金花茶组培快繁技术

金花茶的组培快繁技术QQ:330861128摘要：利用植物细胞的全能性，经组织培养技术，获取大批量的无菌幼 苗。材料是用金花茶幼果，取其幼坯进行培养，获取较大的愈伤组织块，进 一步诱导丛生芽，从而得到无菌的脱毒瓶苗，并继代，扩大繁殖,获取大量金 花茶幼苗。关键词：细胞全能性 组织培养 脱毒 无菌苗前言：金花茶是山茶属金花茶组植物，是世界珍贵、稀有的观赏植物和种质 资源，并具有独特的药用价值。并被称为花卉中的“超级明星”、“茶族皇后”、 及植物界的“大熊猫”。金花茶主要产于我国和越南。于 20世纪60年代初在 我国广西南部首次发现。目前世界上已报道的23 个分类群中，我国产21 个， 特有19个，有4个分类群被列为我国一级和二级保护植物，越南产 4个，特 有 2 个。金花茶为常绿灌木或小乔木，高约为 2-5 米，其枝条疏松，树皮淡 灰色，叶深绿色，如皮革般厚实，狭长圆形，先端尾状渐尖或急尖。叶边缘 微微向背面翻卷，有细细的硬质锯齿。金花茶组植物的垂直分布的高度，一 般出现于海拔 700 米以下，以海拔 200-500 米之间的范围较常见，垂直分布 的下限为海拔 20 米左右。金花茶组植物在分布区内除分布于碳酸盐岩发育成 的各种岩溶地貌外，砂页岩、砾岩和花岗岩发育成的流水浸蚀的地貌也有分 布。金花茶的花为金黄色，耀眼夺目，仿佛涂着一层蜡，晶营而油润，似有半 透明之感。金花茶的花单生于叶腋，花开时，有杯状、壶状或碗状，娇艳多 姿，秀丽雅致；其果实为蒴果，内藏6至 8粒种子，种皮黑褐色。金花茶4-5 月叶芽开始萌发，11 月份开始开花，花期可延续至翌年 3 月。金花茶还有较 高的经济价值。其花除可做观赏外，尚可入药，可治便血和妇女月经过多， 也可作食用染料；叶除泡茶作饮料外，也可药用，可治痢疾和用于外洗烂疮； 其木材质地坚硬，结构致密，可雕刻精美的工艺品及其他器具。此外，其种 子尚可榨油、食用或工业上用作润滑。同样还具有抗癌、降低胆固醇与0脂 蛋白的作用。基于以上金花茶的各种经济价值及其市场前景，利用现代的组织培养技 术代替过去的扦插、嫁接和芽插栽培，可不受季节的约束而大量快速地繁殖。 从而促进金花茶经济价值的更快开发，并服务于人类。1. 生产工艺流程：培养基配制!培养基一接种培养一外植体预处理一采取外植体!单芽、丛生芽一继代培养f无根苗一生根苗一移栽定植/ 市场出售 提取药用成份 2快繁技术要点 21 诱导培养基 MS+BA +NAA +IBA +PVP +V +LH1。51.01.01.0 C1 500 MS+BA +NAA +IBA +PVP +V +LH2.01。51。51 C1 500继代培养基：MS+BA +NAA +IBA1。5311。50。10。5生根培养基： 1/2MS+BA +NAA +0.3%活性炭0。 10。 5以上培养基糖的用量为4%,琼脂0.40.9%,PH6.0 6.42. 2 选材在天气晴朗的上午或午后采摘当年未成熟的幼果，幼果应无病虫、无畸 形，果皮色泽正常。23 外植体的预处理将采回的幼果，先用自来水冲洗，之后用洗衣粉洗，并用刷子轻刷外皮， 将果皮柔毛刷掉，冲洗干净，置于超净台的瓶子内，用 40倍的新洁尔灭溶液 消毒46分钟，中间轻轻摇晃瓶子；再用 0.1%的升汞消毒5-8分钟, 并轻轻摇 晃瓶子, 最后用无菌水冲洗4-5次即可。2. 4 接种用解剖刀将消毒好的幼果外皮削掉 （每切一下换一把解剖刀 ）,然后剥开 种皮,最后露出完整的坯,切下整个坯或坯根或坯芽接到培养基上,每瓶一株, 轻插于培养基表面, 不易太深。2. 5 成苗的诱导开始3-4天给予暗培养，温度22 C左右，之后，移到光照强度为 500-2000lax,温度为25C的光照培养箱内培养，每天光照时长为12-14h。7 天后，开始有明显的生长迹象，15天后开始长出较为肥厚的畸形叶，根部 有0.3cm左右的愈伤组织；在15天且开始长愈伤组织,并长出墨绿色的小叶 子。