中药制剂的鉴别课件

第二章第二章第二章第二章中药制剂的鉴别中药制剂的鉴别中药制剂的鉴别中药制剂的鉴别第二章1第一节第一节定定 性性 鉴鉴 别别第一节2定性鉴别：定性鉴别：利用各单味药材的形利用各单味药材的形态、组织学特征及其所态、组织学特征及其所含化学成分的结构特性、含化学成分的结构特性、化学反应、光谱特性、化学反应、光谱特性、色谱特性及某些物理化色谱特性及某些物理化学常数来鉴别中药制剂学常数来鉴别中药制剂中各单味药材的真伪及中各单味药材的真伪及存在与否的分析方法。存在与否的分析方法。方法：方法：1.1.性状鉴别性状鉴别2.2.显微鉴别法显微鉴别法3.3.理化鉴别法理化鉴别法 1 1）一般化学反应法）一般化学反应法 2 2）升华法）升华法 3 3）荧光法）荧光法 4 4）光谱法）光谱法 5 5）色谱法）色谱法定性鉴别：利用各单味药材的形态、组织学特征及其所含化3性状鉴别性状鉴别一、基本内容一、基本内容二、主要中药剂型形状要求二、主要中药剂型形状要求形状、大小、颜色、表面特征、形状、大小、颜色、表面特征、气、味、其他气、味、其他丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、锭剂、煎膏丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、锭剂、煎膏剂、糖浆剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、糖浆剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、酊剂、膏剂、贴膏剂、胶剂剂、酊剂、膏剂、贴膏剂、胶剂性状鉴别一、基本内容二、主要中药剂型形状要求形状、大小、颜色4中药制剂的鉴别课件5中药制剂的显微鉴别中药制剂的显微鉴别 利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留到制剂中去，因此均可用显微定性鉴别法进行鉴别。显微鉴别显微鉴别中药制剂的显微鉴别显微鉴别6制片方法：制片方法：l散剂、胶囊剂：取粉末少量，选用适当的试液散剂、胶囊剂：取粉末少量，选用适当的试液处理后直接进行显微观察。处理后直接进行显微观察。l片剂：切开，刮取少量样品，观察；粉末及粗片剂：切开，刮取少量样品，观察；粉末及粗则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。l水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。l蜜丸：可取蜜丸：可取1 1丸从正中切开后，刮取少量样品丸从正中切开后，刮取少量样品进行观察进行观察 制片方法：7注意：注意：在在本本法法鉴鉴别别中中，只只有有药药材材原原有有组组织织结结构构特特征征能能保保留留到到制制剂剂中中，才才有有意意义义。全全部部由由溶溶剂剂提提取取的的制剂，不用此法进行鉴别。制剂，不用此法进行鉴别。不同剂型其制片方法不同。不同剂型其制片方法不同。应应选选择择在在该该制制剂剂中中没没有有干干扰扰又又能能表表明明该该味味药药存在的显微特征作为鉴别依据。存在的显微特征作为鉴别依据。注意：8应用实例应用实例-六味地黄丸的显微定性鉴别六味地黄丸的显微定性鉴别 显微鉴别显微鉴别：取本品置显微镜下观察，(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。(熟地黄)(2)果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。(山茱萸）(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径2440um，脐点短缝状或人字状。(山药)3a草酸钙针晶束3b淀粉粒(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中(5)不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛溶化；菌丝无色，直径4-6um。(茯苓)(6)薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔。应用实例-六味地黄丸的显微定性鉴别显微鉴别：9显微特征显微特征 Microscopical characters生物显微镜生物显微镜-数码成像系数码成像系统统 显微特征 生物显微镜-数码成像系统 10F.unibracteataF.cirrhosaF.przewalskiiF.thunbergii浙浙贝母母川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎的性状和显微特征的性状和显微特征两者性状和两者性状和两者性状和两者性状和显微特征难显微特征难显微特征难显微特征难以区别以区别以区别以区别 F.unibracteataF.cirrhosaF.prze11 人参（主根）横切面人参（主根）横切面 Transverse section of ginseng Main rootCork 木栓木栓层 草酸草酸钙簇晶簇晶 Clusters of calcium oxalate 树脂道脂道 Resin canals Cortex 皮皮层Phloem 韧皮部皮部Cambium形成形成层Xylem 木木质部部 人参（主根）横切面 Cork 木栓层 121、水牛角浓缩粉、水牛角浓缩粉2、麝香、麝香3、珍珠、珍珠4、朱砂、朱砂5、雄黄、雄黄6、黄连、黄连7、栀子、栀子8、郁金、郁金9、黄芩、黄芩安宫牛黄丸安宫牛黄丸1、水牛角浓缩粉2、麝香3、珍珠4、朱砂5、雄黄6、黄连7、13郁金郁金糊化淀粉团块糊化淀粉团块栀子栀子种皮石细胞种皮石细胞黄芩黄芩纤维纤维黄连黄连纤维纤维朱砂朱砂不规则块状物不规则块状物或颗粒状物，暗红棕或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色色、鲜红色或棕黄色郁金糊化淀粉团块14理化鉴别理化鉴别显色、显色、荧光、荧光例例 二妙丸中苍术的鉴别二妙丸中苍术的鉴别苍术酮苍术酮苍术炔苍术炔试剂试剂组分组分理化鉴别显色、荧光例 二妙丸中苍术的鉴别苍术酮试剂组15一般化学反应法一般化学反应法 （General Chemical ReactionGeneral Chemical Reaction）利利用用检检测测试试剂剂与与制制剂剂中中的的指指标标性性成成分分发发生生化化学学反反应应，根根据据所所产产生生的的颜颜色色、沉沉淀淀或或气气体体等等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。