体外培育牛黄技术幻灯课件

中药一类新药中药一类新药体外培育牛黄体外培育牛黄技术研究报告技术研究报告武汉大鹏药业有限公司中药一类新药体外培育牛黄技术研究报告武汉大鹏药业有限1牛黄牛黄乃百草之精华，乃百草之精华，为世之神物，为世之神物，诸药莫及。诸药莫及。神农本草经神农本草经 牛黄2体外培育牛黄概述体外培育牛黄概述体外培育牛黄概述体外培育牛黄概述 具具有有自自主主知知识识产产权权的的国国家家中中药药I I类类新新药药体体外外培培育育牛牛黄黄是是我我国国科科学家运用现代生物及仿生技术首创的医药原料药生产技术。学家运用现代生物及仿生技术首创的医药原料药生产技术。体体外外培培育育牛牛黄黄经经过过处处方方、工工艺艺、成成份份、结结构构、超超微微结结构构、质质量量标标准准、稳稳定定性性等等一一系系列列药药学学研研究究和和药药效效学学、毒毒理理学学、特特殊殊毒毒理理等等临临床床前前十十八八个个项项目目的的一一百百多多个个指指标标的的研研究究，并并进进行行多多中中心心临临床床试试验验研研究究，表表明明体体外外培培育育牛牛黄黄在在技技术术质质量量标标准准上上，完完全全符符合合中中华华人人民民共共和和国国药药典典（20002000版版）牛牛黄黄项项下下的的要要求求，其其疗疗效效和和性性能能非非常常接接近近甚甚至至超超过过优优质质天然牛黄，且有效成份可控，比天然牛黄稳定，可工业化大规模生产天然牛黄，且有效成份可控，比天然牛黄稳定，可工业化大规模生产.体体外外培培育育牛牛黄黄已已正正式式载载入入20052005版版中中华华人人民民共共和和国国药药典典与与天天然然牛黄的标准完全一致。牛黄的标准完全一致。国家食品药品监督管理局文件，国食药监注国家食品药品监督管理局文件，国食药监注200421200421号规定，体号规定，体外培育牛黄替代天然牛黄等量投料使用。外培育牛黄替代天然牛黄等量投料使用。体外培育牛黄概述具有自主知识产权的国家中药I类新药3体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理结石机理结石机理 牛黄(胆红素钙结石)形成原因：多种原因造成细菌性葡萄糖醛酸甙酶和可大量水解结合型胆红素为游离胆红素与葡萄糖醛酸。游离胆红素与钙等金属离子结合，形成胆红素钙盐颗粒和胆红素高聚物颗粒，因此胆汁理化性改变了，称为成石胆汁。这是成石的物质基础。成石胆汁在一定条件下，产生静电效应，高分子有机物质架桥作用，形成胆结石。体外培育牛黄机理结石机理4体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理体外培育牛黄机理工艺路线工艺路线 (配方配方)新新鲜牛胆汁牛胆汁-生物牛胆汁生物牛胆汁-成石牛胆汁成石牛胆汁-胆汁核心胆汁核心-成品成品 生物反应生物反应 生化过程生化过程 牛黄机牛黄机(摇转摇转)分层培育分层培育干燥干燥 调节调节pHpH体外培育牛黄技术应用胆红素钙结石形成的静电效应原理,将新鲜牛胆汁通过生物技术制成成石胆汁，在一定必备的条件下，加入生物成核触发物，发生生物、生化反应，使成石胆汁内蛋白氢键形成，部分蛋白凝固变性，形成核心，其活动中心吸引母液中胆红素钙盐颗粒等物质，向中心沉淀。以高分子有机物质对沉淀颗粒的架桥作用，即线型聚合物的功能对颗粒的吸附作用，层层沉附，逐渐增大，脱水，干燥。形成牛胆结石，即牛黄成品体外培育牛黄机理5天然牛黄分析研究天然牛黄分析研究天然牛黄分析研究天然牛黄分析研究不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究参照国内外有关学者对天然牛黄成分含量的分析方法和结果，对国内外五个不同产地的优质牛黄进行了分析研究，其结果如下:(成分含量（%）)产产地地澳大利亚牛黄澳大利亚牛黄1西藏牛黄西藏牛黄2京牛黄京牛黄3进口牛黄进口牛黄1进口牛黄进口牛黄2水水分分6.96.87.07.06.7灰灰分分6.86.76.97.16.8胆胆红红素素36.700.67*39.621.39*35.800.55*29.290.72*40.900.67*胆胆酸酸20.101.48*15.001.13*14.900.88*15.301.03*17.040.92*去氧胆酸去氧胆酸6.480.77*4.900.76*4.860.7510.630.86*7.150.63*牛牛磺磺酸酸6.420.49*5.920.73*6.250.78*4.660.74*6.460.55*胆胆固固醇醇4.801.09*5.451.08*5.790.72*10.550.41*4.400.66*磷磷脂脂1.750.38*1.700.39*1.900.38*1.300.41*2.960.37*无无机机盐盐3.363.583.453.732.96氨氨基基酸酸0.6550.6330.7480.5650.688糖糖蛋蛋白白1.742.052.591.992.06合合计计95.7092.3590.1992.6297.37天然牛黄分析研究不