核酸扩增检测实验室设计及工作流

核 酸 扩 增 检 测 实 验 室 设 计及 工 作 流 程李 金 明 卫 生 部 临 床 检 验 中 心 核 酸 扩 增 检 测 实 验 室 的 设 计l依 据 ： 卫 生 部 颁 发 的 临 床 基 因 扩增 检 验 实 验 室 管 理 暂 行 办 法 （ 卫医 发 200210号 ） 血 液 标 本 的 接 收 l 通 常 的 工 作 流 程 ： 标 本 采 集 血 清 分 离 编 号 保 存 或 检 测l 应 在 四 个 测 定 区 域 之 外 的 地 方 或 区 域 内 接收 l 接 收 的 标 本 应 收 集 在 原 始 容 器 中l 在 核 酸 提 取 时 带 入 至 标 本 制 备 区 标 本 的 接 收 区 的 仪 器 设 备 要 求l 如 果 在 标 本 接 收 区 分 离 血 清 （ 浆 ） 标 本 ， 有 1台 分 离 血 清 （ 浆 ） 用 离 心 机 、 1台 生 物 安 全 柜 、1台 冰 箱 、 加 样 器 及 相 应 一 次 性 经 高 压 处 理 的消 耗 品 如 带 滤 芯 吸 头 、 标 本 接 收 编 号 记 录 本 以及 记 号 笔 等 即 可 。l 如 果 不 在 标 本 接 收 区 分 离 血 清 （ 浆 ） 标 本 ， 只是 简 单 的 接 收 ， 则 就 不 需 要 分 离 血 清 （ 浆 ） 用离 心 机 、 生 物 安 全 柜 、 加 样 器 及 其 消 耗 品 。 理 想 的 核 酸 扩 增 实 验 室 设 计 A产 物 分 析 区空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向缓 冲 间 缓 冲 间 缓 冲 间 专 用 走 廊 工 作 流 向扩 增 区 标 本 制 备 区 试 剂 准 备 区 产 物 分 析 区空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向缓 冲 间 缓 冲 间 缓 冲 间专 用 走 廊 工 作 流 向扩 增 区 标 本 制 备 区 试 剂 准 备 区理 想 的 核 酸 扩 增 实 验 室 设 计 B 核 酸 扩 增 检 测 实 验 室 设 计 的 一 般 原 则l 各 区 独 立l 注 意 风 向l 因 地 制 宜l 方 便 工 作 “ 十 六 字 口 诀 ” 门 试 剂 准 备 区标 本 制 备 区扩 增 区产 物 分 析 区 外 走 廊 门 门门 门 试 剂 准 备 区标 本 制 备 区扩 增 及 产 物分 析 区 外 走 廊 门 门门门AB 试 剂 准 备 区标 本 制 备 区 扩 增 及 产物 分 析 区门 门门 门空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向 走 廊 走 廊试 剂 准 备 区标 本 制 备 区扩 增 和 产物 分 析 区 空 气 流 向空 气 流 向空 气 流 向 其 他 实 验 室其 他 实 验 室 其 他 实 验 室其 他 实 验 室 其 他 实 验 室 其 他 实 验 室 其 他 实 验 室 门试 剂 准 备 区 标 本 制 备 区 扩 增 及 产物 分 析 区门门 门空 气 流 向 空 气 流 向 + 空 气 流 向 + 走 廊 走 廊试 剂 准 备区标 本 制 备区扩 增 和 产物 分 析 区 空 气 流 向空 气 流 向 +空 气 流 向 + 其 他 实 验 室其 他 实 验 室 其 他 实 验 室其 他 实 验 室 其 他 实 验 室 其 他 实 验 室 其 他 实 验 室空 气 流 向 产 物 分 析 区空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向 空 气 流 向缓 冲 间 缓 冲 间 缓 冲 间专 用 走 廊 工 作 流 向扩 增 区 标 本 制 备 区 试 剂 准 备 区传 递 窗 传 递 窗 传 递 窗 关 于 “ 区 域 ” 合 并l 如 使 用 扩 增 和 产 物 分 析 同 时 完 成 的 实 时 荧 光PCR仪 进 行 核 酸 扩 增 检 测 ， 扩 增 区 和 产 物 分 析区 可 以 合 并 。l 如 使 用 核 酸 提 取 、 扩 增 及 产 物 分 析 等 均 在 一 台仪 器 上 完 成 的 全 自 动 核 酸 检 测 分 析 仪 ， 标 本 制备 区 、 扩 增 区 和 产 物 分 析 区 可 合 并 。 