凝集反应实验课件

凝集反应抗原抗体反应的类型 1沉淀反应沉淀反应 2凝凝集反应集反应 3补补体参与的反体参与的反应应 4.中和反中和反应应 5.免疫免疫标记标记抗原抗体反应的类型 1沉淀反应凝集反凝集反应是指是指颗粒性抗原颗粒性抗原(红细胞、细菌等红细胞、细菌等)或可或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后与相应抗体（或抗原）成致敏颗粒后与相应抗体（或抗原）发生特异性结合，在适当电解质存在发生特异性结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。下，形成肉眼可见的凝集现象。在免疫学技术中，凝集反应可分为直接凝集反应直接凝集反应和间接凝集反应间接凝集反应两大类。凝集反应是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可溶性抗原（或抗 凝集反应的类型凝集反应的类型一、直接凝集反应一、直接凝集反应(direct agglutination)是指细菌、螺旋体和红细胞等是指细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现肉眼可见的直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集。反应中的抗原称为凝集原，参凝集。反应中的抗原称为凝集原，参与反应的抗体称为凝集素。与反应的抗体称为凝集素。凝集反应的类型 是指细菌、螺旋体和红 将已知的可溶性抗原（或抗体）吸附或将已知的可溶性抗原（或抗体）吸附或耦联到与免疫无关的载体颗粒表面耦联到与免疫无关的载体颗粒表面,形成致敏形成致敏颗粒颗粒,再与相应抗体（或抗原）作用再与相应抗体（或抗原）作用,在适宜在适宜的电解质存在的条件下，出现肉眼所见的凝的电解质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象，称之。集现象，称之。载体不同可分：载体不同可分：红细胞间接血凝试验间接血凝试验 聚苯乙烯乳胶间接乳胶凝集试验间接乳胶凝集试验 活性炭间接炭凝集试验间接炭凝集试验。二、间接凝集反应 将已知的可溶性抗原（或抗体）吸附或耦联到与免1、正向间接凝集反应 用于检测标本中的抗体用于检测标本中的抗体本试验简便、快速、敏感性和特异性高、本试验简便、快速、敏感性和特异性高、成本低。成本低。1、正向间接凝集反应抗体载体微球可溶性抗原免疫微球免疫微球凝2、反向间接凝集反应、反向间接凝集反应 用于检测标本中的抗原用于检测标本中的抗原本法快速、敏感性和特异性高本法快速、敏感性和特异性高+凝集凝集抗抗原原载体颗粒载体颗粒抗抗体体抗体致敏颗粒2、反向间接凝集反应+凝集抗原载体颗粒抗体抗体致敏颗粒A、正向正向：诊断试剂为已知抗：诊断试剂为已知抗原致敏的载体颗粒及相应抗体，原致敏的载体颗粒及相应抗体，用于检测标本中是否存在与致用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的敏抗原相同的抗原抗原。3、间接凝集抑制反应、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验又称为胶乳凝集抑制试验A、正向：诊断试剂为已知抗原致敏的载体颗粒及相应抗体，用于检结果：免疫微球不凝集为结果：免疫微球不凝集为阳性阳性(标本标本)第一种情况：第一种情况：抗体待测抗原免疫微球免疫微球不凝集+（结果：免疫微球不凝集标本标本中无中无抗原抗原结果：免疫微球凝集为结果：免疫微球凝集为阴性阴性第二种情况：第二种情况：抗体免疫微球免疫微球凝集+标本中无抗原结果：免疫微球凝集为阴3间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应B、反向反向：诊断试剂为已知抗体致诊断试剂为已知抗体致敏的载体颗粒及相应抗原，用敏的载体颗粒及相应抗原，用于检测标本中是否存在与致敏于检测标本中是否存在与致敏抗体相同的抗体。抗体相同的抗体。3间接凝集抑制反应间接凝集反应的应用间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。间接凝集反应的应用（一）抗原的检测人绒毛膜促性腺激素检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验。（一）抗原的检测人绒毛膜促性腺激素（一）抗体的检测梅毒抗体类风湿因子RF（一）抗体的检测梅毒抗体一、正向正向间接凝集接凝集试验梅毒快速血浆反应素试验梅毒快速血浆反应素试验Rapid Plasma Reagin （RPR）RPR试验试验一、正向间接凝集试验梅毒快速血浆反应素试验 感染梅毒后，首先产生感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，型抗梅毒螺旋体抗体，感染梅毒感染梅毒4周左右产生周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出梅毒的免疫性（一）梅毒的免疫性（一）感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，梅梅毒的免疫性（二）梅毒的免疫性（二）另另一一种种具具有有抗抗体体性性质质的的物物质质叫叫反反应应素素（reagin），是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出的的一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生的的抗抗体体。反反应应素素一一般般在在感感染染后后57周周产产生生。经正规治疗后可逐渐消失。经正规治疗后可逐渐消失。梅毒的免疫性（二）另一种具有抗体性质的物质叫反应素（r梅毒感染的实验室诊断梅毒感染的实验室诊断（一）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（一）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（二）梅毒螺旋体抗原血清试验（二）梅毒螺旋体抗原血清试验（三）三）梅毒梅毒确认试验确认试验梅毒感染的实验室诊断（一）非梅毒螺旋体抗原血清学试验非特异性非特异性类脂抗体脂抗体测定定 1、性病研究实验室试验（、性病研究实验室试验（VDRL）2、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USR）3、快速血浆反应素试验、快速血浆反应素试验 （RPR）4、甲苯胺红试验（、甲苯胺红试验（TRUST）非特异性类脂抗体测定 1、性病研究实验室试验（VDRL）梅毒螺旋体抗原血清试验：梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体原检测血清中的抗螺旋体IgM和和/或或IgG抗体，其抗体，其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察的指标。