《血红蛋白的提取和分离》

课 题 3 血 红 蛋 白 的 提 取 和 分 离 血 红 蛋 白 含 有 四 条 肽 链 ,每 条 肽 链 环 绕 一 个 亚铁 血 红 素 基 团 ， 此 基 团 可 携 带 一 分 子 氧 或 一 分 子 二氧 化 碳 ， 血 红 蛋 白 因 含 有 血 红 素 而 呈 红 色 。 一 、 基 础 知 识 :学 生 活 动 1:1 、 分 离 生 物 大 分 子 的 基 本 思 路 是 什 么 ？2 、 不 同 蛋 白 质 的 特 性 在 哪 些 方 面 存 在 差 异 ？3 、 本 课 题 我 们 将 利 用 血 红 蛋 白 与 杂 质 蛋 白 哪 方 面的 差 异 进 行 提 纯 ？4 、 为 什 么 不 用 鸡 的 血 红 细 胞 而 用 人 的 血 红 细 胞 作 为实 验 材 料 ？5 、 用 什 么 方 法 分 离 相 对 分 子 质 量 不 同 的 蛋 白 质 ？ 一 、 基 础 知 识 -蛋 白 质 提 取 和 分 离 原 理 蛋 白 质 提 取 与 分 离 的 依 据 蛋 白 质 的 物 理 化学 性 质 ： 形 状 、 大 小 、 电 荷 性 质 和 多 少 、 溶 解 度 、 吸 附 性质 、 亲 和 力 等 千 差 万 别 。 提 取分 离方 法 凝 胶 色 谱 法 凝 胶 电 泳 法 （ 1） 原 理 ：（ 2） 材 料大 分 子 通 过 多 孔 凝 胶 颗 粒 的 间 隙 ， 路 程 短 ， 流 动 快 ；小 分 子 穿 过 多 孔 凝 胶 颗 粒 的 内 部 ， 路 程 长 ， 流 动 慢 。多 孔 性 的 多 糖 类 化 合 物 ， 如 葡 聚 糖 、 琼 脂 糖 。 (一 )凝 胶 色 谱 法 （ 3） 分 离 过 程 混 合 物上 柱 洗脱 大 分 子 流 动 快小 分 子 流 动 慢 收 集大 分 子 收 集小 分 子 洗 脱 ： 从 色 谱 柱 上 端 不 断 注 入 缓 冲 液 ， 促 使 蛋白 质 分 子 的 差 速 流 动 。 (一 )凝 胶 色 谱 法 1、 什 么 是 凝 胶 ？ 2、 什 么 是 凝 胶 色 谱 法 ？学 生 活 动 2:3、 凝 胶 色 谱 法 的 原 理 是 什 么 ？4、 请 用 自 己 的 话 总 结 出 凝 胶 色 谱 法 分 离 相 对 分 子 质量 不 同 蛋 白 质 的 具 体 过 程 。 1 、 什 么 是 缓 冲 液 ？2、 缓 冲 液 的 作 用 是 什 么 ？学 生 活 动 3:3、 缓 冲 液 是 如 何 配 制 的 ？ 你 所 学 过 的 人 体血 液 的 缓 冲 物 质 有 哪 些 ？4、 本 实 验 加 的 是 什 么 缓 冲 液 ？ 为 何 要 加 缓 冲 液 ？（ 二 ） 、 缓 冲 溶 液 由 弱 酸 和 相 应 的 强 碱 弱 酸 盐 组 成 。如 H2CO3/NaHCO3， 醋 酸 /醋 酸 钠 ，NaH2PO4/Na2HPO4等缓 冲 溶 液 洗 脱 剂组 成 ：配 制 ：作 用 ：调 节 缓 冲 剂 的 比 例 ， 可 配 制 不 同 pH的 缓 冲 液 。抵 制 外 界 酸 碱 对 溶 液 pH的 干 扰 而 保 持 pH稳 定 。（ 二 ） 、 缓 冲 溶 液 1 、 什 么 是 电 泳 ？2、 影 响 电 泳 迁 移 速 度 的 因 素 有 哪 些 ？学 生 活 动 4:4、 电 泳 分 离 各 种 分 子 的 原 理 是 什 么 ？（ 三 ） 、 电 泳3、 如 何 消 除 电 荷 对 电 泳 迁 移 速 度 的 影 响 ？5 、 请 描 述 电 泳 的 过 程 ？ 