临床实验室的环境与安全防护

临床实验室的环境与安全防护 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海交通大学医学院附属瑞金医院 目的(意义)n n 确保工作任务的完成 (以人为本,和谐社会)相关重要文件n n实验室实验室 生物安全通用要求生物安全通用要求n n 中华人民共和国国中华人民共和国国家标准家标准n n GB GB 19489-200419489-2004n n实验室生物安全手册实验室生物安全手册 n n （WHOWHO）n n 年出版年出版n n 年月再版年月再版n n微生物和生物医学实验室微生物和生物医学实验室生物安全通用准则生物安全通用准则 n n _ _年编年编写写第一节临床实验室的环境与安全管理Environmentn n范畴：n n非生物环境（空气、土壤、水流）n n生物环境（植物、动物、微生物）n n要求：n n 无害（无医源性污染）n n 肃静（允许噪声）n n 整洁（整齐清洁）n n 美观（摆设绿化）一、临床实验室对环境的要求n n1、空间分配合理n n2、运行设计有效n n3、采样设施保证隐私、合理n n4、设计与环境适合所从事的工作n n5、特殊的检测、控制系统建立n n6、进出人员、路径控制n n7、区域整洁、个人防护规章制度n n8、储存空间与条件设计图示废弃物的处理n n要求：专门设置（达标、合理、通畅）n n废弃物包括：n n 污水（先处理后排放）n n 污物（分类、处理、丢弃）n n 废气（通风、排风）n n 放射性废物（埋藏、稀释、衰变）实验室的温湿度n n温度：n n 夏季（1828）n n 冬季（16 20）n n湿度：n n 夏季（30%）n n 冬季（70%）n n*精密仪器：温度（夏26，冬20）n n 湿度（夏冬50%）布局n n门窗（朝向）n n 电源（载量、插座、接线板）n n 仪器（防震、潮、腐蚀、避光）n n墙面n n 地面n n 天花板n n 实验台n n 储物橱（架）BSL-2实验室BSL-3实验室二、临床实验室主要的危害源n n （一）生物源危害n n （二）化学源危害n n （三）物理源危害（一）生物源危害n n1、定义：n n 是指对人类和动物有危害或潜在危害的 n n 传染源。n n2、来源：n n 临床实验室中处理的病人标本（细菌n n 病毒、真菌、寄生虫）（二）化学源危害n n1、含义：n n 临床实验室内的部分化学品具有易燃、n n 可燃、刺激、腐蚀性或剧毒性等危害。n n2、易燃、可燃及自燃等区别n n3、来源：易燃、可燃及自燃n n1 1、按照液体的、按照液体的闪点闪点分级：分级：n n 级（级（2828）n n 级（级（28 28 45 45 ）n n 级（级（46 46 120 120 ）n n 级（级（120 120 ）n n2 2、属于、属于、级级 易燃液体（酒精）易燃液体（酒精）n n 属于属于 、级级可燃液体（润滑油）可燃液体（润滑油）闪点：闪燃的最低温度，闪点越低危险性越大。闪点：闪燃的最低温度，闪点越低危险性越大。n n闪燃（自燃）：n n 易、可燃物质在常温下自发热或没有n n 外界热源的直接作用，由于散热受到n n 阻碍使得温度上升，达到一定温度便n n 自发出现燃烧现象。n n对策：n n 限存量、放置通风（水池下）、加强安n n 意识全 （三）物理源危害n n一、来源：n n1、噪音 n n2、辐射n n3、紫外线n n4、电磁场n n5、其他三、临床实验室的安全与防护n n （一）电气设备n n （二）防火n n （三）水灾和其他自然灾害半自动化学发光免疫分析仪ECLIA-M系列(电气)(设备)全自动化学发光免疫分析仪ECLIA-A系列用电安全n n1、购买电器设备有准入制n n2、安装、使用、维修（资质、操作手册、n n 培训、考核与监督）n n3、电器插座（有地线的双联插座）n n4、电器插座（间距）n