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究6体外培育牛黄成分分析研究体外培育牛黄成分分析研究体外培育牛黄成分分析研究体外培育牛黄成分分析研究体外培育牛黄成分含量的分析研究体外培育牛黄成分含量的分析研究通过对体外培育牛黄处方、制备工艺及其原理的研究，对所生产出的产品成分含量的研究分析如下:(成分含量（%）)批批号号901102901128901220910220920418水水分分7.16.97.06.97.0灰灰分分7.37.27.27.07.1胆胆红红素素35.580.62*336.610.66*37.370.9036.870.67*37.960.82胆胆酸酸14.450.50*16.900.59*16.900.59*16.850.60*16.360.99*去氧胆酸去氧胆酸6.800.48*6.790.40*6.610.55*6.600.40*6.800.68*牛牛磺磺酸酸6.480.66*6.700.44*6.720.46*6.830.48*6.700.44*胆胆固固醇醇5.950.29*5.201.16*5.000.40*5.100.71*5.300.41*磷磷脂脂1.770.30*1.800.62*1.880.25*1.880.36*1.750.15*无无机机盐盐3.683.403.353.433.28氨氨基基酸酸0.7880.6950.6980.6700.762糖糖蛋蛋白白2.572.262.432.491.98合合计计92.4794.4695.1694.6295.26*n=12*n=6体外培育牛黄成分分析研究体外培育牛黄成分含量的分析研究7相关仪器检测对比性研究相关仪器检测对比性研究相关仪器检测对比性研究相关仪器检测对比性研究体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比性研究体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比性研究红外光谱分析结果：天然牛黄与体外培育牛黄在1730-1350cm-1区间，均有胆红素盐及胆红素高聚物质的特征峰。傅立叶变换红外分光光谱仪分析结果：体外培育牛黄与天然牛黄均见1690cm-1为羧酸类；1629-1565cm-1为酰胺类；1404cm-1为羟基类。高效液相色谱分析结果：胆酸、去氧胆酸对照品的图谱与体外培育牛黄、天然牛黄中的胆酸、去氧胆酸一致。薄层色谱分析结果：体外培育牛黄、天然牛黄色谱中，在与胆酸、去氧胆酸对照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。微量元素含量测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄的微量元素及其含量均一致。氨基酸含量测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄含有相同的17种氨基酸。相关仪器检测对比性研究体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比8项项目目品品名名体外培育牛黄体外培育牛黄天天然然牛牛黄黄人工牛黄粉人工牛黄粉性性状状外外观观棕棕黄黄色色球球、类类球球形形、质质轻轻、松、脆松、脆直径直径0.5-3cm棕棕黄黄色色球球、类类球球形形、质质轻轻、松、脆松、脆直径直径0.5-3cm无无形形状状、粉粉末、浅黄色末、浅黄色断断面面断断层层金金黄黄色色，有有同同心心层层纹结构纹结构断断层层金金黄黄色色，有有同同心心层层纹结构纹结构无结构无结构气气味味气香、味苦而后甜气香、味苦而后甜气香、味苦而后甜气香、味苦而后甜微腥，微苦微腥，微苦显显微微观观察察光光镜镜10倍倍取取少少许许粉粉末末加加50%甘甘油油乙乙醇醇液液装装片片，镜镜下下见见絮絮状状、团絮状棕色胆红素钙颗粒团絮状棕色胆红素钙颗粒取取少少许许粉粉末末加加50%甘甘油油乙乙醇醇液液装装片片，镜镜下下见见絮絮状状、团絮状棕色胆红素钙颗团絮状棕色胆红素钙颗大大量量淀淀粉粉颗颗粒粒，呈呈圆圆形形、多多面面形形扫扫描描电电镜镜呈呈网网状状结结构构，网网孔孔7-350u呈呈网网状状结结构构，网网孔孔7-350u含含量量胆胆红素红素35%以上以上35%以上以上0.7%胆胆酸酸12%以上以上7%以上以上12.5%去氧去氧胆酸胆酸5%以上以上4%以上以上猪猪 去去 氧氧 胆胆 酸酸15%体外培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表体外培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表三种牛黄比较表三种牛黄比较表项目品名体外培育牛黄9游离胆红素含量对比性研究游离胆红素含量对比性研究游离胆红素含量对比性研究游离胆红素含量对比性研究 