2 凝 胶 电 泳 法 ：（ 1） 原 理 ： 不 同 蛋 白 质 的 带 电 性 质 、 电 量 、 形 状 和 大 小不 同 ， 在 电 场 中 受 到 的 作 用 力 大 小 、 方 向 、 阻 力不 同 ， 导 致 不 同 蛋 白 质 在 电 场 中 的 运 动 方 向 和 运动 速 度 不 同 。 影 响 蛋 白 质 分 子 运 动 速 度 的 因 素(三 )电 泳1.电 泳 的 概 念指 带 电 粒 子 在 电 场 的 作 用 下 发 生 迁 移 的 过 程 . 影 响 蛋 白 质 分 子 运 动 速 度 的 因 素 决 定运 动 方 向 形 成库 仑 力 形 成阻 力 决 定运 动 速 率电 荷 性 质电 荷 量分 子 形 状分 子 大 小 在 一 定 pH下 ， 使 蛋 白 质 基 团 带 上 正 电 或 负 电 ；加 入 带 负 电 荷 多 的 SDS， 形 成 “ 蛋 白 质 SDS复 合物 ” ， 使 蛋 白 质 迁 移 速 率 仅 取 决 于 分 子 大 小 。 （ 2） 分 离 方 法 ：（ 3） 分 离 过 程 ： 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 、 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 等 。(三 )电 泳 电 泳 检 测 结 果 二 、 实 验 操 作蛋 白 质 的 提 取 和 分 离 一 般 分 为 四 步 ：（ 1） 样 品 处 理 ： 包 括 洗 涤 红 细 胞 ； 血 红 蛋 白 释 放 ；离 心 分 离 等 操 作 收 集 到 的 血 红 蛋 白 溶 液 。（ 2） 粗 分 离 ： 透 析 除 去 分 子 较 小 的 杂 质 。（ 3） 纯 化 ： 通 过 凝 胶 色 谱 法 将 分 子 量 较 大 的 杂 质 蛋白 质 除 去 。（ 4） 纯 度 鉴 定 ： 通 过 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 鉴 定 。 （ 一 ） 样 品 处 理1、 红 细 胞 的 洗 涤 ： 目 的 是 去 除 杂 蛋 白 。 要 加 入 柠 檬 酸 钠 防 止 血 液凝 固 ； 离 心 将 血 液 分 层 ， 用 胶 头 吸 管 吸 出 黄 色 血 浆 ；用 生 理 盐 水 洗 涤 。2、 血 红 蛋 白 的 释 放 ： 在 蒸 馏 水 和 甲 苯 作 用 下 ， 红 细 胞 破 裂 释 放3、 分 离 血 红 蛋 白 溶 液 ： 离 心 分 层 ； 滤 纸 过 滤 去 除 脂 溶 性 沉 淀 层 ； 分 液漏 斗 分 出 红 色 透 明 液 体 。4、 透 析 ： 装 入 透 析 袋 并 置 于 磷 酸 缓 冲 液 中 （ PH为7.0） 透 析 。 样 品 处 理粗 分 离纯 化纯 度 鉴 定 血 液 组 成 成 分 1.洗 涤 红 细 胞 2.释 放 血 红 蛋 白 3.分 离 血 红 蛋 白 4.透 析 血 红 蛋 白二 、 实 验 操 作 跳 转 血 液 组 成 成 分阅 读 思 考 ：1. 血 液 由 _和 _两 部 分 组 成 。2. 血 细 胞 中 _细 胞 数 量 最 多 ， 红 细 胞 的 含量 最 高 的 有 机 化 合 物 是 _。3. 该 化 合 物 是 由 _和 _构 成 的 ， 其 中 每 个 亚 基 中 都 含 有 一 个 能 与 O2和CO2结 合 的 _基 团 。血 浆 血 细 胞红 细 胞 血 红 蛋 白2条 -肽 链 2条 -肽 链 亚 铁 血 红 素 返 回 1.洗 涤 红 细 胞阅 读 思 考 ： 洗 涤 的 目 的 是 什 么 ？