n5、保险丝插座板（编号、就近）n n6、定期检查记录制度防火n n现场配备：n n 灭火设备n n 报警装置 n n 疏散路径n n 通道标识n n规章制度：n n 安全实施n n 责任人、培训 常用灭火器的类型与用途n n1 1、二氧化碳灭火器、二氧化碳灭火器n n 二氧化碳压缩于小钢瓶，启阀门喷射二氧化碳压缩于小钢瓶，启阀门喷射n n 最适扑救：易燃液体，最适扑救：易燃液体，600V600V以下带点以下带点n n 设备及宜用水、泡沫或干设备及宜用水、泡沫或干n n 粉灭火而损坏的粉灭火而损坏的n n2 2、泡沫式灭火器、泡沫式灭火器n n 最适扑救：非水溶性易染液体（油等）最适扑救：非水溶性易染液体（油等）n n 和固体（木材、橡胶、纤维）和固体（木材、橡胶、纤维）n n *水溶性可、易燃（醇、醚、有机酸）和带电设水溶性可、易燃（醇、醚、有机酸）和带电设n n 备、仪器等不能用泡沫式灭火器扑救备、仪器等不能用泡沫式灭火器扑救n n3 3、12111211灭火器（卤化物二氟一氯一溴甲烷）灭火器（卤化物二氟一氯一溴甲烷）n n 最适扑救：油类、精密仪器设备、文物、图书等最适扑救：油类、精密仪器设备、文物、图书等其他灾害第二节临床实验室生物污染与生物安全概述n n生物安全防护（biosafety containmentbiosafety containment）n n（定义）：指在实验室环境下处理和n n 保存感染性物质的过程中采用n n 的一系列的防护措施，包括一n n 级防（primary containmentprimary containment）n n 和二级防护（secondary-n n containment containment）。）。n n 概述n n生物安全防护（biosafety containmentbiosafety containment）n n（目的）：是减低或消除潜在危险因子n n 对实验人员、实验室内外环境的n n 污染。n n（要素）：1、实验室操作和技术n n 2、实验室安全设备n n 3、实验室设施设计n n 其中一级防护与二级防护有别一级防护与二级防护的区别n n一级防护：n n 包括规范操作技术与规程，配置适当n n 的安全设备，保护操作人员和室内直n n 接环境免遭感染性物质的污染。n n二级防护：n n 包括合理的实验室设施设计和严格规n n 范的操作流程，用以保护实验室外环n n 境免受感染性物质污染。一、临床实验室生物污染的原因及种类n n原因：致病因子，包括细菌、病毒、真菌n n 寄生虫及其他。n n种类：空气污染、水的污染、人体污染、n n 物体表面的污染。n n 空气污染n n内：n n平面布局、气流方向 合理n n死角区域 缩小n n外：n n直接外排或扩散 高效过滤n n 密闭或压力差水、人体、物体表面污染n n实验过程中产生的大量污水实验过程中产生的大量污水 特殊处理后排放特殊处理后排放n n工作人员实验室感染（接触、吸入）工作人员实验室感染（接触、吸入）专门防护规程专门防护规程n n物体表面污染（溅出、溢出、穿用错误等）物体表面污染（溅出、溢出、穿用错误等）正确实施正确实施 二、临床实验室的生物安全防护n n概述：n n1、目的:(p234 两个确保)n n2、内容:(根据实验室级别)n n3、评估:(实验对象对人或环境的危害性)（一）实验室的分类、分级及适用范围n n分类分类：一般生物：一般生物n n 脊椎动物脊椎动物 一级（一级（BSL-1BSL-1）n n 分级分级：二级（：二级（BSL-2BSL-2）n n 三级（三级（BSL-3BSL-3）n n 四级（四级（BSL-4BSL-4）n n适用范围适用范围：级别不同：级别不同n n 要求不同要求不同n n 适用范围不同适用范围不同n n(biological safety labolatory,BSL)(biological safety labolatory,BSL)分级原则:据所处理的微生物及其毒素的危害程度n n（BSL-1)BSL-1)无无致病作用的微生物。