现象，来判断某些成分或某些药味的有无。中中药药制制剂剂一一般般选选择择有有效效成成分分、特特征征成成分分作作为鉴别的对象。为鉴别的对象。一一般般化化学学反反应应鉴鉴别别法法多多在在试试管管中中用用湿湿法法反反应应进进行行，制制剂剂样样品品要要先先制制成成适适宜宜的的供供试试液液。一一般般情形下用情形下用5050-70-70乙醇回流提取制备供试液。乙醇回流提取制备供试液。一般化学反应法（General Chemical Re16二特点 1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强等特点。2.其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。3.易发生假阳性或假阴性反应二特点17一般化学反应法应该注意以下几点：一般化学反应法应该注意以下几点：(1)(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。生成反应、三氯化铁显色反应等。(2)(2)在分析前对样品进行分离、精制，除去干在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。(3)(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。一般化学反应法应该注意以下几点：18 三、常用的一般化学反应 主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别 （一）生物碱 1.碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀 2.碘化汞钾反应 产生类白色沉淀 3.硅钨酸反应 产生白色沉淀 4.苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。而具有专属性较强的其它反应。三、常用的一般化学反应 主要用于制剂中生物碱、黄19（二）黄酮类化合物 最多使用的检识反应为盐酸镁粉反应，呈紫红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。（三）蒽醌类化合物（三）蒽醌类化合物 主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。（二）黄酮类化合物 最多使用的检识反应为盐酸镁粉20（四）皂苷 常用的定性鉴别反应有：泡沫反应 样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。醋酐浓硫酸反应 甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。浓硫酸反应 呈现红、红紫色。三氯化锑或五氯化锑反应 氯仿液呈紫兰色。氯仿浓硫酸反应 氯仿层出现红色或兰色，并具绿色荧光。例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。（四）皂苷 常用的定性鉴别反应有：21（五）香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。异羟肟酸铁反应 呈红色。应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。（五）香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：22（六）挥发性成分 主要使用香草醛浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。（六）挥发性成分23（七）矿物药 朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.朱砂（主含HgS）主要采用铜片反应。HgS+2HCl+CuCuCl2 2+Hg（白）+H2 2S 天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。2.石膏、牡蛎、海螵蛸等 此类药物均富含钙盐，主要采用草酸铵反应。CaSO4 4+(NH4 4)2 2C2 2O4 4CaC2 2O4 4（白）+(NH4 4)2 2SO4 4 CaC2 2O4 4溶于盐酸，难溶于醋酸。CaC2 2O4 4+2HClCaCl2 2+H2 2C2 2O4 4 止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）（七）矿物药 朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。24 3.雄黄（主含As2S2）（1）氯化钡沉淀法（检出硫）AsAs2 2S S2 2+KClO+KClO3 3+4HNO+4HNO3 3 2K2K3 3AsOAsO3 3+H+H2 2SOSO4 4+Cl+Cl2 2+4NO+4NO H H2 2SOSO4 4+BaCl+BaCl2 2 BaSOBaSO4 4（白）（白）牙痛一粒丸 （2）硫化氢反应（检出砷）2As2As2 2S S2 2+7O+7O2 2 2As 2As2 2O O3 3+4SO+4SO2 2 As As2 2O O3 3+3H+3H2 2O 2HO 2H3 3AsOAsO3 3 2H 2H3 3AsOAsO3 3+3H+3H2 2S AsS As2 2S S3 3(黄)+6H+6H2 2O O AsAs2 2S S3 3在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中 4As4As2 2S S3 3+12(NH+12(NH4 4)2 2COCO3 3 4(NH4(NH4 4)3 3AsOAsO3 3+4(NH+4(NH4 4)3AsS)3AsS3 3+12CO+12CO2 2 小儿惊风散等。