无 “ 基 因 ” 或 “ 核 酸 ” 概 念 的 重 要 性 符 合 基 本 要 求 的 核 酸 扩 增 检 测 实 验 室 的 条 件l （ 1） 试 剂 准 备 区 、 标 本 制 备 区 和 扩 增 及 产 物 分 析 区 等 三个 或 四 个 区 域 在 物 理 空 间 上 ， 必 须 是 完 全 相 互 独 立 的 ， 各区 域 无 论 是 在 空 间 还 是 在 使 用 中 ， 应 始 终 处 于 完 全 的 分 隔状 态 ， 不 能 有 空 气 的 直 接 相 通 。l （ 2） 各 区 的 可 移 动 的 仪 器 设 备 及 各 种 物 品 包 括 实 验 记 录本 、 记 号 笔 、 试 管 架 及 清 洁 用 具 等 必 须 专 用 。l （ 3） 应 在 标 本 制 备 区 、 扩 增 及 产 物 分 析 区 等 相 对 有 可 能出 现 “污 染 物 ”的 区 域 安 装 排 风 扇 或 其 它 排 风 和 有 效 的 装 置 ，以 使 空 气 按 试 剂 准 备 区 标 本 制 备 区 扩 增 （ 及 产 物 分 析 ）区 方 向 流 动 。 核 酸 扩 增 实 验 室 的 工 作 流 程试 剂 准 备 区标 本 制 备 区扩 增 区 及 扩 增 产 物 分 析 区 试 剂 准 备 区l 核 酸 扩 增 实 验 室 中 最 为 “ 洁 净 ” 的 区 域 ， 不 应 有 任 何 核 酸的 存 在 ， 包 括 试 剂 中 所 带 的 标 准 品 和 阳 性 对 照 。l 所 有 实 验 用 洁 净 物 品 如 离 心 管 、 吸 头 等 的 存 放 和 准 备 处 。l 商 品 试 剂 盒 ： 75%乙 醇 、 焦 碳 酸 二 乙 酯 （ DEPC） 处 理 水 、有 机 溶 剂 等 可 能 需 要 自 配l 自 制 试 剂 ： 一 次 较 大 量 配 制 ， 然 后 分 装 成 小 瓶 保 存 ， 每 次检 测 时 ， 取 出 一 小 瓶 使 用 ， 未 用 完 的 即 弃 掉 ， 不 再 使 用 。l 仪 器 设 备 主 要 有 加 样 器 、 天 平 、 离 心 机 和 冰 箱 等 ， 最 好 配备 超 净 工 作 台 。 标 本 制 备 区l 仪 器 设 备 主 要 有 混 样 设 备 、 核 酸 提 取 仪 、 生 物 安全 柜 、 加 样 器 、 高 速 台 式 （ 冷 冻 ） 离 心 机 、 加 热模 块 或 水 浴 箱 、 冰 箱 等 。 生 物 安 全 柜 不 应 放 在 实验 室 门 口 等 易 受 人 员 走 动 影 响 的 地 方 ， 也 不 应 直对 分 体 式 空 调 。l 主 要 是 用 于 血 液 样 本 的 混 样 、 核 酸 样 本 的 提 取 。l 加 样 器 吸 头 必 须 带 滤 芯 。l 使 用 加 热 模 块 时 ， 如 在 模 块 孔 中 填 入 二 氧 化 硅 细砂 ， 然 后 将 标 本 管 置 于 细 砂 中 温 育 ， 可 得 到 较 为一 致 的 温 育 温 度 。 扩 增 及 产 物 分 析 区l 扩 增 反 应 体 系 的 配 制 和 提 取 核 酸 的 加 入 ， 可 在 标 本 制 备 区也 可 在 本 区 内 进 行 ， 关 键 是 要 防 止 产 物 的 污 染 。 如 果 空 间允 许 的 话 ， 也 可 在 一 个 独 立 的 区 域 内 进 行 。l 加 样 时 ， 先 加 提 取 的 核 酸 模 板 样 本 ， 每 加 完 一 个 即 盖 好 盖子 ， 然 后 加 阳 性 质 控 核 酸 模 板 ， 再 就 是 标 本 制 备 阴 性 质 控和 仅 含 按 样 本 一 样 稀 释 的 主 反 应 混 合 液 的 扩 增 阴 性 质 控 ，这 样 做 的 目 的 是 ， 最 大 可 能 地 测 出 以 前 扩 增 产 物 的 交 叉 污染 。 扩 增 及 产 物 分 析 区l 热 循 环 仪 的 电 源 应 专 用 ， 并 配 备 一 个不 间 断 电 源 （ UPS） 或 稳 压 电 源 。l 每 次 扩 增 后 ， 可 使 用 可 移 动 紫 外 灯 对扩 增 热 循 环 仪 进 行 照 射 。l 扩 增 仪 应 定 期 进 行 校 准 。 谢 谢 ！