荔枝果肉过氧化物酶提取与初步纯化

会计学1荔枝果肉过氧化物酶提取与初步纯化荔枝果肉过氧化物酶提取与初步纯化研究内容研究内容n n该试验对荔枝果肉多酚氧化酶的提取和初步纯化进行研究，以便对果肉POD的性质作进一步研究，拟为解决荔枝深加工中酶促褐变问题提供理论。第1页/共10页POD活性测定方法活性测定方法 n参照陈贻竹和王以柔的方法，并稍作修改。POD测定系统为3 mL，其中含2.4mL磷酸缓冲液(pH70)、01 mL 1过氧化氢、04mL 1愈创木酚。加入01 mL酶液后启动反应，于波长470 nm和室温下记录2 min 内OD值的变化。一个酶单位(u)定义为在测定条件下每分钟引起的光密度改变0001所需的酶量。第2页/共10页不同品种荔枝果肉过氧化物酶不同品种荔枝果肉过氧化物酶(POD)的活力的活力 n n荔枝品种间酶活性差异显著，从47U/gmin1428U/gmin之间。其中青荔的POD活力最高，玉荷包最低。第3页/共10页提取时间对提取时间对POD酶活的影响酶活的影响n n在提取时间10min的时间内，酶活仅为763 UmL，随着提取时间的延长，POD酶活有所提高，当提取时间延长至30 rain时，酶活增加到l 177 UmL。随着浸提时间的进一步的延长，POD酶活几乎保持不变。第4页/共10页提取液离子浓度对提取液离子浓度对POD酶活的影响酶活的影响 n n随着离子浓度的逐步增加，随着离子浓度的逐步增加，提取液酶活不断增大；当提取液酶活不断增大；当提取液离子浓度增加到提取液离子浓度增加到0.3mol/L0.3mol/L时，提取液酶活达时，提取液酶活达到最大值：而随着离子浓到最大值：而随着离子浓度的进一步增大，酶活则度的进一步增大，酶活则呈下降趋势。当提取液为呈下降趋势。当提取液为蒸馏水（离子浓度为蒸馏水（离子浓度为0 0）时，）时，提取液酶活最低。一般情提取液酶活最低。一般情况提取酶活时应选用合适况提取酶活时应选用合适的缓冲液体系。的缓冲液体系。第5页/共10页提取液提取液pH值对值对POD酶活的影响酶活的影响 n n当提取液当提取液pHpH值分别为值分别为5 5和和7 7的时候，提取酶活都达的时候，提取酶活都达到峰值。由到峰值。由PODPOD的酶学性的酶学性质可知，质可知，pHpH值值5 5是是PODPOD的的最适反应最适反应pHpH。这可能是。这可能是造成提取液造成提取液pHpH为为5 5时，提时，提取酶活也比较大的原因之取酶活也比较大的原因之一。但由于一。但由于PODPOD在在pHpH为为5 5时，酶活稳定性不高，因时，酶活稳定性不高，因此选用此选用pH7pH7为提取液最佳为提取液最佳pHpH值。值。第6页/共10页提取液料液比对提取液料液比对POD酶活的影响酶活的影响n n 随着料液比的不断增加，提取液酶随着料液比的不断增加，提取液酶活不断增大。活不断增大。这主要是因为料液比这主要是因为料液比不断增加时，不断增加时，PODPOD酶充分溶出，酶酶充分溶出，酶活增大；另一方面，料液比的增大活增大；另一方面，料液比的增大也使也使PODPOD酶液稀释，酶活有所降低。酶液稀释，酶活有所降低。当料液比为当料液比为l l：15(g15(g：mL)mL)时，酶活时，酶活达到较大值，而随着料液比的继续达到较大值，而随着料液比的继续增大，酶活变化差异不显著。增大，酶活变化差异不显著。第7页/共10页提取最佳条件提取最佳条件n n1)1)用丙酮粉法缓冲液提取过氧化物酶，用丙酮粉法缓冲液提取过氧化物酶，PODPOD酶活的最佳提取时间酶活的最佳提取时间为为30 min30 min，当提取液离子浓度为，当提取液离子浓度为0 03 mol3 molL L，PODPOD酶活最高；酶活最高；提取液的最佳提取提取液的最佳提取pHpH为为7 7；最适料液比为；最适料液比为1 1：15(g15(g：mL)mL)。n n2)2)在在1616个被测荔枝品种中，白糖罂的多酚氧化酶活力最强，为个被测荔枝品种中，白糖罂的多酚氧化酶活力最强，为112 112 U Ug g minmin，而玉荷包最弱，仅为，而玉荷包最弱，仅为 6U6Ug g minmin清荔的过氧化物酶活清荔的过氧化物酶活力最强，为力最强，为1 542U1 542Ug g minmin，同样也是玉荷包的过氧化物酶活力最，同样也是玉荷包的过氧化物酶活力最弱。弱。第8页/共10页谢谢观看谢谢观看第9页/共10页