o 3.雄黄（主含As2S2）o25（八）动物药 常含有较多的蛋白质或氨基酸，故鉴别此类药物，常使用茚三酮反应，正反应呈红紫色。例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）、参茸保胎丸（阿胶、鹿茸）等。（八）动物药 常含有较多的蛋白质或氨基酸，故鉴别此26四、操作方法（1）供试液的制备（见前述）（2）操作方式 大多为试管反应，或在检测试纸上、或在蒸发皿（坩埚）中进行反应 四、操作方法（1）供试液的制备（见前述）27五、结果判断 将反应现象或结果与药品标准对照，若一致则符合规定。若不一致则判定为不符合规定。五、结果判断28六、注意事项 试管反应一般使用210cm试管，取供试液12ml。加入检测试液时，试管应稍倾斜，试液应沿试管内壁逐滴加入，滴管下口不得触及内壁。加入反应试液后一般需振摇试管，使之与供试液混匀。振摇时应缓缓摇摆振摇，不得上下振摇，手指不允许堵塞试管口，若需层反应，则不得振摇试管。一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉淀为白色或类白色则需在黑色背景下观察。如果反应需加热，一般在水浴中加热。用试管夹夹持试管，内容物不得超过容积的2/3，试管应倾斜45度，试管口不得闭塞，并不得朝向人。加热有机溶液绝对不允许使用明火热源。如果反应需无水条件，必须保持试管、蒸发皿等容器的干燥，例如醋酐浓硫酸反应。六、注意事项 试管反应一般使用210cm试管，取29七、应用实例1.千柏鼻炎片2.小儿清热止咳口服液3.茴香橘核丸4.地奥心血康胶囊5.养阴清肺膏6.安胃片7.天王补心丹8.牙痛一粒丸9.中风回春片七、应用实例1.千柏鼻炎片6.安胃片30取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。（黄芩中有大量黄酮）(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）实例：牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应实例：牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应实例：牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应31附：显微化学鉴别法附：显微化学鉴别法 (一一)取取药药材材的的切切片片、粉粉末末或或中中成成药药粉粉末末，置置载载玻玻片片上上，滴滴加加各各种种试试剂剂，加加盖盖玻玻片片，在在显显微微镜镜下下观观察察产产生生的的结结晶晶或或沉沉淀淀，以以及及特特殊殊的的颜颜色色等等，作为鉴别的特征。作为鉴别的特征。例例：穿穿心心莲莲用用水水湿湿润润，切切成成横横切切片片，滴滴加加乙乙醇醇后后加加KeddeKedde试试液液，叶叶肉肉组组织织显显紫紫红红色色(穿穿心心莲莲内内酯成分的不饱和内酯环反应酯成分的不饱和内酯环反应)。附：显微化学鉴别法32 (二二)取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。显微镜下观察反应。例如：例如：槟榔粉末槟榔粉末0.5g0.5g，加水，加水3 34ml4ml及稀盐酸及稀盐酸1 1滴，滴，微热数分钟，过滤，取滤液微热数分钟，过滤，取滤液1 1滴于载玻片上，加滴于载玻片上，加碘化铋钾试液碘化铋钾试液1 1滴，即发生混浊，放置后可见石滴，即发生混浊，放置后可见石榴红球形或方形结晶榴红球形或方形结晶(槟榔碱槟榔碱)。(二)取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴33 (三三)取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。察反应现象。例如：例如：钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡(碳酸盐分解产生碳酸盐分解产生CO2)。番木鳖胚乳薄片，加番木鳖胚乳薄片，加1 1钒酸铵钒酸铵-硫酸试液硫酸试液1 1滴，滴，胚乳速显紫色胚乳速显紫色(番木鳖碱番木鳖碱)，另取切片加发烟硝酸，另取切片加发烟硝酸1 1滴，滴，即显橙红色即显橙红色(马钱子碱马钱子碱)。(三)取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。34升华鉴别法升华鉴别法（Sublimation）一、原理一、原理 本法是利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。升华鉴别法（Sublimation）一、原理35二、特点二、特点 升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法专属性亦较好。二、特点36三、操作方法三、操作方法 大多采用微量升华法，少数使用坩埚法或蒸发皿法，在此，仅介绍微量升华。三、操作方法37六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地38 四、注意事项四、注意事项 升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。无金属片，可用载玻片代替。四、注意事项39五、应用实例五、应用实例(一)万应锭的鉴别（二）小儿惊风散的鉴别（三）明目地黄丸的鉴别五、应用实例(一)万应锭的鉴别40实例实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别牛黄解毒丸微量升华鉴别 取取本本品品进进行行微微量量升升华华，先先得得白白色色升升华华物物后后（冰冰片片），继继得得黄黄色色升升华华物物（大大黄黄中中蒽蒽醌醌）。将将升升华华物物分分别别置置显显微微镜镜下下观观察察：白白色色升升华华物物呈呈不不定定形形的的无无色色片片状状结结晶晶，加加新新制制的的1 1香香草草醛醛硫硫酸酸溶溶液液，渐渐显显紫紫红红色色，黄黄色色升升华华物物呈呈黄黄色色针针状状结结晶晶或或羽羽状状结结晶晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。