验，但不能用作疗效观察的指标。1 1、梅毒螺旋体血球凝集试验（、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）2 2、梅毒螺旋体明胶凝集试验（、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)TPPA)3 3、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）特异性梅毒血清学试验特异性梅毒血清学试验梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺梅毒确梅毒确认试验（三）（三）1、荧荧光梅毒螺旋体抗体吸收光梅毒螺旋体抗体吸收试验试验 （FTA-ABSFTA-ABS）2、梅毒螺旋体蛋白印迹、梅毒螺旋体蛋白印迹试验试验 （western blot test）梅毒确认试验（三）1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验一、梅毒快速血梅毒快速血浆反反应素素试验（RPR）实验实验原理原理梅毒患者血清中存在着能与梅毒患者血清中存在着能与VDRL(类类脂脂质质)抗原抗原发发生凝集反生凝集反应应的反的反应应素，本素，本试剂试剂利用利用这这一原理，将一原理，将VDRL抗原吸附于活性抗原吸附于活性炭炭颗颗粒表面，当待粒表面，当待测测血清中存在反血清中存在反应应素素时时，即与其，即与其发发生凝集反生凝集反应应，出，出现现肉眼可肉眼可见见的黑色凝的黑色凝块块。一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）实验原理一、梅毒快速血梅毒快速血浆反反应素素试验（RPR）用途用途本方法能快速本方法能快速简单简单地地测测定梅毒病人血清定梅毒病人血清中的反中的反应应素，可用于梅毒素，可用于梅毒诊诊断和断和监测监测梅梅毒病人毒病人疗疗效。效。一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）用途试剂与器材与器材RPR试剂梅毒阳性对照梅毒阴性对照纸片专用滴管，针头，橡皮头试剂与器材RPR试剂操作方法操作方法1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。2.另吸取30微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中。3.用专用针头，滴管吸取RPR试剂，分别垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋转仪水平转动卡8分钟，100转/分钟然后3分钟内在光线充足处判断结果。操作方法1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加结果判断果判断1.阴性反应（）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。2.弱阳性反应（+）：可见较小的黑色凝集物。3.阳性反应（+）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。结果判断1.阴性反应（）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。实验讨论1.实验条件：在23c29c度的环境下进行。2.RPR试剂在使用前应充分摇匀。3.血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。4.定性实验呈弱阳性或阳性者必须做定量实验才能了解患者血清中的抗体滴度，具体方法如下：将待检血清用生理盐水作倍比稀释（原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32）然后对每个稀释按定性实验方法再进行测定并判断结果。实验讨论1.实验条件：在23c29c度的环境下进行。实验讨论5.本实验只为过筛试验，实验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体实验加以确诊。实验讨论5.本实验只为过筛试验，实验呈弱阳性或阳性反应者，需二、间接凝集抑制反接凝集抑制反应又称又称为胶乳凝集抑制胶乳凝集抑制试验妊娠试验妊娠试验HCG测测定定二、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验妊娠试验HCHCG：人绒毛膜促性腺激素，胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大 HCG是一种不随胎盘重量增加而分泌增长的胎盘激素 HCG：人绒毛膜促性腺激素，胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖HCG的结构结构中包括与两个非共价键结合的亚基。亚基与LH，FSH，及TSH的亚基相似，能与这些激素产生交叉免疫反应而亚基与这些激素有较大的差异，不存在于其他激素中，决定了生物活性和免疫活性的高特异性。临床上采用高效的抗HCG亚基现试剂盒为HCG-试剂HCG的结构 HCG检测方法1，ELISA：酶联免疫吸附试验2，单克隆抗体胶体金试验3，化学发光免疫法4，放射免疫技术5，胶乳凝集抑制实验6，血凝抑制试验：载体不同，吸附于RBC上HCG检测方法 1，ELISA：酶联免疫吸附试验胶乳凝集抑制胶乳凝集抑制试验实验原理实验原理将含有可溶性抗原的待测标本先与已知抗体混合，充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒，因抗体已与标本中的可溶性抗原结合，胶乳颗粒不再出现可见的凝集现象。胶乳凝集抑制试验实验原理结果判断果判断若试验出现明显的凝集为阴性反应，即HCG阴性；而不出现凝集者，即为阳性反应，即HCG阳性。结果判断临床意义：1，诊断妊娠及宫外孕2，滋养层细胞肿瘤的诊断与病情观察3，先兆流产和不完全流产的诊断和监测4，诊断异位HCG肿瘤如畸胎瘤，子宫颈癌，HCG可明显增高临床意义：1，诊断妊娠及宫外孕思考思考题试述直接凝集试验与间接凝集试验的区别？思考题