1个月之后和都长出较大的暗红色的愈伤组织；长出的畸形叶更肥 厚，有黄豆粒般大小，呈灰绿色，但生长绶慢；中嫩芽已长有05cm高。两 个月之后，将较接到中进行培养，将畸形叶也切下，接入到中，1个月 后，畸形叶表面有红色颗粒形成，并渐渐增多转绿，开始分化出丛生。4个月 之后，中的金花茶已长到5-6个茎节，此时可进行继代培养。2. 6 继代培养 将长出的芽从愈伤组织上切下,并切去叶片，接到继代到培养基上,每瓶 一株。将愈伤组织的表面老化部分削去，重新接到新的中继续诱导长芽。 开始一个星期进行暗培养，温度在25 C，然后将温度调到28 C，光照1500lax 左右，约10天，在叶腋处长出腋芽来。40天瓶苗可长到5-6个茎节。2. 7 生根培养及炼苗、移栽将继代瓶苗接到生根培养基上，两个茎节一株，每瓶 5株，半个月后在金 花茶的根部长出明显的突起，此时可以进行炼苗。把瓶苗拿到走道的架上， 3 天之后打开瓶盖，并适当地喷上低浓度的杀菌剂，保持湿度， 1个星期或更长 时间（不超过10天）之后移植到沙盘上。进行大棚式的管理， 1个星期左右开 始生长，并长出根须。3 金花茶组培苗的栽培管理3. 1 露地栽植3.1.1 土壤选择肥沃排水良好的微酸性土壤上， PH 值在某种程度上。5.56.0 之间QQ 交流：3308611283. 1. 2种植时间23月春植以小苗为主；11月后秋植，效果较好。3. 1. 3施肥茶花不喜肥，一般花前 1011月，花后45月，施肥24次。肥 料主要采用复合肥、堆肥，并结合适量磷肥；（施肥原则薄施多施。壮苗多施， 弱苗少施或不施）。3. 1. 4茶花生长缓慢，不宜强度修剪；树冠发育均匀，也不需特殊修剪，只需剪 除病虫枝，过密枝，弱枝和徒长枝。新植苗，为确保成活，也可适度修剪。摘蕾 是栽培管理的重要一环，一般每枝最多保留3个花蕾，并保持一定间距，这样可 减少植株养分消耗过大，影响开花。茶花花期长达半年，及时搞去凋萎的花朵， 减少养分消耗，增强树势大有好处。3. 1. 5 病虫害防治与中耕除草。茶花的主要病害有褐斑病、黄化病及枝上苔藓寄 生，虫害为结蜘蛛。各种介壳虫、刺蛾。蔷薇叶蜂等。病虫害的发生，大大影响 树势及其观赏性。防治方法分别为：褐斑病在春季发前喷洒波尔多液，以后每半 个月继续喷洒预防，并注意排水与施肥，除去被害叶并烧毁。黄化病主要由土壤 缺微量元素引起，可经常洒施硫酸亚铁或硫酸镁溶液加以防治。红蜘蛛和各种介 壳虫防治喷施松脂合剂并加强通风。各类刺蛾，蔷薇叶蜂等用 40%氧化乐果 400155 倍液或 80%敌敌畏乳油 10001200倍液喷施防治。中耕除草，清洁园 地也可有效防治病虫害，增强树势，使花朵肥大。全年进行中耕除草 67次。3. 2 盆栽3. 2. 1 盆土选择 选用微酸性、疏松、肥沃的混合土作盆土。混合土的比例为园 土 6 份、松叶腐殖土 3 份，砂质 12 份。3. 2. 2 盆的选择 培育以泥瓦盆为好，盆的尺寸大 小与苗的比例为：苗高 4050cm,冠幅2025cm的茶花，盆的口径在20cm左右。其它大小的以此类推。 商品苗用紫砂盆较好，可提高观赏效果。3. 2. 3盆苗的选择 选择生长健壮、主干、单干无分枝，树冠优美，叶片嫩绿， 无病虫害的植株。3. 2. 4浇水管理 新植苗第一次浇足透水， 2个月内勤浇水，保持盆土湿润。以 后同其它花木盆苗一样进行浇水。次数观气候情况而定，以保持土壤湿润的原则。 春天多浇，满足发芽抽梢的需要；夏季宜在早晚，雨季防积水，秋旱要及时浇水， 冬季为防冻，浇水在中午进行。3. 2. 5 蔽萌与防寒茶花春天与雨季要给予充足的阳光，夏秋时节进行蔽萌降温；冬季气温下降 到零度时，需搬入室内防寒。3. 2. 6 花期控制主要是通过品种选择、温度控制和激素处理等手段来达到提早开花或延迟开 花的目的。