遇碱显红色，遇酸变为黄色。实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别41荧光鉴别法荧光鉴别法（FluorescenceFluorescence）一、原理一、原理 荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。荧光鉴别法（Fluorescence）一、原理42二特点二特点 本法操作简便、灵敏，具有一定的专属性。例如大黄和土大黄，前者显棕色至棕红色荧光，而后者显亮蓝色荧光，很容易区分。二特点43三、操作方法三、操作方法 取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯（365nm）下约10cm处观察所产生的荧光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观察荧光及其变化。三、操作方法44四、注意事项四、注意事项 荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度。紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触。四、注意事项45五、应用实例五、应用实例（一）元胡止痛片（二）五味麝香丸（三）热炎宁颗粒五、应用实例46紫外紫外-可见光谱鉴别法可见光谱鉴别法(Ultraviolet and Visible Spectroscopy)(Ultraviolet and Visible Spectroscopy)一、原理一、原理一、原理一、原理 某些中药或中成药经适当处理后，所得紫外吸收光谱是由其各组分的特征吸收叠加而成的。若将中药制剂作为一个特定的整体，在一定测试条件下，只要各药味及其成分的组成与含量相对稳定，则其紫外吸收光谱具有一定的特征性和重现性，可以用于定性鉴别。两组分的加和紫外吸收光谱紫外-可见光谱鉴别法一、原理 47二、定性鉴别二、定性鉴别定性鉴别的依据定性鉴别的依据定性鉴别的依据定性鉴别的依据吸收光谱的特征吸收光谱的特征吸收光谱的特征吸收光谱的特征 吸收光谱的吸收光谱的吸收光谱的吸收光谱的形状形状形状形状 吸收峰的吸收峰的吸收峰的吸收峰的数目数目数目数目 吸收峰的吸收峰的吸收峰的吸收峰的位置（波长）位置（波长）位置（波长）位置（波长）吸收峰的吸收峰的吸收峰的吸收峰的强度强度强度强度 相应的相应的相应的相应的吸光系数吸光系数吸光系数吸光系数二、定性鉴别定性鉴别的依据吸收光谱的特征481 1对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性同一测定条件下，同一测定条件下，同一测定条件下，同一测定条件下，与标准对照物谱图或标准谱图与标准对照物谱图或标准谱图与标准对照物谱图或标准谱图与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较进行对照比较进行对照比较进行对照比较1对比吸收光谱的一致性同一测定条件下，492 2对比吸收光谱的特征值对比吸收光谱的特征值2对比吸收光谱的特征值503 3 3 3对比吸光度或吸光系数的比值：对比吸光度或吸光系数的比值：对比吸光度或吸光系数的比值：对比吸光度或吸光系数的比值：例：例：例：例：3对比吸光度或吸光系数的比值：例：51三、特点三、特点三、特点三、特点分光光度鉴别法简便、灵敏、易普及。但由于紫外光谱分辨率较低，图谱简单，某些不同的样品可能给出极其相似的光谱图，使其在实际工作中受到一定的限制。如果对样品进行前处理，除去干扰成分，则可有效地提高该法的专属性。中国药典仅有少数中成药品种收载了分光光度鉴别法，例如，木香槟榔丸等。中国药典规定以最大吸收波长（max）做为鉴别参数。样品吸收峰波长应在该品种项下 规定的波长2nm以内。复方丹参片紫外谱线组图三、特点复方丹参片紫外谱线组图52四、操作方法四、操作方法四、操作方法四、操作方法五、注意事项五、注意事项五、注意事项五、注意事项六、结果判断六、结果判断六、结果判断六、结果判断 将供试品最大吸收波长和药品标准的规定进行比较，二者如果一致，则判定为符合规定。四、操作方法53七、应用实例七、应用实例七、应用实例七、应用实例 木香槟榔丸 处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、青皮（醋炒）、香附（醋制）、三棱（醋制）、莪术（醋制）取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度法（中国药典附录V A）测定，在253nm波长处有最大吸收。（检出挥发性成分）中药制剂的鉴别课件54色谱鉴别色谱鉴别TLCTLC法法-应用最多应用最多 （R Rf f、颜色、荧光）、颜色、荧光）GCGC法法 -适用于含挥发性成分的药物适用于含挥发性成分的药物 HPLCHPLC法法-常与含量测定同时进行常与含量测定同时进行色谱鉴别TLC法-应用最多 55 气相色谱鉴别法气相色谱鉴别法(Gas Chromatography GC)一、原理一、原理一、原理一、原理 在一定的色谱条件下，相同的物质应具有相同的色谱特性（分配系数）和色谱行为（保留值）。因此，在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱仪，对二者的气相色谱图进行比对，根据供试品是否给出与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品作出定性分析。这种方法可称为保留时间比较法，中国药典即采用此法对某些中成药进行真伪鉴别。保留时间（tR）系指从进样开始，到该组分色谱峰顶点的时间间隔。气相色谱鉴别法 在一定的色谱条件下，相同56色谱峰示意图色谱峰示意图57二、特点二、特点二、特点二、特点 气相色谱法具有高分辨率，高灵敏度、快速、准确等特点，尤其适合分析制剂中的挥发性成分，如麝香酮、薄荷醇、冰片、水杨酸甲酯等。一般情况下气相色谱不适合分析蒸汽压较低的也即挥发性较小的成分，因此该法在实际工作中具有一定的局限性。