洗 涤 过 程 ：血 液100mL3g柠 檬 酸 钠 低 速 离 心2 min 红 细 胞血 浆吸出血浆红 细 胞5倍体积生理盐水搅拌10min重 复 洗 涤 3次 ， 直 至 上 清 液 没 有 黄 色 采 集 得 到 鸡 血 初 次 离 心 后 的 结 果 3次 洗 涤 后 的 结 果 返 回 2.释 放 血 红 蛋 白阅 读 思 考 ：1. 释 放 血 红 蛋 白 过 程 中 ， 在 洗 涤 好 的 红 细 胞 加 入 了哪 些 物 质 ？2. 为 了 加 速 释 放 过 程 ， 采 取 了 什 么 措 施 ？ 目 的 分 析 ： 蒸 馏 水 的 作 用 是 _。 加 入 甲 苯 的 作 用 是 _。 充 分 搅 拌 的 目 的 是 _。使 红 细 胞 大 量 吸 水 胀 裂溶 解 红 细 胞 的 细 胞 膜加 速 红 细 胞 的 破 裂 (2)血 红 蛋 白 的 释 放 ： 加 蒸 馏 水 到 原 血 液 体 积 ， 再 加 40 体 积 的 甲 苯 ，置 于 磁 力 搅 拌 器 上 充 分 搅 拌 10分 钟 （ 加 速 细 胞 破裂 ） ,细 胞 破 裂 释 放 出 血 红 蛋 白 。 磁 力 搅 拌 器 返 回 3.分 离 血 红 蛋 白分 离 过 程红 细 胞混 合 液高 速 离 心10min 离心管滤 纸过滤脂类物质烧杯 (3)分 离 血 红 蛋 白 溶 液 ： 过 程 ： 将 搅 拌 好 混 合 液 转 移 到 离 心 管 内 ， 以2000r/min的 速 度 离 心 10 min。 试 管 中 溶 液 层 次 ： 第 1层 （ 最 上 层 ） ： 甲 苯层 （ 无 色 透 明 ） ； 第 2层 （ 中 上 层 ） ： 脂 溶 性 物 质 沉淀 层 （ 白 色 薄 层 固 体 ） ； 第 3层 （ 中 下 层 ） ： 血 红 蛋白 的 水 溶 液 层 （ 红 色 透 明 液 体 ） ； 第 4层 （ 最 下 层 ） ：杂 质 沉 淀 层 （ 暗 红 色 ） 。 分 离 ： 用 滤 纸 过 滤 ， 除 去 脂 溶 性 沉 淀 层 ， 于分 液 漏 斗 中 静 置 片 刻 后 ， 分 出 下 层 的 红 色 透 明 液 体 。 甲 苯 层 （ 无 色 透 明 ）白 色 薄 层 固 体红 色 透 明 液 体杂 质 沉 淀 层 （ 暗 红 色 ）试 管 中 溶 液 层 次 返 回 4.透 析 血 红 蛋 白 20mmol/L磷酸缓冲液1mL 1mL 利 用 透 析 袋 透 析 透 析 过 程 返 回 纯 化 凝 胶 色 谱 操 作1.凝 胶 色 谱 柱 的 制 作 ：2.凝 胶 色 谱 柱 的 装 填 ： 教 材 图 5 193.样 品 的 加 入 和 洗 脱 返 回 （ 二 ） 凝 胶 色 谱 操 作（ 1） 凝 胶 色 谱 柱 的 制 作 ： 取 长 40厘 米 ， 内 径 1.6厘 米 的 玻 璃 管 ， 两 端 需 用 砂 纸磨 平 。 底 塞 的 制 作 ： 打 孔 挖 出 凹 穴 安 装 移 液 管 头 部 覆 盖 尼 龙 网 ， 再 用 100目 尼 龙 纱 包 好 ， 插 到 玻 璃 管 的 一端 。 注 意 事 项 ： 底 塞 中 插 入 的 玻 璃 管 的 上 部 不 得 超 出橡 皮 塞 的 凹 穴 底 面 ， 否 则 难 以 铺 实 尼 龙 网 ， 还 会 导 致液 体 残 留 ， 蛋 白 质 分 离 不 彻 底 。 顶 塞 的 制 作 ： 打 孔 安 装 玻 璃 管 。 组 装 ： 将 上 述 三 者 按 相 应 位 置 组 装 成 一 个 整 体 。 安 装 其 他 附 属 结 构 。 