如为了延迟开花，可选择晚花品种，并对其进行低温控制（23度以 上的冷库，贮藏经包扎防寒处理的植株），可延迟一月开花。为使其提早开花须 选择早花品种如小桃红、雪塔、四面景等，再经过追施重肥和激素处理。方法是 在茶花春季管理方式停止。花芽形成后，追施重肥，使花后嫩枝及早充实成熟， 及早停止生长；在7月中或8月初用手笔点涂5001000PPm赤霉素到花蕾上三 天一次，伴以合理水肥； 9月份视花蕾肥大情况再点涂赤霉素，在达不到要求时， 酌量强加点涂次数，继续伴以喷水追肥，则蓓蕾迅速增长，可提早在9月下旬至 11 月开花。4 病害及其防治41 炭疽病【病因及症状】该病由赤叶枯刺盘抱菌（Colletotrichum gloeosporids）侵染茶花 叶片而造成。这是茶花的主要病害，发病率达 33%。病症多出现于叶缘、叶尖和QQ 交流：330861128叶脉两侧。初现暗绿色斑纹，后逐渐扩大成不规则大斑，颜色由褐色变为黑色， 严重时可扩散到整个叶片，引起大量落叶。【发病规律】该项病的发生与温度和湿度有密切关系。一般发病适温为2528 C。 当温度适宜，湿度增加时，特别是连续降雨时，能促进病害的蔓延和发展。一般 4月份开始发病， 57 月份病害达到高峰， 9月份以后病情趋向停止。【防治方法】彻底清除病叶。冬季剪除病枯枝。在每年发病期前，喷洒 1%的波尔多液，每半个月一次。每周用600倍百菌清水溶液喷洒一次，连续 喷34次。加强栽培管理，科学除草施肥。在春季可增施磷、钾肥，在叶片展 开前喷施 0.15%的磷酸二氢钾水溶液。4. 2 藻斑病【病因及症状】该病由寄生性锈藻(Cephaleuros virescens)引起。在叶片的两面 均可出现病斑，但以叶面为主。初期为针状呈灰绿色小圆点，后逐渐呈放射状向 外扩展，形成近似圆形或不规则的病斑。病斑隆起明显，表面有细条纹式的毛毡 状物。后期病斑颜色由灰绿色变为暗褐色。由于病原体的覆盖，影响叶面光合作 用的进行，因而使茶花植株生长衰弱。【发病规律】寄生性锈藻以丝状营养体在寄生组织中越冬，在潮湿条件下产生游 动孢子，孢子侵入新植株而使它得病。该病原菌是一种很弱的寄生菌。在高温高 湿的条件下，因通风透光差而生长不良的茶花林，发生此病最为严重。【防治方法】加强培育管理，合理施肥，及时修剪，避免茶花林地过于荫蔽， 做到通风透光，以提高茶花抗性。可用0.2%0.5%硫酸铜溶液喷雾防治。4. 3 枯枝病【病因及症状】由病原真菌( Glomerella cingulata )浸染茶花嫩枝或老枝后引起 的一种病害。受害枝条坏死，叶片绿变为淡黄，从顶部向下逐渐干枯脱落，最后 整个枝梢干枯死亡。【发病规律】该病的发生情况是，随着春季气候气温的回升，在病枯树上越冬的 病原菌孢子堆逐渐成熟，随风飘散到附近的茶花枝条上，从新芽、嫩枝伤口、叶 痕、嫁接或修剪伤口等处，侵入茶树为害，并大量繁殖。【防治方法】冬季剪除病枯枝，集中予以烧毁。摘除无用的不定芽和细弱枝， 减少病原菌的附生场所。将带病植株隔离养护。在茶花植株萌芽抽梢之前， 用甲基托布津、福美双、百菌清等杀菌剂喷施，特别要保证枝条伤口部位的喷药。 多施磷、钾肥，少施氮肥。4. 4 根腐病【病因及症状】该病由多种病原菌引起，其中最常见的有Phytophthora cinnamoni Cylindrocladium crotalariae 和 Armillaria 三种，主要侵染茶花的根系。受害植株 根部腐烂变黑，叶片变黄，梢尖死亡，花芽掉落，植株逐渐凋萎死亡。【发病规律】病原菌以菌核在土壤或病株上越冬。翌年春天，当温湿度适宜时， 菌核萌发菌线，在土壤中蔓延，侵害植株根部。气温越高，其发病率也越高。【防治方法】要及时挖除病株及其附近的带菌土，并用1%硫酸铜溶液对病株 周围的土壤消毒，防止病菌扩散蔓延。保持土壤排水良好，严防栽培地积水。 选择抗病能力强的茶花品种进行栽培。4. 5 赤叶斑病(赤叶枯病)【病因及症状】该病由半知菌类叶点菌属(Phyllosticta sp.)