致病作用的微生物。n n（BSL-2BSL-2）具有）具有中等中等潜在危害的微生物。潜在危害的微生物。n n（BSL-3)BSL-3)呼吸传播，使人传染呼吸传播，使人传染严重严重甚至是致病甚至是致病 n n 微生物及其毒素，传播途径明，目前微生物及其毒素，传播途径明，目前n n 已已有疫苗有疫苗。n n(BSL-4)(BSL-4)高度危险性，通过高度危险性，通过气溶胶传播或传播途气溶胶传播或传播途n n 径不明径不明，目前尚，目前尚无无疫苗或治疗方法的致疫苗或治疗方法的致n n 病微生物及其毒素。病微生物及其毒素。不同级实验室的适用范围和设置一级生物安全防护实验室n n1、适用于：n n 用于教学的普通微生物实验室n n2、要求：n n 无须使用生物安全柜二级生物安全防护实验室（BSL-2）1、适用于：(1)含漱液、血清和血液等样品的诊断检测(2)溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/或无传染性病毒基因片段(3）常规的细菌和毒素检测(4）能产生气溶胶的样品处理(5）临床样品的包装、分装(6）离心管和离心机转头的封闭与开启二级生物安全防护实验室（BSL-2）2、特殊情况:（1）致病微生物气溶胶或溅出的操作（2）处理高浓度或大容量感染性材料3、要求：在生物安全柜或物理抑制设备中进行，并使 用个体防护设备。三级生物安全防护实验室三级生物安全防护实验室（BSL-3）或相当于P3实验室1、适用于：主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至 是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽 流感），通常已（可）有预防传染的疫 苗。艾滋病病毒的研究（血清学实验除 外）2、要求：在三级生物安全防护实验室中进行。BSL-2（P2）BSL-3（P3）BSL 4 戏称为魔鬼实验室分五个区有10道门洁净台/生物安全柜(BSCs)洁净工作台n n1、环境空气工作台过滤样本直接n n 吹向操作者排入室内n n2、保护产品，不保护操作人员及操作环境n n 米的颗粒，过滤效率99.9%无医院药房n n 或无菌设备的组装。生物安全柜n n1、环境空气进入工作台过滤样本n n 高效过滤排入室内或室外n n2、经过样本的空气及排放出的空气均经过n n 滤，对直径大于0.3微米的颗粒，超高n n 效过滤器的过滤效率为99.999%。n n3、采用负压装置，形成气幕防护屏障，保n n 护操作人员安全应用于有一定生物危险n n 的操作。洁净工作台洁净工作台生物安全柜生物安全柜n n1、环境空气（流动/排出方式）n n2、使用目的（产品、操作人、环境）n n3、空气滤过能力n n4、气幕屏障n n5、应用生物安全柜工作原理n n n n 1.物理屏障n n 2.高效过滤 n n 3.空气屏障n n 4.定向层流生物安全柜生物安全柜 的分型的分型n nCLASS级生物安全柜n nCLASS级生物安全柜：n n 1、CLASSTAPY A型n n 2、CLASSTAPY B1型 n n 3、CLASSTAPY B2型n n 4、CLASSTAPY B3型n nCLASS级生物安全柜I级生物安全柜n n保护操作者和操作环保护操作者和操作环境。境。n n样品没有得到保护。样品没有得到保护。n n通过样品区的空气，通过样品区的空气，经高效过滤器的过滤经高效过滤器的过滤之后，之后，100%100%地排放到地排放到实验室环境中。实验室环境中。