体外培育牛黄、天然牛黄游离胆红素含量对比性研究体外培育牛黄、天然牛黄游离胆红素含量对比性研究游离胆红素含量对比表游离胆红素含量对比表游离胆红素含量对比表游离胆红素含量对比表批批 号号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 平均值平均值天然牛黄天然牛黄 4.420 3.238 2.026 3.703 4.300 4.50 3.36 2.756 1.294 1.27 3.82 3.1533.153体外培育牛黄体外培育牛黄 0.500 0.500 0.490 0.630 0.670 0.622 0.550 0.526 0.480 0.460 0.532 0.5440.544游离胆红素含量对比性研究体外培育牛黄、天然牛黄游离胆10HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究体外培育牛黄与天然牛黄体外培育牛黄与天然牛黄HPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究研究内容：研究内容：根据牛黄所含化学成分，我们分别对以下主要成分进行研究：氨基酸、肽类(蛋白质)胆汁酸类 胆红素类。微量元素 拟定以下样品前处理方法：酸水用于检测氨基酸、肽类成分；酸水/醇用于检测胆汁酸类成分；二甲亚砜用于检测胆红素类成分HPLC指纹图谱的比较研究体外培育牛黄与天然牛黄HPLC指纹111）、10批体外培育牛黄酸水提取液批体外培育牛黄酸水提取液HPLC-MSTIC叠加图谱叠加图谱 10批体外培育牛黄酸水提取液批体外培育牛黄酸水提取液HPLC-MSTIC图谱有很好的一致性图谱有很好的一致性图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究1）、10批体外培育牛黄酸水提取液HPLC-M122、4批天然牛黄与批天然牛黄与1批体外培育牛黄酸水提取液批体外培育牛黄酸水提取液HPLC-MSTIC叠加图谱叠加图谱l显然，不同产地的天然牛黄酸水提取液显然，不同产地的天然牛黄酸水提取液HPLC-MSTIC图谱各主要胆汁酸的比例有一定差异图谱各主要胆汁酸的比例有一定差异图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究2、4批天然牛黄与1批体外培育牛黄酸水提取液HPLC-MS133）、10批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC叠加图谱叠加图谱 显然，显然，10批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC图谱有很好的一致性图谱有很好的一致性图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究3）、10批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC144）、4批天然牛黄与批天然牛黄与1批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC叠加图谱叠加图谱（2天然牛黄，天然牛黄，13西牛黄，西牛黄，14巴西牛黄，巴西牛黄，15印度牛黄）印度牛黄）天然牛黄与体外培育牛黄比较，有紫外吸收成分的种类基本一致，但相对含量有差异天然牛黄与体外培育牛黄比较，有紫外吸收成分的种类基本一致，但相对含量有差异图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究4）、4批天然牛黄与1批体外培育牛黄酸醇提取液中有紫外吸收155）、10批体外培育牛黄二甲亚砜提取液批体外培育牛黄二甲亚砜提取液HPLC叠加图谱叠加图谱 显然，显然，10批体外培育牛黄二甲亚砜提取液的批体外培育牛黄二甲亚砜提取液的HPLC图谱有较好的一致性图谱有较好的一致性图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究5）、10批体外培育牛黄二甲亚砜提取液HPLC叠加图谱显然166）、4批天然牛黄与批天然牛黄与1批体外培育牛黄二甲亚砜提取液批体外培育牛黄二甲亚砜提取液HPLC叠加图谱叠加图谱（6天然牛黄，天然牛黄，16巴西牛黄，巴西牛黄，17西牛黄，西牛黄，18印度牛黄）印度牛黄）。天然牛黄与体外培育牛黄比较，二甲亚砜提取液中成分种类基本一致，但相对含量稍有差异天然牛黄与体外培育牛黄比较，二甲亚砜提取液中成分种类基本一致，但相对含量稍有差异图图谱谱HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究6）、4批天然牛黄与1批体外培育牛黄二甲亚砜提取液HPLC叠17HPLCHPLCHPLCHPLC指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究指纹图谱的比较研究结结论：论：1 1、体体外外培培育育牛牛黄黄与与天天然然牛牛黄黄三三个个提提取取部部位位（包包括括酸酸水水、酸酸醇醇和和二二甲甲亚亚砜砜提提取取液液）的的成成分分种种类类均均基基本本一致，但含量有差异。