真菌引起。病斑多 发生在较嫩的叶片上，初为淡褐色圆形渍状小点。以后病斑蔓延，颜色由淡褐色 变为棕褐色，有时多个病斑连合成较大的斑块或蔓延于整个叶片，引起叶片的大 量枯焦和脱落。【发病规律】该病菌存活在寄主的病残体上，孢子借助风雨、流水等传播。病害QQ 交流：330861128一般从5月份开始发生，79月份为发病高峰，受害叶片在大量脱落。【防治方法】发病初期，可用70%甲基托布津10001500倍液，或者25%灭 菌丹400倍液喷洒防治。在干旱时，可增加叶片喷水，以抑制病害的发生。4. 6 花腐病【病因及症状】该病是由茶花花腐真菌(Giborinia camelliae Kohn)侵染花瓣所 引发的一种病害。受害的花朵先是出现棕褐色小斑点，以后逐渐扩大，直至整个 花朵变成褐色而枯萎。【发病规律】花腐真菌可在花柄处形成菌核，其孢子可随风传播。一般秋季发病 率较低。在 12月份至翌年3月份，随着气温的升高，花朵受害率增高。【防治方法】发现有感染此病的茶花花朵时，应及时摘除，并予集中烧毁。特 别是在花期，更要及时清扫掉落在地面上的病花。在开花前，可用杀菌剂，如 多菌灵，喷洒花蕾23次。多选栽秋季开花的茶花品种，或者用赤霉素处理中 晚花品种，使这秋季开花，以躲开茶花花腐真菌的发生高峰期。采用生物防治 方法。在土壤中接种 Sporidesmium sclerotivorum 、Coniotnyrium minitans 两种真 菌，以杀死病菌抱子。不要购买和栽培有花腐病的茶花植株。4. 7 烟煤病【病因及症状】该病是由蚜虫和蚧壳虫危害而诱发的。受害茶花叶片的表面上覆 盖一层病菌的菌丝，形成黑色的“烟煤”层，阻碍了茶花植株的正常光合作用及 气体交换，使其生长发育严重受阻。【发病规律】该病病菌喜低温高湿的环境条件，其中1020C的温度条件最适宜 于病菌的生长。在这个温度范围内，温度越大，病菌繁殖蔓延越快。长期杂草丛 生、湿度大、光照差的茶花林，有利于病害的发生和蔓延。【防治方法】诱发烟煤病的害虫，主要是蚜虫和蚧壳虫等，因此，要防治此病 害必须首先防治茶花的蚜虫和蚧壳虫，害虫灭，病即自然消除。具体方法，可 参见以下“主要虫害及其防治”一节中的蚜虫和蚧壳虫的防治5 金花茶组织培养过程中要注意的几个问题51 继代时苗的剪切 继代时苗的剪切要干净、整齐、一致，不留老叶及旧的愈伤组织，以免引 起褐化及污染。5. 2 培养条件的控制在金花茶的培养过程中，应保持室温20-25C以上，不超过30C ；光照强 度为500-2000lax，有利于茎杆及叶的生长，形成侧生芽；湿易保持在85%左 右。5. 3 防止污染金花茶的组织培养过程中污染的主要有细菌和真菌及褐化。细菌污染主要 表现为在培养基表面形成乳白色环纹及浅黄色环纹；真菌的污染主要表现为 红色、黄色、褐色和白色菌落等，严重的将培养基全部分解，形成融溶的糊 状物，使培养基养分尽失，导致组培苗养分供给不足，生理不调，出现病状， 直至死亡。因此在各个生产过程中，应严格要求在无菌状态下操作。为减少 人为污染，在接种前，工作人员必须很好地洗手，并用75%的酒精擦拭双手， 双手不留指甲，超净台内操作时动作幅度不易过大，所用垫片应严格消毒后 方可使用。6 小结 利用组织培养技术、获得金花茶组培苗，具有分化率高，繁殖系数大且快， 根系较为发达，更利于露地栽培。不仅可快速地获取优质种苗，而且满足了市 场的需求，更有利于其潜在价值的开发利用。植物组织培养技术在实践中取得了引人瞩目的成就，展示了其广阔的发展前景，促使采用该技术大规模生产优 质种苗将成为必然趋势！ 参考文献:1 李 云、林果花菜组织培养快速育苗技术 中国林业出版社.20012 刘 敏、花卉组织培养与工厂化生产 地质出版社.20023 曹孜义、实用组织培养技术教程 甘肃科学技术出版社.1996附图:QQ 交流：330861128