II 级生物安全柜级生物安全柜 A型型(B3)30%外排进入环境30%外界空气补充70%经过滤后循环使用II 级生物安全柜级生物安全柜 B1型型70%70%外排进入环境外排进入环境70%70%外界空气补充外界空气补充30%30%过滤后循环使用过滤后循环使用 II 级生物安全柜级生物安全柜 B2型型n n100%100%100%100%外排进入环境外排进入环境n n100%100%100%100%外界空气补充外界空气补充n n无循环使用的气流无循环使用的气流无循环使用的气流无循环使用的气流III级生物安全柜级生物安全柜n n样品、操作者、操作样品、操作者、操作环境都得到保护（环境都得到保护（操操作时戴全密封手套作时戴全密封手套）n n100%100%外排进入环境外排进入环境n n100%100%外界空气补充外界空气补充n n无循环使用的气流无循环使用的气流n n(二)实验室生物安全的个人防护一级生物安全防护实验室n n无须使用生物安全柜和专用特殊设备等。n n应穿工作服，手上有皮肤破损戴手套。n n操作中可能有危险物溅出应有适当防护。二级生物安全防护实验室n n（1 1）可能产生病菌气溶胶、溅出的用生物安全柜）可能产生病菌气溶胶、溅出的用生物安全柜n n（2 2）当操作不能在安全柜内进行，必须外部操作）当操作不能在安全柜内进行，必须外部操作n n 时，必须使用面部保护（护目镜、面罩、个体呼时，必须使用面部保护（护目镜、面罩、个体呼n n 吸保护用品或其他防溅出保护设备）。吸保护用品或其他防溅出保护设备）。n n（3 3）应穿工作服或罩衫，离开时，不得穿着外）应穿工作服或罩衫，离开时，不得穿着外 n n 出，应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢出，应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢 弃。弃。n n（4 4）当手可能接触感染材料，应戴手套。如可能）当手可能接触感染材料，应戴手套。如可能n n 发生溢出或溅出，应戴两副手套，一次性手套不发生溢出或溅出，应戴两副手套，一次性手套不n n 得清洗和再次使用。得清洗和再次使用。三级生物安全防护实验室n n（1 1）必须必须安装安装级或以上生物安全柜，感级或以上生物安全柜，感n n染性材料的操作应在生物安全柜中进行。染性材料的操作应在生物安全柜中进行。n n（2 2）当操作）当操作不得不不得不在柜外进行时，必须个在柜外进行时，必须个n n体防护与使用物理抑制设备综合防护措施体防护与使用物理抑制设备综合防护措施n n（3 3）在进行感染性组织培养、有可能产生）在进行感染性组织培养、有可能产生n n感染性气溶胶的操作时，必须使用个体防感染性气溶胶的操作时，必须使用个体防n n护设备（如呼吸保护装置等）。护设备（如呼吸保护装置等）。n n（4 4）入室工作前）入室工作前/后有专用更衣室，室内后有专用更衣室，室内有必备品（消毒剂、冲洗液、药品等）。有必备品（消毒剂、冲洗液、药品等）。四级生物安全防护实验室n n1、在级生物安全柜中进行操作。n n2、入室必须换上全套实验室服装。n n3、实验室必备的配套装置与装备。(三)实验室设计和建造的特殊要求n n（1）选址n n（2）选材n n（3）布局设计n n（4）内部设施（1）选址n nBSL-1：有门能与外界隔开n nBSL-2：应远离公共场所n nBSL-3：单独隔离区域或独立建筑n nBSL-4：特殊工程（2）选材n n1、使用坚固器材n n2、便于清洗，防滑，无缝隙，防水、耐n n 热、耐消毒剂及相应的化学用品等。n n3、密封性能好。（3）布局设计n n1、合理n n2、大型设备固定、有空间n n3、生物安全柜安装无碍实验室的通、排风n n4、有光线，避免反光、闪光等（4）内部设施n nBSL-1：洗手池（近出口），移液器。n nBSL-2：洗手池（肘动），消毒设施，生n n 物安全柜。n nBSL-3：还需设置缓冲区，密封，独立的n n 管道化排气系统，“洁”至“污”的气n n 流流向，级生物安全柜（套）。