一致，但含量有差异。2 2、1010批体外培育牛黄三个提取部位（包括酸水、批体外培育牛黄三个提取部位（包括酸水、酸醇和二甲亚砜提取液）的酸醇和二甲亚砜提取液）的HPLCHPLC指纹图谱有较好的指纹图谱有较好的一致性，说明体外培育牛黄的工艺是稳定的。一致性，说明体外培育牛黄的工艺是稳定的。HPLC指纹图谱的比较研究结论：18天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析类项类项体外培育牛黄（国家药品标准）体外培育牛黄（国家药品标准）牛黄（药典牛黄（药典2000版）版）来源来源本品为以牛科动物牛的新鲜牛胆汁液,配成成石胆汁,在体外培育所得的牛胆红素钙结石。本品为牛科动物牛干燥的胆结石。宰牛时，如发现有牛黄，即滤去胆汁，将牛黄取出，除出外部薄膜，阴干。性状性状呈球形、类球形，直径0.5-3cm，表面光滑，呈黄红色至棕黄色，体轻，质松脆，有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。呈卵形、类球形，直径0.6-3（4.5）cm，表面黄红色至棕黄色，体轻，质松脆，有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。鉴别鉴别粉末加清水调和，涂于指甲，能将指甲染成黄色。加清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。显微鉴别呈正反应显微鉴别呈正反应胆红素鉴别呈正反应胆红素鉴别呈正反应胆酸鉴别呈正反应胆酸鉴别呈正反应去氧胆酸鉴别呈正反应去氧胆酸鉴别呈正反应无无检查检查按药典附录水份测定法测定不得过9.0%按药典附录水份测定法测定不得过9.0%游离胆红素吸收度不得超过0.70无含量含量测定测定按药典测定薄层扫描法胆酸含量不得少于6.0%。按药典薄层扫描法测定胆酸含量不得少于4.0%。按药典分光光度法测定胆红素含量不得少于35.0%。按药典分光光度法测定胆红素含量不得少35.0%。功能功能主治主治清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊厥抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊厥抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。用法用法用量用量0.15-0.35g。多入丸散用；外用适量，研末敷患处。0.15-0.35g。多入丸散用；外用适量，研末敷处。贮藏贮藏置阴凉干燥处，遮光，密闭保存，防潮防压。遮光，密闭，置阴凉干燥处，防潮，防压。天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析质量标准对比分析质量标准对比分析(一一)天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析类项体外培育牛黄（国家19质量标准对比分析质量标准对比分析质量标准对比分析质量标准对比分析（二）（二）（二）（二）天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析（20052005版药典）版药典）天然牛黄与体外培育牛黄质量标准：完全一致天然牛黄与体外培育牛黄质量标准：完全一致质量标准对比分析（二）20主要药效学对照性研究主要药效学对照性研究主要药效学对照性研究主要药效学对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研究抗抗炎炎作作用用：表明ICCB对急性炎症的渗出和白细胞的趋化均有抑制作用。ICCB的抗炎作用强度与天然牛黄相近。解解热热作作用用：ICCB对酵母所致大鼠的发热及对伤寒副伤寒三联疫苗致家兔发热均有显著的抑制作用，其作用强度与天然牛黄相似。中中枢枢抑抑制制作作用用：ICCB对安钠咖致小鼠惊厥，吗啡致小鼠竖尾反应有明显的对抗作用，以上作用强度均与天然牛黄相近。人工牛黄粉则无上述中枢抑制作用 抗菌作用：抗菌作用：ICCB能显著降低感染金黄色葡萄球菌小数的死亡率。主要药效学对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研21一般药理对照性研究一般药理对照性研究一般药理对照性研究一般药理对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究对对中中枢枢神神经经系系统统的的影影响响：ICCB具有镇静、抗惊厥作用，无镇痛作用。TPN对中枢神经系统的作用与天然牛黄相同。对心血管系统的影响：ICCB能明显降低大鼠的血压，但不影响心率的心电图。