三、操作方法三、操作方法三、操作方法三、操作方法 四、注意事项四、注意事项四、注意事项四、注意事项气 相 色 谱 仪二、特点 三、操作方法气 相 色 谱 仪58五、结果判断五、结果判断五、结果判断五、结果判断 比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱带，则判断为符合药品标准规定。所谓保留时间相同是指基本相同，彼此相差百分之几秒是允许的。五、结果判断59六、应用实例六、应用实例六、应用实例六、应用实例（一）少林风湿跌打膏（二）安宫牛黄丸中麝香的鉴别-麝香酮安宫牛黄丸六、应用实例-麝香酮安宫牛黄丸60高效液相色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法（High Performance Liquid Chromatography HPLC)一、原理一、原理一、原理一、原理 高效液相色谱法鉴别在原理和操作上与气相色谱鉴别法有许多相似之处。中国药典采用保留时间比较法，即在相同的色谱条件下，比较样品和对照品的色谱峰的保留时间（tR）是否一致，从而对被检成分（药味）的存在情况做出判断。例如，六味地黄丸中芍药苷和四君子丸中甘草酸的鉴别。六味地黄丸中芍药苷的高效液相色谱图(a.芍药苷)A.芍药苷对 照品 B.六味地黄丸供试品标准品高效液相色谱鉴别法一、原理 61二、特点二、特点二、特点二、特点 高效液相色谱法不受样品挥发性的限制，固定相、流动相的选择范围较宽，检测手段多样，加之高效快速，微量，自动化程度高等特点，所以在药物分析工作中比气相色谱法应用更为广泛，在中药制剂鉴别中的应用也日益增多。不过，目前在中药制剂质量标准中，一般很少单独使用该法做鉴别，而是多与含量测定结合进行。二、特点62 三、操作方法三、操作方法三、操作方法三、操作方法 四、注意事项四、注意事项四、注意事项四、注意事项 五、应用实例五、应用实例五、应用实例五、应用实例 （一）龙牡壮骨颗粒中维生素（一）龙牡壮骨颗粒中维生素D D2 2鉴别鉴别 （二）百令胶囊的鉴别（二）百令胶囊的鉴别（0505版新增内容）版新增内容）本品系由发酵虫草菌粉（本品系由发酵虫草菌粉（C CS S-C-Q80-C-Q80）制成。采用）制成。采用高效液相色谱法鉴别其中的核苷类成分。高效液相色谱法鉴别其中的核苷类成分。三、操作方法63核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别：样品先用乙醚脱脂，再用样品先用乙醚脱脂，再用0.50.5磷酸溶液超声波提取制成磷酸溶液超声波提取制成核苷供试液。用反相高效液相色谱法测定，以乙腈为流动相核苷供试液。用反相高效液相色谱法测定，以乙腈为流动相A A，以，以0.04mol/L0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相磷酸二氢钾溶液为流动相B B，梯度洗脱梯度洗脱，供试品，供试品色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。时时间间（分分钟钟）流流动动相相A A（）流流动动相相B B（）015 015 0 0 100 100 1545 1545 015 015 1008510085核苷类成分的鉴别：64第二节第二节 薄层层析技术薄层层析技术第二节 65概概 述述1938193819381938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。种天然药物。种天然药物。种天然药物。1965196519651965年德国化学家出版了年德国化学家出版了年德国化学家出版了年德国化学家出版了“薄层色薄层色薄层色薄层色谱法谱法谱法谱法”一书，推动了这一技术的发展。一书，推动了这一技术的发展。一书，推动了这一技术的发展。一书，推动了这一技术的发展。因因因因TLCTLCTLCTLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结法设备简单，分析速度快，分离效率高，结法设备简单，分析速度快，分离效率高，结法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。果直观，很快被用作定性和半定量的方法。果直观，很快被用作定性和半定量的方法。果直观，很快被用作定性和半定量的方法。70707070年代中后期发展了高效薄层色谱。年代中后期发展了高效薄层色谱。年代中后期发展了高效薄层色谱。年代中后期发展了高效薄层色谱。80808080年代以后年代以后年代以后年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。器化，并实现了计算机化。器化，并实现了计算机化。器化，并实现了计算机化。概 述66一、原理一、原理 基基于于相相同同物物质质在在同同一一的的色色谱谱条条件件下下，表表现现出出相相同同的的色色谱谱行行为为这这一一基基本本规规律律，在在同同一一块块薄薄层层板板上上点点加加供供试试品品和和对对照照物物，在在相相同同条条件件下下展展开开，显显色色检检出出色色谱谱斑斑点点后后，将将所所得得供供试试品品与与对对照照物物的的色色谱谱图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。一、原理67二、特点二、特点 （一）简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功（一）简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采用能，且采用共薄层对照分析法共薄层对照分析法共薄层对照分析法共薄层对照分析法，故专属性亦较强。，故专属性亦较强。（二）要求做系统适用性试验。（二）要求做系统适用性试验。(05(05版药典新增版药典新增)1.1.检测灵敏度检测灵敏度 2.2.分离度分离度 3.3.重复性重复性（三）要求设置（三）要求设置对照物对照物二、特点 681.1.检测灵敏度检测灵敏度 主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。系统适用性试验1.检测灵敏度 系统适用性试验692.2.分离度分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.0。2.