n nBSL-4:专门设施(四)临床实验室安全操作规程n n1、每个实验室必须制定n n2、不同等级，不同要求n nBSL-1：采用标准的微生物操作规程n nBSL-2：还需特殊安全操作规程n nBSL-3：同上有进一步要求n nBSL-4：略标准的微生物操作规程n n1 1、准入制、准入制n n2 2、工作区禁止事项（饮、吸、化妆等）、工作区禁止事项（饮、吸、化妆等）n n3 3、手、手n n4 4、禁止口吸、禁止口吸n n5 5、实验室的整洁与消毒（台、地面等）、实验室的整洁与消毒（台、地面等）n n6 6、培养、储存及废弃物的指定处置、培养、储存及废弃物的指定处置n n7 7、锐器使用的安全性、锐器使用的安全性n n8 8、意外事故紧急预案、意外事故紧急预案n n9 9、标志醒目、标志醒目n n1010、控制昆虫、啮齿类动物的措施、控制昆虫、啮齿类动物的措施特殊安全操作规程n n1、实验室门、窗n n2、实验室负责人的最终责任确认n n3、入室人员的限制、培训、体检与预防n n4、对污染锐器的使用规定n n5、实验产生污染性废弃物处置规定n n6、器材、设备污染处理，维修？维护？n n7、偶然事件的应急预案n n8、监测系统的运作三、微生物实验室生物安全防护n n1、临床微生物实验室中引起实验室获得性n n 感染的微生物种类n n细菌：布鲁菌、铜绿、结核、肠道致病菌等细菌：布鲁菌、铜绿、结核、肠道致病菌等n n病毒：经血、呼吸道传播的病毒，其他病毒病毒：经血、呼吸道传播的病毒，其他病毒n n真菌：二相真菌、孢子菌等真菌：二相真菌、孢子菌等n n其他：衣原体、钩端螺旋体等其他：衣原体、钩端螺旋体等n n寄生虫：弓形体、疟原虫、血吸虫等寄生虫：弓形体、疟原虫、血吸虫等三、微生物实验室生物安全防护n n2、引起微生物实验室中工作人员发生实验n n 室获得性感染的途径n n经空气传播：吸入（气溶胶、实验物）经空气传播：吸入（气溶胶、实验物）n n经口传播：经口传播：“手手口口”，食入，食入n n直接接种：针刺、划伤或咬伤直接接种：针刺、划伤或咬伤n n黏膜接触黏膜接触：（眼结膜）：（眼结膜）n n节肢动物媒介：蚊、蜱、跳蚤等节肢动物媒介：蚊、蜱、跳蚤等三、微生物实验室生物安全防护n n3、临床微生物实验室中引起微生物感染机n n 体的方式n n接触损伤皮肤和黏膜：n n吸入：n n食入：n n接触感染动物：（见教材p250）三、微生物实验室生物安全防护n n4、微生物实验室中病原微生物危险度评价 n n 依据n n对人或动物毒性的强弱：对人或动物毒性的强弱：n n特定病原体是否存在国内：特定病原体是否存在国内：n n引发临床症状轻重、病程长短、预后情况：引发临床症状轻重、病程长短、预后情况：n n潜伏、慢性、不典型难诊断，无法预防潜伏、慢性、不典型难诊断，无法预防三、微生物实验室生物安全防护n n5、微生物实验室中病原微生物危险度分类n n 标准n n级危险：个体级危险：个体/群体极大危害群体极大危害n n级危险：个体极大危害级危险：个体极大危害/群体极小群体极小n n级危险：个体中度危害级危险：个体中度危害/群体较小群体较小n n级危险：个体级危险：个体/群体没有或极小群体没有或极小三、微生物实验室生物安全防护n n6、微生物实验室操作的生物安全保障措施n n工作人员的培训与教育工作人员的培训与教育n n工作人员的安全教育工作人员的安全教育n n微生物实验室操作流程的指定与实施：微生物实验室操作流程的指定与实施：n n（样本收集、运输，接种，混匀，研磨，移液，（样本收集、运输，接种，混匀，研磨，移液，n n开封，离心，注射，搬运，锐利器材使用等）开封，离心，注射，搬运，锐利器材使用等）三、微生物实验室生物安全防护n n7、微生物实验室消毒措施n n功能区域划分不同，采用措施不同。功能区域划分不同，采用措施不同。