这一作用与天然牛黄一致。对对呼呼吸吸系系统统的的影影响响：ICCB和天然牛黄对大鼠的呼吸频率和幅度均无明显影响。一般药理对照性研究体外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究22体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄的主要药效集中反映在中枢作用方面：除了前述抗惊厥、镇静、解热作用外，还有耐缺氧、清除自由基，保护脑细胞，保护心功能的作用。（1）体外培育牛对小鼠密闭缺氧耐受力的影响组别组别动物数动物数剂量剂量给药途径给药途径成活时间成活时间XSD（min）NS1020ml/Kgig31.042.88ICCB10800mg/Kgig37.572089*ICCB101200mg/Kgig39.542.70*ICCB101600mg/Kgig40.023.06*PPN1020mg/Kgig38.012.95*:p*:p0.0010.001体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究组别动物数剂量给药途径23组组别别动物动物数数剂量剂量给药途给药途径径SOD(Nu/mgprc)XSD脑脑肝肝血清血清心心NS920ml/Kgig31.2010.7980.0010.79115.5726.1960.449.29ICCB101200mg/Kgig39.90507*94.6814.8*203.1623.73*69.878.71*:p*:p0.005*:p0.005*:p0.010.01（3）体外培育牛对缺氧小鼠的脑、心、肝组织及血清MDA含量的影响组组别别动物动物数数剂量剂量给药途给药途径径MDAnmol/mg(XSD)脑脑心心肝肝血清血清NS920ml/Kgig5.900.98.451.968.761.906.890.71ICCB101200mg/Kgig4.7011*5.511.4*7.291.5*5.201.02*:p*:p0.05*:p0.05*:p0.01*:p0.01*:p0.0010.001（2）体外培育牛对缺氧小鼠的血清及脑、心、肝组织匀浆SOD活性影响体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究组别动物数剂量给药途径SOD(Nu/mgprc)XSD脑24（4 4）缺氧小鼠脑组织超微结构改变之电镜所见缺氧小鼠脑组织超微结构改变之电镜所见对照组对照组治疗组治疗组神经元细胞水肿，胞浆内细胞器不同程度变性，线粒体肿胀，粗面内质网扩张，核糖体数量减少，部分胶质细胞核周积液，胞浆空亮，细胞器溶解，部分有髓神经纤维的髓鞘结构紊乱，部分无髓神经纤维肿胀，呈大小不等泡状，神经丝消失，见局限性神经纤维溶解灶。毛细血管管径不等，内皮细胞肿胀，胞浆内空泡增多，大部分毛细血管周围见积液性间隙。仅少量神经元细胞轻微变性。线粒体轻度肿胀，粗面内质网无明显扩张。核糖体数量基本正常，少数胶质细胞核周间隙增宽，有髓及无髓神经纤维的髓鞘结构规则。毛细血管内皮细胞无明显肿胀，毛细血管周围无积液性间隙。体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究（4）缺氧小鼠脑组织超微结构改变之电镜所见对照组治疗组神经元25体外培育牛黄急性、长期毒性试验体外培育牛黄急性、长期毒性试验体外培育牛黄急性、长期毒性试验体外培育牛黄急性、长期毒性试验体外培育牛黄急性毒性试验体外培育牛黄急性毒性试验从急性毒性试验结果可以看出，体外培育牛黄给予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TPN的LD50为9.0（8.0-10.1）g/kg，是人口服用量（0.3g或5mg/kg）的1800倍。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。体外培育牛黄长期毒性试验体外培育牛黄长期毒性试验在长期毒性试验中，大鼠耐受TPN1500mg/kg达35天，犬耐受TPN500mg/kg达33天。结果表明TPN长期口服大鼠和犬各系统的形态、结构和功能无不良影响，而且用药组动物的体重增长均高于对照组。体外培育牛黄急性、长期毒性试验体外培育牛黄急性毒性试验26体外培育牛黄致突变、染色体畸变试验体外培育牛黄致突变、染色体畸变试验体外培育牛黄致突变、染色体畸变试验体外培育牛黄致突变、染色体畸变试验体外培育牛黄致突变试验体外培育牛黄致突变试验体外培育牛黄在本试验条件下，从定性的标准和平皿掺入试验的观测结果，其对各受试菌株引起的回复菌落数均未超过对照组自发突变菌落数的2倍，表明试验结果为阴性显示体外培育牛黄对组氨酸缺陷型沙门氏菌无明显的致回复突变作用。