装 配 好 的 凝 胶 柱 返 回 材 料 ： 交 联 葡 聚 糖 凝 胶 G-75； 20mmol/L磷 酸 缓 冲 液装 填 :2.凝 胶 色 谱 柱 的 装 填 ：步 骤 操 作 要 求 立 刻 用 磷 酸 缓 冲 液 洗 涤 平 衡 12h洗 涤 平 衡 一 次 性 缓 慢 倒 入 ； 轻 轻 敲 打装 填 悬 浮 液 凝 胶 颗 粒 洗 脱 液 沸 水 浴 凝 胶 颗 粒 蒸 馏 水 充 分 溶 胀根 据 色 谱 柱 体 积 计 算 凝 胶 用 量色 谱 柱 垂 直 固 定 在 支 架 上配 制 悬 浮 液计 算 称 量 凝 胶固 定 色 谱 柱 （ 2） 凝 胶 色 谱 柱 的 装 填 凝 胶 的 选 择 ： A、 材 料 ： 交 联 葡 聚 糖 凝 胶 （ G-75） 。 B、 代 表 意 义 ： “ G” 表 示 凝 胶 的 交 联 程 度 ， 膨 胀程 度 及 分 离 范 围 。 75表 示 凝 胶 的 得 水 值 ， 即 每 克 凝 胶 膨胀 时 吸 水 7.5克 。 凝 胶 的 前 处 理 ： 配 制 凝 胶 悬 浮 液 ： 计 算 并 称 取 一定 量 的 凝 胶 浸 泡 于 蒸 馏 水 或 洗 脱 液 中 充 分 溶 胀 后 ， 配 成凝 胶 悬 浮 液 。 凝 胶 色 谱 柱 的 装 填 方 法 ： A、 固 定 ： 将 色 谱 柱 装置 固 定 在 支 架 上 。 B、 装 填 ： 将 凝 胶 悬 浮 液 一 次 性 的 装填 入 色 谱 柱 内 ， 装 填 时 轻 轻 敲 动 色 谱 柱 ， 使 凝 胶 填 装 均匀 。 注 意 ： 1、 凝 胶 装 填 时 尽 量 紧 密 ， 以 降 低 凝 胶 颗 粒之 间 的 空 隙 。 2、 装 填 凝 胶 柱 时 不 得 有 气 泡 存 在 ： 因 为气 泡 会 搅 乱 洗 脱 液 中 蛋 白 质 的 洗 脱 次 序 ， 降 低 分 离 效 果 。 洗 涤 平 衡 ： 装 填 完 毕 后 ，立 即 用 缓 冲 液 洗 脱 瓶 ， 在 50cm高 的 操 作 压 下 ， 用 300ml的20mmol/l的 磷 酸 缓 冲 液 （ pH为7.0） 充 分 洗 涤 平 衡 12小 时 。 注 意 ： 1、 洗 脱 液 面 不 要低 于 凝 胶 表 面 ， 否 则 可 能 有 气泡 混 入 ， 影 响 液 体 在 柱 内 的 流动 与 最 终 生 物 大 分 子 物 质 的 分离 效 果 。 2、 不 能 发 生 洗 脱 液流 干 ， 露 出 凝 胶 颗 粒 的 现 象 。返 回 3.样 品 加 入 与 洗 脱 调 节 缓 冲 液 面 ： 打 开 下 端 出 口 ， 使 柱 内 缓 冲 液 缓 慢 下 降到 与 凝 胶 面 平 齐 ， 关 闭 出 口 。 滴 加 透 析 样 品 ： 吸 管 吸 1ml样 品 加 到 色 谱 柱 的 顶 端 ， 滴 加样 品 时 ， 吸 管 管 口 贴 着 管 壁 环 绕 移 动 加 样 ， 同 时 注 意 不 要 破 坏凝 胶 面 。 样 品 渗 入 凝 胶 床 ： 加 样 后 打 开 下 端 出 口 ， 使 样 品 渗 入 凝胶 床 内 ， 等 样 品 完 全 进 入 凝 胶 层 后 ， 关 闭 下 端 出 口 。 洗 脱 ： 小 心 加 入 pH=7.0 的 20mmol/l的 磷 酸 缓 冲 液 到 适 当高 度 ， 连 接 缓 冲 液 洗 脱 瓶 ， 打 开 下 端 出 口 进 行 洗 脱 。 收 集 ： 待 红 色 的 蛋 白 质 接 近 色 谱 柱 底 端 时 ， 用 试 管 收 集流 出 液 ， 每 5ml收 集 一 试 管 ， 连 续 收 集 。 （ 在 分 离 过 程 中 ， 如果 红 色 区 带 均 匀 一 致 的 移 动 ， 说 明 色 谱 柱 制 作 成 功 ） 注 意 ： 正 确 的 加 样 操 作 ： 1、 不 要 触 及 并 破 坏 凝 胶 面 。 2、贴 壁 加 样 。 3、 使 吸 管 管 口 沿 管 壁 环 绕 移 动 。 3.样 品 的 加 入 和 洗 脱 3.样 品 加 入 与 洗 脱注 意 ： 正 确 的 加 样 操 作 是 ： 1、 不 要 触 及 并 破 坏 凝 胶 面 。2、 贴 壁 加 样 。 3、 使 吸 管 管 口 沿 管 壁 环 绕 移 动 。 收 集 得 到 的 纯 化 后 的 血 红 蛋 白 注 意 事 项1. 红 细 胞 的 洗 涤 ： 洗 涤 次 数 不 能 过 少 ； 低 速 、 短 时 离 心 。2. 凝 胶 的 预 处 理 ： 沸 水 浴 法 时 间 短 ， 还 能 除 去 微 生 物 和 气 泡3. 色 谱 柱 的 装 填 ： 装 填 尽 量 紧 密 ， 降 低 颗 粒 间 隙 ； 无 气 泡 ； 洗脱 液 不 能 断 流 。4. 色 谱 柱 成 功 标 志 ： 红 色 区 带 均 匀 一 致 地 移 动 。为 什 么 ？返 回 观 察 你 处 理 的 血 液 样 品 离 心 后 是 否 分 层 （ 见 教 科书 图 5-18） ， 如 果 分 层 不 明 显 ， 可 能 是 洗 涤 次 数 少 、未 能 除 去 血 浆 蛋 白 的 原 因 。 此 外 ， 离 心 速 度 过 高 和 时间 过 长 ， 会 使 白 细 胞 和 淋 巴 细 胞 一 同 沉 淀 ， 也 得 不 到纯 净 的 红 细 胞 ， 影 响 后 续 血 红 蛋 白 的 提 取 纯 度 。三 、 实 验 结 果 分 析 与 评 价1、 你 是 否 完 成 了 对 血 液 样 品 的 处 理 ？ 你 能 描 述 处理 后 的 样 品 发 生 了 哪 些 变 化 吗 ？ 2、 你 装 填 的 凝 胶 色 谱 柱 是 否 有 气 泡 产 生 ？ 你 的 色谱 柱 装 填 得 成 功 吗 ？ 你 是 如 何 判 断 的 ？ 由 于 凝 胶 是 一 种 半 透 明 的 介 质 ， 因 此 可 以 在 凝 胶 柱旁 放 一 支 与 凝 胶 柱 垂 直 的 日 光 灯 ， 检 查 凝 胶 是 否 装 填 得均 匀 。 此 外 ， 还 可 以 加 入 大 分 子 的 有 色 物 质 ， 例 如 蓝 色葡 聚 糖 2000或 红 色 葡 聚 糖 ， 观 察 色 带 移 动 的 情 况 。 如果 色 带 均 匀 、 狭 窄 、 平 整 ， 说 明 凝 胶 色 谱 柱 的 性 能 良 好 。如 果 色 谱 柱 出 现 纹 路 或 是 气 泡 ， 轻 轻 敲 打 柱 体 以 消 除 气泡 ， 消 除 不 了 时 要 重 新 装 柱 。 如 果 凝 胶 色 谱 柱 装 填 得 很 成 功 、 分 离 操 作 也 正 确的 话 ， 能 清 楚 地 看 到 血 红 蛋 白 的 红 色 区 带 均 匀 、 狭 窄 、平 整 ， 随 着 洗 脱 液 缓 慢 流 出 ； 如 果 红 色 区 带 歪 曲 、 散乱 、 变 宽 ， 说 明 分 离 的 效 果 不 好 ， 这 与 凝 胶 色 谱 柱 的装 填 有 关 。 3、 你 能 观 察 到 蛋 白 质 的 分 离 过 程 中 ， 红 色 区 带的 移 动 吗 ？ 请 描 述 红 色 区 带 的 移 动 情 况 ， 并 据 此 判断 分 离 效 果 ？ 