分离度 70 分离度（R）的计算公式为：R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离；W1 及W2为相邻两峰各自的峰宽；ABW1W2d1d2ABW1W2d1d2713.3.重复性重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相相对对标标准准偏偏差差(RSD)(RSD)应不不大大于于3.0%3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。3.重复性 72对照物分为对对照照品品（主要为有效成分和特征性成分的单体）、对照药材对照药材和对照提取物对照提取物三种。对照物的设置有四种方式：设置一种或数种对照品 设置对照提取物 设置一种或数种对照药材 同时设置对照品和对照药材(“双双对对照照”)”)，它要求样品色谱图中的主斑点应与对照品和对照药材色谱图中的有关斑点相一致，提高专属性和整体性，可有效地检出药品是否使用了假冒药材.设置对照物对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体）、对照药73（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。（五）中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药鉴别的重74薄层色谱与高效液相色谱的差别（薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点特点）固定相和流动相固定相和流动相TLCTLC 流动相流动靠毛细作用力，流动相流动靠毛细作用力，流动流动相选择较少受限制，固定相不用再生。相选择较少受限制，固定相不用再生。而而 HPLC HPLC是在封闭的系统内，流动相流量是在封闭的系统内，流动相流量靠泵控制，溶剂选择受检测器限制，固靠泵控制，溶剂选择受检测器限制，固定相需再生。定相需再生。样品处理样品处理TLCTLC要求要求没有没有HPLCHPLC严格。严格。薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）75色谱分离色谱分离TLCTLC可可同时分离多个样品同时分离多个样品，并可采用相同或，并可采用相同或不同溶剂进行同向或双相不同溶剂进行同向或双相多次展开多次展开，通常，通常采用采用正相正相色谱，色谱后色谱，色谱后衍生化方便衍生化方便。HPLCHPLC一次只能分离一个样品，通常采用一次只能分离一个样品，通常采用反反相相色谱，色谱后衍生化受限制。色谱，色谱后衍生化受限制。色谱分离76对污染物抗受力对污染物抗受力TLCTLC颗粒物质、腐蚀性物质、不颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均无影响。可逆吸附物质均无影响。HPLC HPLC 颗粒物质、腐蚀性物质、颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均有大的影响。不可逆吸附物质均有大的影响。对污染物抗受力77三、薄层色谱器材及操作三、薄层色谱器材及操作薄层板薄层板 1.市售薄层板（亦称预制薄层板）除另有规定外，一般要求使用市售薄层板。市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板两种。常用的有硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。三、薄层色谱器材及操作薄层板782.2.自制薄层板自制薄层板 在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，除另有规定外，玻板可用10cm10cm、10cm15cm、20cm10cm、20cm20cm不同规格的，最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小，一般要求直径为1040m。薄层板采用湿法制备，即使用涂布器将制好的固定相糊均匀涂布于玻板上。所用涂布器应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。涂布器有手动、半自动、全自动等类型。2.自制薄层板 79不同规格的薄层板铺制薄层板不同规格的薄层板铺制薄层板80固定相固定相未改性固定相未改性固定相硅胶硅胶硅胶硅胶为使用最广泛的薄层材料为使用最广泛的薄层材料为使用最广泛的薄层材料为使用最广泛的薄层材料氧化铝氧化铝氧化铝氧化铝有碱性、中性、酸性有碱性、中性、酸性有碱性、中性、酸性有碱性、中性、酸性硅藻土硅藻土硅藻土硅藻土为化学中性吸附剂为化学中性吸附剂为化学中性吸附剂为化学中性吸附剂纤维素纤维素纤维素纤维素天然多糖类天然多糖类天然多糖类天然多糖类聚酰胺聚酰胺聚酰胺聚酰胺为特殊类型有机薄层材料，对能为特殊类型有机薄层材料，对能为特殊类型有机薄层材料，对能为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。形成氢键的物质有特别的选择性。形成氢键的物质有特别的选择性。形成氢键的物质有特别的选择性。固定相81表面改性固定相表面改性固定相疏水改性硅胶疏水改性硅胶疏水改性硅胶疏水改性硅胶化学键合烷基化学键合烷基化学键合烷基化学键合烷基亲水改性硅胶亲水改性硅胶亲水改性硅胶亲水改性硅胶引入氨基、氰基、二羟基引入氨基、氰基、二羟基引入氨基、氰基、二羟基引入氨基、氰基、二羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间剂之间剂之间剂之间（极性次序：硅胶极性次序：硅胶极性次序：硅胶极性次序：硅胶氨基氨基氨基氨基氰基氰基氰基氰基二二二二羟基羟基羟基羟基 反相反相反相反相）。）。）。）。表面改性纤维素表面改性纤维素表面改性纤维素表面改性纤维素乙酰化纤维素乙酰化纤维素乙酰化纤维素乙酰化纤维素药典收载的固定相有药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。类等。类等。类等。颗粒直径颗粒直径颗粒直径颗粒直径一般要求一般要求一般要求一般要求10 40 um10 40 um。