肿痛安胶囊中各药材提取物的体外抗菌活性探析

肿痛安胶囊中各药材提取物的体外抗菌活性探析肿痛安是华佗始创明方玉真散，现有的胶囊剂是在原方的基础上通过重新组方而成，其中的主要成分有白附子(制)、防风、羌活、三七、天麻、僵蚕、天南星(制)、白芷。肿痛安胶囊口服后具有祛风化痰、行瘀散结和消肿定痛的作用，临床主要用于风痰瘀阻引起的牙痛、咽喉肿痛、口腔溃疡，及风痰瘀血阻络引起的痹病，症见关节肿胀疼痛、筋脉拘挛、屈伸不利，另外，在口腔及耳鼻喉疾病和破伤风的辅助治疗等疾病的治疗上，肿痛安胶囊也取得了显着的较好的疗效。相关研究显示，肿痛安组方中僵蚕、羌活对金葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌均有抑制作用1，2;白附子、防风对葡萄球菌和链球菌也表现出抗菌活性。为考察肿痛安的体外抗菌作用，本文就肿痛安提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的体外抗菌活性进行了研究，以期为临床应用提供参考和依据。目前肿痛安胶囊以药材全粉入药，因此，考察肿痛安胶囊中各药材的提取物的体外抗菌活性，对揭示该产品的作用机理以及新剂型开发具有一定意义。1仪器与材料1.1仪器与设备多点接种仪:A400，英国苏赛克斯。生物安全柜:HFsafe-1500，力康发展有限公司。生化培养箱:LRH-250A-，韶关市泰宏医疗器械有限公司。立式灭菌器:LMQ.J，山东新华医疗器械股份有限公司。1.2材料1.2.1肿痛安胶囊提取物:河北奥星集团药业有限公司提供，每毫升含生药1g，批号:20130501、20130502。1.2.2培养基:M-H肉汤，批号:20110725;M-H琼脂，批号:20110301，北京双旋微生物培养基制品厂。1.2.3受试菌:临床分离致病菌，共计165株，分别为MSSA51株、MRSA50株、MSSE33株、MRSE31株，河北省某三甲医院提供。1.2.4阳性对照药:万古霉素，批号为037K0686，Sigma公司。1.2.5质控菌:金黄色葡萄球菌ATCC29213，中国食品药品检定研究院。1.3方法1.3.1肿痛安胶囊水提物的制备:取三七、天麻、僵蚕、白附子(制)、防风、羌活、天南星(制)、白芷八味药材净选后粉碎，过60目筛。取上述药粉100g，用15倍量的水超声1h后浸泡12h，过滤，上清液于50减压浓缩至每毫升相当于1g药材，将棕黑色浓缩液灌装于10ml安瓿瓶中并于12130min灭菌。1.3.2肿痛安提取物的最低抑菌浓度确定:采用琼脂二倍稀释法测定肿痛安提取物对受试菌的最低抑菌浓度(MIC)。将培养1618h的受试菌和质控菌调整至0.5麦氏单位浊度后再做10倍稀释。转接至接种盘内，用多点接种仪将菌液接种到含肿痛安提取物分别为50、25、12.5、6.25、3.12、1.56mg/ml的M-H培养基上，同时将菌液接种到含有万古霉素为4、2、1、0.5、0.25g/ml的M-H培养基上，接菌量约为104CFU/点。在3335条件下培养1618h，以能够完全抑制细菌生长的肿痛安提取物的最低浓度为最低抑菌浓度(MIC)。2结果万古霉素对质控菌ATCC29213的MIC为12g/ml，均在CISL规定的质控范围5内，实验系统成立。批号为20130501、20130502的肿痛安提取物对质控菌和123株临床分离菌的MIC测定结果。3讨论中草药在体外对多种病原微生物具有抑制或杀灭作用6，早在20世纪30至40年代，我国就开始进行中药体外抗菌作用的研究，并证明了一大批中药对各种细菌有抗菌作用7。羌活水煎剂对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑制作用8，羌活油对金黄色葡萄球菌、痢疾、大肠、绿脓杆菌有明显抑制作用2，羌活中的发卡二醇，具有显着的抗金葡菌的活性9。白芷与当归水煎提取物，对金葡菌和大肠杆菌具有杀菌作用10。防风水煎剂对金葡菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌及产黄青霉菌、杂色曲菌均有抑制作用4。白附子对表皮葡萄球菌、克雷伯氏菌、化脓链球菌、停乳链球菌、化脓棒状杆菌、无乳链球菌等敏感3。僵蚕对金葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌有轻度抑制作用1。肿痛安配方中含有上述中药，肿痛安提取物表现出的抗菌活性，与这些组份具有的抗菌作用不无关系。金葡菌和表葡菌均是医院感染中最常见的致病菌，研究发现，MRSA、MRSE对很多抗生素耐药11，12，这给临床治疗带来很大困难。从实验结果看，肿痛安提取物对MRSA、MRSE具有很好的抗菌作用，其作用机制有待进一步的探讨。在临床上，肿痛安对口腔溃疡、牙周炎、急、慢性咽炎、痰血瘀滞型膝骨关节炎等具有很好的疗效13-16，总有效率都在89%以上，在治疗急慢性咽炎上，总有效率高于阿莫西林15。肿痛安胶囊是纯中药制剂，方中制白附子、天南星为君药，天麻、僵蚕为臣药，防风、羌活、白芷为佐药，三七为使药。白附子能解毒、散结、消肿止痛;天麻能祛风湿、止痹痛;天南星能燥湿化痰、祛风止痉、散结止痛;僵蚕能散风清热、泻火燥湿;防风、羌活、白芷能清热散风、导邪外出;三七有通络消肿、止痛的功效。肿痛安临床上不俗的表现，除了其具有的抗菌活性外，可能还因其调动了机体的免疫防御功能而发挥扶正祛邪的作用。本试验研究结果表明，两个批次的肿痛安提取物，对受试菌的临床分离菌的MICrange为12.5mg/ml50mg/ml，多数菌株的MIC在12.5mg/ml25mg/ml范围内，MIC50均在12.525mg/ml，MIC90多在2550mg/ml，显示两个批次的肿痛安提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有较好的体外抗菌活性。综上所述，肿痛安胶囊水提物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有较好的体外抗菌作用，这为进一步研究和优化提取工艺、开发新剂型、扩大临床应用范围提供了参考。参考文献1王本祥主编.现代中药药理学.第1版.天津:天津科学出版社，1999.241.2金树芬，刘文妹，乔坚，等.羌活注射液药理作用的研究.中成药研究，1981，25:41.3袁晨，张中文，王典仁.连翘等8中中药对奶牛乳房炎致病菌的药敏试验结果.当代畜牧，2005，5:15-17.