培养细胞染色体畸变试验培养细胞染色体畸变试验在体外培育牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml的试验条件下，对人外周血淋巴细胞诱发的染色体细胞畸变率增加与溶剂对照组比较，均无统计学显著性差别意义，试验结果为阴性，表明在试验条件下，对人外周血淋巴细胞染色体无明显的致畸变性作用。体外培育牛黄致突变、染色体畸变试验体外培育牛黄致突变试验27体外培育牛黄对小鼠微核、生殖毒性试验体外培育牛黄对小鼠微核、生殖毒性试验体外培育牛黄对小鼠微核、生殖毒性试验体外培育牛黄对小鼠微核、生殖毒性试验体外培育牛黄对小鼠微核试验体外培育牛黄对小鼠微核试验体外培育牛黄的剂量为50、150、500mg/kg体重的试验条件下，对小鼠的骨髓嗜多染红细胞微核率未引起显著增加，表明体外培育牛黄未呈现明显的致突变性作用。生殖毒性试验生殖毒性试验本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠的生殖行为和能力、着床数及着床后胚胎存活数、存活胎仔的生长发育等方面均未观察到不良影响；对存活的胎仔亦未见有明显的致畸作用。体外培育牛黄对小鼠微核、生殖毒性试验体外培育牛黄对小鼠微核试28体外培育牛黄食品安全性评价体外培育牛黄食品安全性评价体外培育牛黄食品安全性评价体外培育牛黄食品安全性评价体外培育牛黄食品安全性评价：体外培育牛黄食品安全性评价：根据食品安全性毒理学评价程序与方法对体外培育牛黄的食品安全性毒理学进行了第一二阶段的检验。结果显示其通过食品安全性毒理学第一、第二阶段的检验。根据食品安全性毒理学评价程序与方法对体外培育牛黄的食品安全性毒理学进行了大鼠90天喂养试验，结果显示其结果为阴性。体外培育牛黄食品安全性评价体外培育牛黄食品安全性评价：29临床对比性研究临床对比性研究临床对比性研究临床对比性研究体外培育牛黄与天然牛黄单剂和复方制剂体外培育牛黄与天然牛黄单剂和复方制剂II、III期临床对比性研究总结期临床对比性研究总结用体外培育牛黄及以其为原料药的复方制剂治疗中风、乙脑、急性咽炎、牙周炎、疖肿病人共1852例，疗效良好，与优质天然牛黄无差异（见附表）；临床试验表明体外培育牛黄无明显毒副作用。（注:ICCB:体外培育牛黄,NN:天然牛黄）IIII、IIIIII期临床试验共期临床试验共期临床试验共期临床试验共18521852例治疗结果：例治疗结果：例治疗结果：例治疗结果：组别药名病名总例数愈显率（%）总有效率（%）治疗组安宫牛黄丸（ICCB）乙脑18293.9599.45对照组安宫牛黄丸（NN）乙脑7888.4697.43治疗组单味（ICCB）乙脑12492.7499.20对照组单味（NN）乙脑4175.6087.80治疗组安宫牛黄丸（ICCB）中风24847.9884.78对照组安宫牛黄丸（NN）中风14847.9784.93治疗组单味（ICCB）中风9537.986.30对照组单味（NN）中风3232.2580.60治疗组片仔癀（ICCB）急性咽炎41675.5096.64对照组片仔癀（NN）急性咽炎10280.3897.06治疗组单味（ICCB）牙周炎14890.5499.32对照组单味（NN）牙周炎3984.6194.87治疗组单味（ICCB）疖肿11076.3696.36对照组单味（NN）疖肿3966.6794.87临床对比性研究体外培育牛黄与天然牛黄单剂和复方制剂II、II30国家药典委员会意见国家药典委员会意见国家药典委员会意见国家药典委员会意见国家药典委员会国药典字200364号关于尽快解决牛黄系列产品在中成药处方中合理使用问题的请示国家食品药品监督管理局：今年以来，我们受局委托，对牛黄系列产品在中成药处方中使用问题，组织有关专家进行了多次研讨论证。在6月份就牛黄与人工牛黄使用问题形成明确意见和建议的基础上，在9月及10月份又分别组织中医药专家就体外培育牛黄、培植牛黄在中药制剂中使用的有关问题进行了研究论证，现将其会议纪要一并上报。我委综合了各专家意见，希望我局尽快予以解决牛黄、体外培育牛黄、培植牛黄及人工牛黄在中成药处方中合理使用的问题，以确保人民群众用药需求，促进中医药的可持续发展，推动医药高新技术产业化，为我国医药卫生的健康发展做出新的贡献。附：关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要 二00三年十一月十四日国家药典委员会意见国家药典委员会31关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（一）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（一）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（一）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（一）受国家食品药品监督管理局委托，国家药典委员会于2003年9月19-20日，在武汉组织召开了“体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会”。