表面改性固定相82中药制剂分析中固定相的选择中药制剂分析中固定相的选择中药制剂分析中固定相的选择中药制剂分析中固定相的选择硅胶硅胶硅胶硅胶G G G G板（可加板（可加板（可加板（可加0.3%0.5%CMC-Na0.3%0.5%CMC-Na）-多用多用多用多用 氧化铝板氧化铝板氧化铝板氧化铝板 常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物 聚酰胺板聚酰胺板聚酰胺板聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类物质常用于黄酮类及酚类物质常用于黄酮类及酚类物质常用于黄酮类及酚类物质 纤维素板纤维素板纤维素板纤维素板 常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物 中药制剂分析中固定相的选择硅胶G板（可加0.3%0.583黏结剂黏结剂无机黏结剂无机黏结剂无机黏结剂无机黏结剂石膏石膏石膏石膏（硫酸钙），添加石膏的（硫酸钙），添加石膏的（硫酸钙），添加石膏的（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母吸附剂以字母吸附剂以字母吸附剂以字母“G”“G”“G”“G”表示。没有黏结剂的吸附表示。没有黏结剂的吸附表示。没有黏结剂的吸附表示。没有黏结剂的吸附剂以字母剂以字母剂以字母剂以字母“H”“H”“H”“H”表示。无机黏结剂的优点是：表示。无机黏结剂的优点是：表示。无机黏结剂的优点是：表示。无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。匀浆易凝固。薄层强度差。匀浆易凝固。薄层强度差。匀浆易凝固。薄层强度差。有机黏结剂有机黏结剂有机黏结剂有机黏结剂羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（CMCCMCCMCCMC）、淀、淀、淀、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。剂。剂。剂。黏结剂84荧光黏结剂荧光黏结剂在吸附剂中添加某种荧光指在吸附剂中添加某种荧光指在吸附剂中添加某种荧光指在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂示剂，常用的荧光指示剂示剂，常用的荧光指示剂示剂，常用的荧光指示剂在在在在254nm254nm254nm254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。硫化镉、阴极绿等。硫化镉、阴极绿等。硫化镉、阴极绿等。在在在在366nm366nm366nm366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。有荧光的指示剂如彩蓝等。有荧光的指示剂如彩蓝等。有荧光的指示剂如彩蓝等。含有荧光指示剂的商品吸附剂以含有荧光指示剂的商品吸附剂以含有荧光指示剂的商品吸附剂以含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”“F”“F”“F”表示，表示，表示，表示，并以下标注明其激发光波长。例并以下标注明其激发光波长。例并以下标注明其激发光波长。例并以下标注明其激发光波长。例 硅胶硅胶硅胶硅胶HFHFHFHF254254254254 中药制剂的鉴别课件85载板载板 玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。水珠。水珠。水珠。载板86点样器材点样器材 为为了了增增强强药药品品定定性性鉴鉴别别的的可可比比性性，中中国国药药典典规规定定采采用用定定量量点点样样。最最常常用用的的是是微微升升毛毛细细管管（定定容容毛毛细细管管），为为了了提提高高点点样样效效率率和和质质量量，还还可可用用点点样样辅辅助助设设备备，如如点点样样支支架架、半半自自动动或或自自动动点点样样器。器。点样器材87 展开容器展开容器 应使用专用的展开缸，展开缸有水平式及直立式两种类型。上行展开一般使用直立展开缸，它又分为平底式和双槽式，双槽展开缸具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。展开缸盖子应能密闭，体积应与薄层板大小相适应。不能用生物标本缸等其它玻璃器皿作为展开缸，否则影响展开质量。展开容器88全自动点样仪微升毛细管双槽展开缸全自动点样仪微升毛细管双槽展开缸89显色（检视）装置显色（检视）装置展展展展开开开开后后后后的的的的薄薄薄薄层层层层板板板板，一一一一般般般般需需需需采采采采用用用用相相相相应应应应的的的的显显显显色色色色（检检检检视视视视）方法使板上的被检成分斑点显色。方法使板上的被检成分斑点显色。方法使板上的被检成分斑点显色。方法使板上的被检成分斑点显色。喷喷喷喷雾雾雾雾显显显显色色色色应应应应使使使使用用用用玻玻玻玻璃璃璃璃喷喷喷喷雾雾雾雾瓶瓶瓶瓶或或或或专专专专用用用用喷喷喷喷雾雾雾雾器器器器，要要要要求求求求用用用用压压压压缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；浸浸浸浸渍渍渍渍显显显显色色色色可可可可用用用用专专专专用用用用玻玻玻玻璃璃璃璃器器器器皿皿皿皿或或或或适适适适宜宜宜宜的的的的展展展展开开开开缸缸缸缸做做做做为为为为浸浸浸浸渍渍渍渍槽；槽；槽；槽；蒸蒸蒸蒸气气气气熏熏熏熏蒸蒸蒸蒸显显显显色色色色可可可可在在在在双双双双槽槽槽槽展展展展开开开开缸缸缸缸或或或或大大大大小小小小适适适适宜宜宜宜的的的的干干干干燥燥燥燥器器器器中中中中进行；进行；进行；进行；荧荧荧荧光光光光检检检检视视视视装装装装置置置置为为为为装装装装有有有有可可可可见见见见光光光光、254nm254nm254nm254nm及及及及365nm365nm365nm365nm紫紫紫紫外外外外光光光光源源源源和和和和相相相相应应应应滤滤滤滤光光光光片片片片的的的的暗暗暗暗箱箱箱箱，可可可可附附附附加加加加摄摄摄摄像像像像设设设设备备备备供供供供拍拍拍拍照照照照图图图图像像像像用用用用，暗暗暗暗箱箱箱箱内光源应有足够的光照度。内光源应有足够的光照度。内光源应有足够的光照度。内光源应有足够的光照度。