知 识 总 结血红蛋白的提取和分离 蛋 白 质 分 子 的 差 异 性凝 胶 色 谱 法 原 理 分 离 过 程凝 胶 电 泳 法缓 冲 溶 液 组 成 作 用蛋 白 质 的提 取 分 离 样 品 处 理 粗 分 离纯 化纯 度 鉴 定 教 学 反 馈 1 凝 胶 色 谱 法 是 根 据 （ ） 分 离 蛋 白 质 的 有 效 方 法 。 A分 子 的 大 小 B相 对 分 子 质 量 的 大 小 C带 电 荷 的 多 少 D溶 解 度2 缓 冲 液 的 作 用 是 ： 在 一 定 范 围 内 ， 抵 制 外 界 的 影 响 来维 持 （ ） 基 本 不 变 。 A温 度 B pH C渗 透 压 D氧 气 浓 度BB 3 电 泳 是 指 带 电 粒 子 在 电 场 的 作 用 下 向 着 与 其 所 带 电荷 （ ） 的 电 极 移 动 。 A相 同 B相 反 C相 对 D相 向4. 哺 乳 动 物 和 人 的 成 熟 的 红 细 胞 中 的 （ ） 与氧 气 的 运 输 有 关 。 A血 红 蛋 白 B肌 红 蛋 白 C肌 动 蛋 白 D肌 球 蛋 白B A 5 血 液 由 血 浆 和 各 种 血 细 胞 组 成 ， 其 中 （ ） 的含 量 最 多 。 A白 细 胞 B血 小 板 C红 细 胞 D淋 巴 细 胞6 为 防 止 血 液 凝 固 ， 在 采 血 容 器 中 要 预 先 加 入 抗 凝血 剂 （ ） 。 A. NaCl B.甲 苯 C.蒸 馏 水 D.柠 檬 酸 钠 CD 7 将 搅 拌 好 的 混 合 液 转 移 到 离 心 管 中 ， 离 心 后 ， 可 以 明显 看 到 试 管 中 的 溶 液 分 为 4层 ， 其 中 第 3层 是 （ ） A无 色 透 明 的 甲 苯 层 B脂 溶 性 物 质 的 沉 淀 层 C血 红 蛋 白 的 水 溶 液 D其 他 杂 质 的 暗 红 色 沉 淀 物 C 1、 随 着 人 类 跨 入 蛋 白 质 组 时 代 ， 对 蛋 白 质 的 研 究 和应 用 越 来 越 深 入 ， 首 先 要 做 的 一 步 是A 弄 清 各 种 蛋 白 质 的 空 间 结 构B 弄 清 各 种 蛋 白 质 的 功 能C 弄 清 各 种 蛋 白 质 的 合 成 过 程D 获 得 高 纯 度 的 蛋 白 质练 习 巩 固 2、 用 凝 胶 色 谱 法 分 离 蛋 白 质 的 过 程 中 ， 关 于 蛋 白 质的 叙 述 ， 正 确 的 是A 相 对 分 子 质 量 较 小 的 蛋 白 质 行 程 大 于 相 对 分 子 质量 较 大 的 蛋 白 质B 相 对 分 子 质 量 较 小 的 蛋 白 质 行 程 小 于 相 对 分 子 质量 较 大 的 蛋 白 质C 相 对 分 子 质 量 较 小 的 蛋 白 质 行 程 等 于 相 对 分 子 质量 较 大 的 蛋 白 质D 二 者 根 本 无 法 比 较 3、 使 用 SDS-聚 丙 烯 酰 胺 电 泳 过 程 中 ， 不 同 蛋 白 质的 电 泳 迁 移 率 完 全 取 决 于A 电 荷 的 多 少 B 分 子 的 大 小C 肽 链 的 多 少 D 分 子 形 状 的 差 异4、 在 采 血 容 器 中 加 入 柠 檬 酸 钠 的 目 的 是A 调 节 pH B 维 持 红 细 胞 的 能 量 供 应C 防 止 微 生 物 生 长 D 防 止 血 液 凝 固 5、 一 分 子 血 红 蛋 白 最 多 可 携 带 的 O2分 子 数 和 CO2分 子 数 分 别 是A 4、 2 B 4、 4 C 2、 1 D、 1、 16、 记 住 样 品 处 理 中 的 血 红 蛋 白 溶 液 离 心 后 分 层 顺序 自 上 而 下 是 ：有 机 溶 剂 -脂 类 物 质 -血 红 蛋 白 溶 液 -红 细 胞 破 碎 物 沉 淀