王永炎、周超凡、高学敏、张伯礼、季绍良、姚达木等十名著名中医药专家参加了会议。国家食品药品监督管理局注册司吕药处麻广霖同志以及武汉市药监局的领导亦参加了会议。会议由药典委员会中药处钱忠直处长主持，周福成副秘书长扼要介绍了药品标准工作情况并对开好这次会议提了要求。会上，听取了体外培育牛黄发明人蔡红娇教授关于体外培育牛黄的研制过程、临床试验、药理作用、单味药材与牛黄质量标准中所含成分的对比、临床对照，以及与几个含牛黄成分的中药成方制剂的临床对照（如片仔癀、安宫牛黄丸、牛黄解毒片等）的试验结果介绍。广州中医药大学赖世隆教授详细介绍了II期和III期临床验证情况。江苏中康新药指纹图谱开发公司的盛龙生研究员介绍了用指纹图谱对体外培育牛黄与天然牛黄主要化学成分的研究成果。会议期间，代表们还就体外培育牛黄的全部生产流程进行了实地参观考察并作进一步了解。会议由王永炎院士和高学敏教授分别担任专家组组长。经认真讨论，与会专家一致认为：体外培育牛黄工艺成熟，质量稳定，安全有效，与牛黄可以等同使用。另外，药典委员、中科院陈可冀院士虽未能到会，但特地提交了书面意见，亦与各专家意见一致。我们认为:一、在中药成方制剂的处方中，凡含牛黄的中成药，体外培育牛黄、培植牛黄与牛黄均可等量投料使用。二、从国家药品标准管理角度应履行相应的程序，在药品说明书中必须写明所使用的是何种牛黄，同时相应修订国家药品标准，使其名副其实，确保临床效果和质量可控。三、为确保中医药的可持续发展，今后尤其要对濒危动植物药材资源替代品的研究与应用制订鼓励政策，并大力推动医药原材料高新技术成果产业化。四、为确保临床效果，用药安全有效，建议今后中药新药研究中，尽可能推广使用体外培育牛黄或培植牛黄。二OO三年十一月十四日关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（一）受国家食品32关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（二）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（二）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（二）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（二）“体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会”国家药典委员会主要成员：国家药典委员会主要成员：国家药典委员会主要成员：国家药典委员会主要成员：陈可冀院士、王永炎院士、高学敏教授、张伯礼教授、周文泉教授、姚达木主任药师、钱忠直教授、周超凡研究员、赖世隆教授、季绍良教授、张启明主任药师、张立群主任药师关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（二）“体外培育牛33关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（三）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（三）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（三）关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（三）受国家食品药品监督管理局委托，国家药典委员会于2003年9月19-20日，在武汉组织召开了“体外培育牛黄在中药成方制剂中使用有关问题研讨会”。王永炎、周超凡、高学敏、张伯礼、季绍良、姚达木等十名著名中医药专家参加了会议。国家食品药品监督管理局注册司吕药处麻广霖同志以及武汉市药监局的领导亦参加了会议。会议由药典委员会中药处钱忠直处长主持，周福成副秘书长扼要介绍了药品标准工作情况并对开好这次会议提了要求。会上，听取了体外培育牛黄发明人蔡红娇教授关于体外培育牛黄的研制过程、临床试验、药理作用、单味药材与牛黄质量标准中所含成分的对比、临床对照，以及与几个含牛黄成分的中药成方制剂的临床对照（如片仔癀、安宫牛黄丸、牛黄解毒片等）的试验结果介绍。广州中医药大学赖世隆教授详细介绍了II期和III期临床验证情况。江苏中康新药指纹图谱开发公司的盛龙生研究员介绍了用指纹图谱对体外培育牛黄与天然牛黄主要化学成分的研究成果。会议期间，代表们还就体外培育牛黄的全部生产流程进行了实地参观考察并作进一步了解。会议由王永炎院士和高学敏教授分别担任专家组组长。经认真讨论，与会专家一致认为：体外培育牛黄工艺成熟，质量稳定，安全有效，与牛黄可以等同使用。另外，药典委员、中科院陈可冀院士虽未能到会，但特地提交了书面意见，亦与各专家意见一致。我们认为:一、在中药成方制剂的处方中，凡含牛黄的中成药，体外培育牛黄、培植牛黄与牛黄均可等量投料使用。