消毒区域（空气、地面、物体表面、手等）消毒区域（空气、地面、物体表面、手等）消毒方式（照射、消毒剂、洗涤等）消毒方式（照射、消毒剂、洗涤等）意外事件意外事件 三、微生物实验室生物安全防护n n8、微生物实验室废弃物及处理措施n n属于感染性废弃物：被废弃的各种标本属于感染性废弃物：被废弃的各种标本 被标本污染的物品和容器被标本污染的物品和容器 实验毕的所有消耗品实验毕的所有消耗品 处置方法：灭菌和焚烧处置方法：灭菌和焚烧 实施注意点：回收物应先消毒后清洗实施注意点：回收物应先消毒后清洗 三、微生物实验室生物安全防护n n9、应急措施n n常备药品，特殊备用药品等常备药品，特殊备用药品等n n10、微生物实验室的“常规预防措施”n n11、微生物实验室的菌种分类与保存n n菌种引发实验室感染的机会、严重性等分四类菌种引发实验室感染的机会、严重性等分四类n n菌种保存必须规范（责任制）菌种保存必须规范（责任制）四、临床实验室的消毒与灭菌n n 消毒灭菌方法：热力灭菌n n 物理 辐射消毒n n 超声消毒n n 滤过除菌n n 干燥或低温抑菌n n 化学 消毒n n 防腐 n n 手卫生n n目的：n n 控制医院性感染的最重要n n 最简便易行 的措施n n 之一。n n （包括保护个人自己）手卫生n n依据：n n 常居菌的存在（大部分人体皮肤上能n n分离到的，如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状n n杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌属及某些肠n n道细菌族成员等），固有，不易被机械性n n的摩擦清除。手卫生n n暂居菌的存在（接触病人或被污染的物体n n表面时获得）。如果没有通过肥皂和水的n n冲洗和机械摩擦或者用消毒手刷将其破坏n n，它可随时通过手传播。手卫生n n种类：n n 洗手（handwashing）n n 手消毒（hand antisepsis）n n 外科手消毒n n （surgical hand antisepsis）手卫生n n设施：设施：n n 1 1、流动水、非手触式龙头开关、流动水、非手触式龙头开关n n 2 2、洗手清洁剂、洗手清洁剂普通皂普通皂/液液n n （plain soap and detergent plain soap and detergent ）n n 抗菌皂抗菌皂n n （antimicrobial soapantimicrobial soap）n n 手消毒剂手消毒剂n n （hand disinfectorhand disinfector）n n 3 3、干手设施（纸巾、干手器、专用毛巾）、干手设施（纸巾、干手器、专用毛巾）手卫生n n洗手指征：直接接触病人前后 无菌操作前后 穿脱工作服等前后 再进入清洁区前 接触特殊易感病人前后 接触或处理病人的血液、体液、分泌物后 等等 手卫生n n方法：n n1、掌心对掌心n n2、手指交叉掌心对手背n n3、换一手后操作同上n n4、两手互握互搓指背n n5、拇指在掌中转动摩擦n n6、指尖聚掌心中摩擦手卫生n n标准：（检出细菌菌落数）n n类区域和类区域 5cfu/cm2n n类区域 10cfu/cm2n n类区域 15cfu/cm2n n各区域工作的医务人员的手均不能检出致病性微生物。手卫生n n监测方法：n n 取样（30cm2/手）n n 培养剂（中和、营养）n n 培养方法、条件、时间n n 结果判定手卫生n n其他其他：（手套的使用与要求）（手套的使用与要求）n n 1 1、种类、种类 清洁手套清洁手套n n 无菌手套无菌手套n n 2 2、要求、要求 手术、护理特殊病人或入手术、护理特殊病人或入n n 体腔的操作（无菌手套）；体腔的操作（无菌手套）；n n 手可能被污染时（清洁手套）手可能被污染时（清洁手套）n n*手套不能代替洗手手套不能代替洗手n n 带手套只能接触可能污染物品带手套只能接触可能污染物品n n 脱手套后要洗手脱手套后要洗手