睛睛是是否否有有刺刺激作用或腐蚀作用及其程度。激作用或腐蚀作用及其程度。n观察终点观察终点为为眼刺激眼刺激和和眼腐蚀眼腐蚀 眼眼刺刺激激性性：指指眼眼睛睛表表面面接接触触受受试试物物后后眼眼睛睛产产生生的可逆性炎症变化。的可逆性炎症变化。眼眼腐腐蚀蚀性性：指指眼眼睛睛表表明明接接触触受受试试物物后后眼眼睛睛产产生生的不可逆性组织损伤。的不可逆性组织损伤。一、急性眼刺激试验 (acute eye ir65n强酸或强碱强酸或强碱性物质免做眼刺激试验。性物质免做眼刺激试验。n目目前前常常用用的的方方法法为为Draize法法，根根据据家家兔兔眼眼结结膜膜、角膜和虹膜反应进行评分。角膜和虹膜反应进行评分。4只只家家兔兔，眼眼睑睑内内滴滴入入受受试试物物，闭闭合合眼眼睑睑约约1min，观察，评价分级。，观察，评价分级。n观察内容：观察内容：结膜结膜（发红、球结膜水肿、分泌物）（发红、球结膜水肿、分泌物）角膜角膜（浑浊程度和范围）（浑浊程度和范围）虹膜虹膜（充血、肿胀、角膜周围充血）（充血、肿胀、角膜周围充血）n观察周期：一般观察周期：一般7天，必要可延长到天，必要可延长到21天。天。急性眼刺激试验急性眼刺激试验强酸或强碱性物质免做眼刺激试验。急性眼刺激试验66二、皮肤刺激试验二、皮肤刺激试验皮肤刺激：局部可逆性的炎性变化。皮肤刺激：局部可逆性的炎性变化。皮肤腐蚀：不可逆性组织损伤。皮肤腐蚀：不可逆性组织损伤。有有3种情况不做皮肤刺激试验：种情况不做皮肤刺激试验：（1）腐蚀性物质，）腐蚀性物质，（2）急性经皮毒性试验显示有很）急性经皮毒性试验显示有很强系统毒性强系统毒性的物质；的物质；（3）急性经皮毒性试验染毒剂量达）急性经皮毒性试验染毒剂量达2000mg/kg仍未产仍未产生皮肤刺激体征物质。生皮肤刺激体征物质。皮肤刺激评价方法采用皮肤刺激评价方法采用Draize试验试验。家兔或豚鼠家兔或豚鼠4只，剪去背毛，涂受试物，盖防护装置，只，剪去背毛，涂受试物，盖防护装置，4h后洗去观察。后洗去观察。观察内容：皮肤反应（红斑、水肿、紫色红斑、结痂）观察内容：皮肤反应（红斑、水肿、紫色红斑、结痂）观察周期：一般不超过观察周期：一般不超过14天。天。皮肤刺激分级：无刺激性、轻刺激性、中等刺激性、强皮肤刺激分级：无刺激性、轻刺激性、中等刺激性、强刺激性刺激性6/16/202467二、皮肤刺激试验8/9/20236767三、皮肤致敏试验三、皮肤致敏试验是一种对化学物质免疫介导的皮肤反应，特点为瘙是一种对化学物质免疫介导的皮肤反应，特点为瘙痒、红斑、水肿、丘疹、小水泡、大疱或兼而有之。痒、红斑、水肿、丘疹、小水泡、大疱或兼而有之。目的：目的：通过动物实验预测化学品经皮肤接触对人类通过动物实验预测化学品经皮肤接触对人类引起皮肤致敏反应的危害。引起皮肤致敏反应的危害。皮肤致敏试验：皮肤致敏试验：一是福氏完全佐剂的方法，二是不一是福氏完全佐剂的方法，二是不加佐剂的方法。通常选择加佐剂的方法。通常选择豚鼠豚鼠作为实验对象，先诱作为实验对象，先诱导接触，再激发接触。导接触，再激发接触。观察内容：红斑、水肿、结痂观察内容：红斑、水肿、结痂观察期限：激发后观察观察期限：激发后观察24h，48h，72h，直至，直至12天。天。0天28天14天40天7天诱导诱导诱导激发观察结束三、皮肤致敏试验0天28天14天40天7天诱导诱导诱导激发观68蓄积毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验6/16/202469第第四四节节 短期、亚慢性、慢性毒性作用短期、亚慢性、慢性毒性作用蓄积毒性试验8/9/202369第四节 短期、亚慢性、慢性毒69一、一、基本概念基本概念二二、蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 6/16/202470蓄蓄 积积 作作 用用 及及 其其 评评 价价一、基本概念8/9/202370蓄积作用及其评价70 蓄积作用蓄积作用(accumulation)：指外源化学物连指外源化学物连续地、反复地进入机体，而且吸收速度续地、反复地进入机体，而且吸收速度（或总量或总量）超过代谢转化排出的速度超过代谢转化排出的速度（或总量或总量）时，化学物时，化学物质就有可能在体内逐渐增加并质就有可能在体内逐渐增加并贮留，称为化学物贮留，称为化学物质的蓄积作用。质的蓄积作用。蓄积作用是发生蓄积作用是发生慢性毒作用的前提。慢性毒作用的前提。储存库储存库 depot：化学毒物容积蓄积的组织或器官。化学毒物容积蓄积的组织或器官。机机体体常常见见的的储储存存库库：血血浆浆蛋蛋白白、脂脂肪肪组组织织、肝肝脏脏、肾脏、骨骼等。肾脏、骨骼等。6/16/