二、从国家药品标准管理角度应履行相应的程序，在药品说明书中必须写明所使用的是何种牛黄，同时相应修订国家药品标准，使其名副其实，确保临床效果和质量可控。三、为确保中医药的可持续发展，今后尤其要对濒危动植物药材资源替代品的研究与应用制订鼓励政策，并大力推动医药原材料高新技术成果产业化。四、为确保临床效果，用药安全有效，建议今后中药新药研究中，尽可能推广使用体外培育牛黄或培植牛黄。二OO三年十一月十四日关于体外培育牛黄与培植牛黄应用问题会议纪要（三）受国家食品34国家食品药品监督管理局文件（一）国家食品药品监督管理局文件（一）国家食品药品监督管理局文件国食药监注200421号国家食品药品监督管理局文件（一）国家食品药品监督管理局文件35国家食品药品监督管理局文件（二）国家食品药品监督管理局文件（二）关于牛黄及其代用品使用问题的通知各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：牛黄是传统名贵中药材，是中成药的重要原料。长期以来，药源紧缺，难以满足临床用药的需要，大量牛黄依赖进口。为此，国家药品监督管理部门自1972年陆续批准了3个牛黄代用品，即：人工牛黄、培植牛黄和体外培育牛黄。但由于历史原因，在国家药品标准处方中牛黄代用品的使用问题一直没有明确，在一定程度上造成中成药生产和使用过程中牛黄与牛黄代用品混用的情况。为加强国家药品标准处方中含牛黄品种的监督管理，现将有关事宜通知如下：一、对于国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病症用药品种（见附件1）和国家药品监督管理部门批准的含牛黄的新药，可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄等量投料使用，但不得以人工牛黄替代。其他含牛黄的品种可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄或人工牛黄替代牛黄等量投料使用。二、各药品生产企业生产的含牛黄的品种应按照上述规定，固定使用牛黄、培植牛黄、体外培育牛黄或人工牛黄中的一种，并将品种的详细处方于2004年6月30日前报所在地省级药品监督管理部门，各省级药品监督管理部门应按照上述规定进行审查，并将审查意见及本辖区内含牛黄品种替代情况（见附件2）汇总后，于2004年7月31日前报我局药品注册司，同时抄送国家药典委员会。（续）国家食品药品监督管理局文件（二）关于牛黄及其代用品使用问题的36国家食品药品监督管理局文件（三）国家食品药品监督管理局文件（三）三、含牛黄或其代用品的药品必须在包装标签及使用说明书中的【成份】或【主要成份】项下明确牛黄或其代用品名称，并将该品种的包装标签及使用说明书报所在地省级药品监督管理部门备案。四、生产含牛黄或其代用品品种的药品生产企业在2004年6月30日以后必须按上述规定组织生产，此前已进入流通领域的可在其有效期内继续销售使用。五、已明确处方使用牛黄或其代用品的品种如需变更处方使用牛黄或其代用品，应按照药品注册管理办法的有关规定办理。六、国家药典委员会应按照上述规定统一组织含牛黄或其代用品品种的质量标准修订工作。七、医疗机构制剂处方中牛黄、培植牛黄、体外培育牛黄以及人工牛黄的使用，由所在地省级药品监督管理部门参照上述要求另行规定。各省级药品监督管理部门接此通知后应及时将以上规定通知辖区内相关药品生产企业，并督促相关药品生产企业做好此项工作，切实加强对含牛黄、培植牛黄、体外培育牛黄和人工牛黄药品的监督管理。二OO四年一月二十一日国家食品药品监督管理局文件（三）三、含牛黄或其代用品的药品必37附附附附 件件件件体外培育牛黄部分相关文件体外培育牛黄部分相关文件1、国家技术发明二等奖证书（证书号：、国家技术发明二等奖证书（证书号：2002-F-234-2-01-01）2、体外培育牛黄发明专利证书（第、体外培育牛黄发明专利证书（第24328号）号）3、偏心摇转机实用新型专利证书（证书号：第、偏心摇转机实用新型专利证书（证书号：第386457号）号）4、体外培育牛黄新药证书（编号（、体外培育牛黄新药证书（编号（97）卫药证字）卫药证字Z-125号）号）5、体外培育牛黄质量标准（、体外培育牛黄质量标准（WS3-45（Z-051）-2003（Z）6、体外培育牛黄药品、体外培育牛黄药品GMP证书（证书编号：证书（证书编号：D1670）7、国家重点新产品（、国家重点新产品（2003ED761004）8、国家重大科技专项（、国家重大科技专项（863）课题（）课题（2002AA2Z3212）9、国家经贸委、国家经贸委“双高一优双高一优”项目（项目（20011000号）号）10、科技部中小企业技术创新基金项目（、科技部中小企业技术创新基金项目（01C26114210557）附件体外培育牛黄部分相关文件38致致致致 谢谢谢谢 谢 谢！武汉大鹏药业有限公司武汉大鹏药业有限公司致谢谢谢！武汉大鹏药业有限公司39