显色（检视）装置90喷雾显色荧光显色喷雾显色荧光显色91 操作方法操作方法 一般操作步骤为：一般操作步骤为：一般操作步骤为：一般操作步骤为：薄层板制备（制板）薄层板制备（制板）薄层板制备（制板）薄层板制备（制板）点样点样点样点样展开展开展开展开显色与检视显色与检视显色与检视显色与检视（一）薄层板制备（一）薄层板制备（一）薄层板制备（一）薄层板制备 1.1.1.1.市售薄层板市售薄层板市售薄层板市售薄层板 临临临临用用用用前前前前一一一一般般般般应应应应在在在在110110活活活活化化化化30303030分分分分钟钟钟钟。聚聚聚聚酰酰酰酰胺胺胺胺薄薄薄薄膜膜膜膜不不不不需需需需活活活活化化化化。如如如如在在在在贮贮贮贮放放放放期期期期间间间间被被被被空空空空气气气气中中中中杂杂杂杂质质质质污污污污染染染染，使使使使用用用用前前前前可可可可用用用用三三三三氯氯氯氯甲甲甲甲烷烷烷烷、甲甲甲甲醇醇醇醇或或或或二二二二者者者者的的的的混混混混合合合合溶溶溶溶剂剂剂剂在在在在展展展展开开开开缸缸缸缸中中中中上上上上行展开预洗，行展开预洗，行展开预洗，行展开预洗，110110110110活化，放干燥器中备用。活化，放干燥器中备用。活化，放干燥器中备用。活化，放干燥器中备用。操作方法92 2.2.2.2.自制薄层板自制薄层板自制薄层板自制薄层板 除除另另有有规规定定外外，将将1 1份份固固定定相相和和3 3份份水水（或或0.20.20.50.5羧羧甲甲基基纤纤维维素素钠钠水水溶溶液液）在在研研钵钵中中向向同同一一方方向向研研磨磨混混合合，去去除除表表面面的的气气泡泡后后，倒倒入入涂涂布布器器中中，在在玻玻璃璃板板上上平平稳稳地地移移动动涂涂布布器器进进行行涂涂布布，取取下下涂涂好好薄薄层层的的玻玻璃璃板板，置置水水平平台台上上室室温温下下晾晾干干后后，在在110110烘烘3030分分钟钟1 1小小时时活活化化，立立即即置置干干燥燥器器中中备备用用。薄薄层层板板一一般般要要求求新新鲜鲜制制备备，当当天天使使用用。使使用用前前应应在在反反射射光光及及透透射射光光下下检检查查其其质质量量，若若板板面面不不均均匀匀、不不平平整整或或有有麻麻点点、有有气气泡、有破损及污染等情况，应弃去不用。泡、有破损及污染等情况，应弃去不用。2.自制薄层板 93（二）点样（二）点样 1.1.供试品溶液的制备供试品溶液的制备 主要采用浸渍法、回流以及超声等方法提取，液液萃取法或固液萃取法进行精制。有的成分在药品中是以苷或酯等结合态存在，检验前需水解成游离态再与相应的对照品一同展开分离、鉴别。如万应锭中熊胆的鉴别、定坤丹中人参和三七的鉴别和牛黄上清丸中大黄的鉴别。要求配制样品的溶剂高度挥发性和要求配制样品的溶剂高度挥发性和要求配制样品的溶剂高度挥发性和要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展尽可能非极性，否则易使斑点扩展尽可能非极性，否则易使斑点扩展尽可能非极性，否则易使斑点扩展（二）点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极942.原点的点加原点的点加 除另有规定外，在干燥洁净的环境，用专用毛细管或半自动、自动点样器械点样于薄层板上形成原点。原点一般为圆点状或窄细的条带状。原点基线距板底边1015mm，高效板原点基线离底边810mm。圆点状原点直径一般不大于3mm；条带状的宽度一般为510mm。高效板条带宽度为48mm，原点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效板样品间隔不少于5mm。毛细管接触点样时应少量多次点加，才能保证原点小而圆。还需注意勿损伤薄层表面，点加条带原点时应注意条带的均匀性，用喷雾状条带点样器，可保证点样的质量。药典规定：点样基线距底边药典规定：点样基线距底边药典规定：点样基线距底边药典规定：点样基线距底边2.0cm2.0cm,样点直径样点直径样点直径样点直径2-4mm2-4mm,点点点点间距离约为间距离约为间距离约为间距离约为1.5-2.0cm1.5-2.0cm。2.原点的点加 药典规定：点样基线距底边2.0cm,958mm原原点点起起始线始线5mm815cm11.5cm溶剂前沿溶剂前沿展展开开剂剂液面液面8mm原点起始线5mm815cm11.5cm溶剂前沿96（三）展开（三）展开（三）展开（三）展开 点点样样后后的的薄薄层层板板放放入入加加有有展展开开剂剂的的展展开开缸缸中中，密密闭闭，一一般般采采用用上上上上行行行行一一一一次次次次展展展展开开开开。薄薄层层板板浸浸入入展展开开剂剂的的深深度度以以液液面面距距原原点点5mm5mm为为宜宜，薄薄薄薄层层层层板板板板水水水水平平平平倾倾倾倾斜斜斜斜7575 ，溶溶剂剂前前沿沿达达到到规规定定的的展展距距后后，取取出出薄薄层层板板，晾晾干干，待待检检测测。一一般般上上行行展展展展开开开开815cm815cm，高高效效板板上上行展开行展开5 58cm8cm。必要时可进行二次展开或双向展开。必要时可进行二次展开或双向展开。例例如如，益益气气养养血血口口服服液液中中陈陈皮皮的的薄薄层层鉴鉴别别即即采采用用二二次次展展开开，先先以以乙乙酸酸乙乙酯酯甲甲醇醇水水吡吡啶啶（100100171713135 5）展展至至3cm3cm，取取出出晾晾干干；再再以以甲甲苯苯乙乙酸酸乙乙酯酯甲甲醇醇水水（202010101 11 1上上层）展至层）展至8cm8cm，取出晾干。，取出晾干。（三）展开 97 展展开开前前一一般般需需用用展展开开剂剂对对展展开开缸缸进进行行预预平平衡衡，即即使使缸缸内内展展开开剂剂气气液液两两相相达达到到动动态态平平衡衡，该该过过程程亦亦称称“饱饱和和”。为为此此可可在在展展开开缸缸内内加加入入适适量量展展开开剂剂，密密闭闭，保保持持15301530分分钟钟。预预平平衡衡后后，迅迅速速将将薄薄层层板板放放入入展展开开缸缸中中，立立即即密密闭闭，展展开开。若若薄薄层层板板需需同同时时预预平平衡衡，可可将将点点样样后后的的薄薄层层板板放放入入双双槽槽展展开开缸缸的的一一侧侧槽槽中中，另另一一侧侧槽槽中中加加入入展展开开剂剂，如如上上法法预预平平衡衡后后，再再将将展展开开剂剂移移入入放放有有薄薄层层板板的的槽槽中中，展展开开。展展开开剂剂要要求求新新鲜鲜配配制制，不不要要多多次次反反复复使使用用。展展开开剂剂配配制制后后若若分分层层，则则应应按按要要求求放