单克隆抗体在人体内的应用

单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用HGPRTHGPRT-HATHAT培养基培养基1单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用2单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源性单抗应用于人体时具有较强的免疫原性，将诱发产生 人抗鼠抗体人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody,HAMA)反应；l 鼠源性单抗通常不能有效地激活人体的免疫反应，如 补体依赖的细胞毒补体依赖的细胞毒(CDC)(CDC)作用作用 及 抗体依抗体依赖的细胞毒赖的细胞毒(ADCC)(ADCC)作用作用。3单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用解决上述问题的主要途径便是使 鼠源性单抗人源化鼠源性单抗人源化 或 研制完全的人研制完全的人源性抗体源性抗体鼠源单抗人源化（嵌合抗体，改型抗体，镶面抗体）、抗体库技鼠源单抗人源化（嵌合抗体，改型抗体，镶面抗体）、抗体库技术术 及 转基因小鼠技术转基因小鼠技术 成为人源化和人源性抗体制备的三大主要技术，在治疗性抗体的研制中起到关键作用4单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化经历了如下历程：鼠源单抗人源化经历了如下历程：恒定区人源化恒定区人源化 可变区人源化可变区人源化 利用抗体库技术获得完全人源序列利用抗体库技术获得完全人源序列5单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化1.恒定区人源化恒定区人源化鼠鼠/人人 嵌合抗体嵌合抗体(chimeric antibody)由于异源性McAb的免疫反应约有90%是针对 恒定区（恒定区（C区）区），要降低McAb的抗原性，必须对它的恒定区进行 人源化人源化。其原理是从分泌某McAb的杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出重组的功能性 可变区（可变区（V区）基因区）基因，经基因重组与 Ig恒定区基因恒定区基因 相拼接，插入到适宜的表达载体中，构成 鼠鼠/人人 嵌合的轻重链基因表达质粒，经转染骨髓瘤细胞，通过筛选即可制备出鼠/人嵌合抗体。6单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化2.可变区人源化可变区人源化CDR移植移植Ab(CDR grafting antibody)由于鼠/人嵌合抗体 保留了鼠可变区保留了鼠可变区，仍引起 HAMA，因此有必要将可变区也人源化。其原理是 将鼠源将鼠源McAb的的6个互补决定区的氨基酸序列个互补决定区的氨基酸序列 插入到 人人Ig的框架区的框架区，通常称为CDR移植。CDR移植技术的理论依据限于篇幅，在此省略7单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化2.可变区人源化可变区人源化CDR移植移植Ab(CDR grafting antibody)优点：CDR移植抗体中 非人序列含量低（约非人序列含量低（约5%5%），），研究已证实其免疫原性大大减小。并且在人体内的 血清半衰期延长血清半衰期延长。缺点：CDR移植抗体 与抗原结合的能力远不及其亲代鼠源与抗原结合的能力远不及其亲代鼠源McAb。为了恢复其亲和力，研究人员已经对CDR移植Ab技术进行优化，改进，使其抗原决定簇的结构更为完善。8单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 鼠源单抗人源化鼠源单抗人源化3.3.利用抗体库技术获得完全人源序列利用抗体库技术获得完全人源序列 噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术9噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术 的基本原理：首先利用基因工程技术克隆 人抗体可变区的全套基因人抗体可变区的全套基因 ，然后将克隆的基因插入噬菌体编码衣壳蛋白的基因中，建立噬菌体抗体文库，从而使该异源分子呈现于 噬菌体表面噬菌体表面。制备时，将抗原包被在固项介质上将抗原包被在固项介质上，加入待筛选的噬菌体颗粒与固定的抗原结合，获取结合的抗体，将未结合的抗体洗脱。从噬菌体库中筛选出针对特定抗原的特异性抗体的可变区。再用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去 侵染宿主细胞侵染宿主细胞，使该噬菌体颗粒得到扩增，将抗体可变区与恒定区组合得到具有完整功能的全人单克隆抗体全人单克隆抗体。噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术 具有：能够得到完全人源性Ab、分离抗体速度快、简单易行等优点。单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用10单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 转基因小鼠技术转基因小鼠技术11单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用l 几种已被批准上市的几种已被批准上市的McAbMcAb药物药物1986年美国年美国FDA批准抗批准抗CD3鼠单抗鼠单抗OKT3上市，改善了许多肾移植病人的存活。上市，改善了许多肾移植病人的存活。1997年年FDA批准批准Zenapax(daclizumab，PDL公司生产公司生产)上市。它是靶向为上市。它是靶向为CD25抗原的人源化单抗，是第抗原的人源化单抗，是第1个无严重不良反应的免疫抑制剂，能有个无严重不良反应的免疫抑制剂，能有效减缓器官移植所引起的免疫反应效减缓器官移植所引起的免疫反应 Rituxan(Rituximab,Mabthera，利妥昔单抗，利妥昔单抗)，Genentech公司生产，商品公司生产，商品名为美罗华。是名为美罗华。是1997年第一个被美国年第一个被美国FDA批准用于人肿瘤治疗的基因工程批准用于人肿瘤治疗的基因工程抗体，最初被用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤，抗体，最初被用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤，总有效率达总有效率达60%，现在正在探，现在正在探索用于治疗抗体病相关淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤。索用于治疗抗体病相关淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤。12单克隆抗体在人体内的应用单克隆抗体在人体内的应用Thank You 13