药物分析生化药物分析

会计学1药物分析生化药物分析药物分析生化药物分析一、概述一、概述1.生物药物生物药物biopharmaceuticals 利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物 分类没有分类没有严格的界严格的界限限 主要包括：生化药物 生物制品 （生物技术药物）第1页/共21页2.生化药物生化药物 biochemical drugs 生命基本物质及其衍生物等动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生化药物氨基酸、Pr类酶、辅酶类多糖类脂类 核酸类 人纤维蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸鹅脱氧胆酸、谷固醇第2页/共21页3.3.生物制品生物制品生物制品生物制品 biological products biological products 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品分类：菌苗、疫苗、类毒素菌苗、疫苗、类毒素免疫血清免疫血清诊断制品诊断制品其他（包括血液制品、组织制品其他（包括血液制品、组织制品等）等）自动免疫制品自动免疫制品 第3页/共21页4.基因工程药物基因工程药物 biotechnology drugs 利用重组DNA等生物技术生产的药物发现并确定有治疗作用的Pr分离或合成控制该Pr合成的基因将该基因导入受体细胞受体细胞表达该Pr分离纯化基因工程药物第4页/共21页胰脏胰脏(A)n胰岛素原胰岛素原mRNAcDNA重组质粒重组质粒转化细菌转化细菌mRNA反转录酶反转录酶胰岛素原基因胰岛素原基因与质粒与质粒连接连接感染感染E.coli胰岛素原胰岛素原重组胰岛素原的合成第5页/共21页基因工程药物主要类别基因工程药物主要类别基因工程药物主要类别基因工程药物主要类别蛋白质多肽类：激素类及神经递质类细胞因子类酶及凝血因子类核酸类：反义寡核苷酸等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin）干扰素（Human Interferons）链激酶（Streptokinase）第6页/共21页5.生化药物和基因工程药物特点生化药物和基因工程药物特点1 1）共同特点：）共同特点：活性强，毒副作用小活性强，毒副作用小2 2）分子量大，结构确证难）分子量大，结构确证难3 3）全过程全过程的质量控制：从原料、菌种到生的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品产设备、中间体、产品5 5）生物活性检查）生物活性检查6 6）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性检查、外源性DNADNA残留量、宿主菌蛋白残留量、宿主菌蛋白残留量等残留量等 7 7）效价（含量）测定）效价（含量）测定第7页/共21页二、检验的程序和方法二、检验的程序和方法收录于收录于中国药典中国药典和和中国生中国生物制品规程物制品规程程序和方法包括：鉴别、杂质检查、安全性检查、含量（效价）测定第8页/共21页1.1.鉴别鉴别1）理化鉴别法：UV、肽图等反应序列信息反应序列信息RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽1（736）肽图谱药物分析杂志2005，25(1)24-26标准品样品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30个氨基酸组成，结构中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu第9页/共21页2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等3）生物鉴别法：动物试验等专属性强，应用广泛专属性强，应用广泛免疫双扩散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k第10页/共21页2.杂质检查杂质检查1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等2）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter，HPGFC）、RP-HPLC 萄聚糖凝胶立体网状结构图第11页/共21页标准蛋白色谱图标准蛋白色谱图时间(min)04812165432 1.1.右旋糖酐蓝右旋糖酐蓝2.2.醛缩酶醛缩酶3.3.血清白蛋白血清白蛋白4.4.碳碳酸酐酶酸酐酶5.5.抑蛋白酶肽抑蛋白酶肽6.6.酪氨酸酪氨酸第12页/共21页 重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAILrhTRAIL）质控方法和质量标准的研究）质控方法和质量标准的研究 药物分析杂志药物分析杂志20052005，2525（3 3）253-257253-257 Synmetry 300 C18 Synmetry 300 C18柱（柱（3.9150mm3.9150mm）第13页/共21页3.安全性检查安全性检查1）热原检查 家兔法、鲎试剂法2）降压物质检查3）过敏试验4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验5）无菌试验6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留 ELISA法第14页/共21页1）理化分析法：重量法、滴定法、电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法）4.4.含量（效价）测定含量（效价）测定例：蛋白质含量测定（ChP2005三部）凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法第15页/共21页2）生化分析法vv 酶法：vv免疫分析法酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 第16页/共21页3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg）第17页/共21页例：冻干基因工程例：冻干基因工程例：冻干基因工程例：冻干基因工程1b1b干扰素制造及检定规程干扰素制造及检定规程干扰素制造及检定规程干扰素制造及检定规程 本品系用从健康人白细胞中获得的本品系用从健康人白细胞中获得的1b1b干扰干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人1b1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。主要包括以下内容：1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期12 冻干基因工程1b干扰素使用说明书第18页/共21页检查：检查：纯度：1电泳纯度2高效液相色谱纯度pH值水分鉴别：鉴别：分子量测定肽图测定等电聚集紫外光谱扫描外观半成品和成品的检验项目包括：第19页/共21页安全性检查：安全性检查：安全性检查：安全性检查：残余外源性残余外源性DNADNA含量含量残余残余IgGIgG含量含量残余工程菌蛋白含量残余工程菌蛋白含量抗生素活性抗生素活性无菌试验无菌试验热原质试验热原质试验异常毒性异常毒性含量：含量：效价测定：细胞病变抑制法蛋白含量比活性第20页/共21页