杭州免疫学会议发言

0 静脉免疫球蛋白对早产儿脐血 T 淋巴细胞功能的影响 青岛大学医学院附属医院儿科 张秋业 常红 盛红玲 庄超 1 引 言 研究目的 静脉免疫球蛋白 (IVIG)被广泛应用于感染性和免疫相关性疾病的治疗。 IVIG在新生儿尤其早产儿感染预防与重症感染治疗中疗效确切，但其安 全性也日益受到关注。 近年研究发现足月新生儿应用大剂量 IVIG后， T、 B淋巴细胞增殖反应下 降。而有关早产儿应用 IVIG对其免疫功能影响的研究资料较少。 本研究目的：采用体外实验，选择不同剂量 IVIG作用于早产儿脐血单个 核细胞，观察其对 Th细胞和调节性 T细胞功能的影响，从免疫学角度探 讨 IVIG早产儿用药安全性。 2 材料与方法 研究对象 选择 2011年 6月 2011年 12月在青岛大学医学院 附属医院母孕 32 34周娩出的早产儿 15例为研究 对象，出生体重 1300g 2450g，平均 (1923 349)g。其母亲分娩前 4周内无明显感染 史，未使用免疫增强或抑制剂等药物。所有受试 的早产儿母亲均知情同意。 3 材料与方法 研究方法 标本采集 CBMC制备 CBMC培养 (设置 A组、 B组、 C组） CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞 IFN-r、 IL-4、 IL-10、 TGF-1 4 材料与方法 分 组 IVIG的浓度选择 37 、饱和湿度、 5%CO2条件培养 72h A组 （近生理状态组） B组 （低剂量组） C组 （高剂量组） 6mg/ml 9mg/ml 12mg/ml 5 材料与方法 统计学处理 采用 SPSS17.0统计软件进行统计学处理。 实验数据呈正态分布且方差齐，以 x s表 示。采用单因素方差分析， LSD检验， P 0.05为差异有统计学意义， P 0.01为差异 有显著统计学意义。 6 结 果 组别 例数 IFN- IL-4 A组 15 175.68 86.82 29.04 8.27 B组 15 124.51 56.06 18.01 5.72 C组 15 32.59 26.82 14.44 5.18 注：与 B组和 A组比较 , P0.01；与 B组和 C组比较， P0.01 表 1 不同浓度 IVIG对早产儿脐血 CBMC分泌 IFN- 及 IL-4水平的 影响 1、 不同浓度 IVIG对早产儿脐血 CBMC分泌 IFN- 及 IL-4水平的影响 7 结 果 组别 例数 IFN- /IL-4 A组 15 5.61 2.38 B组 15 8.22 4.21 C组 15 2.41 1.72 表 2 不同浓度 IVIG对 CBMC上清液 IFN- /IL-4比值变化的影响 注：与 B组和 A组比较， P0.01；与 A组比较， P0.05) 。 10 结 果 4、 IVIG对早产儿 CBMC体外产生 IL-10和 TGF-1水 平的影响： C组 CBMC分泌 IL-10水平明显低于 B组 (P0.05)，显著 低于 A组 (P0.01)； B组 CBMC分泌 IL-10水平也明显低于 A 组 (P0.05)。 C组 CBMC分泌 TGF-1水平显著低于 A组 (P0.05)； B组 CBMC分泌 TGF-1 水平明显低于 A组 (P0.05)。 11 图 3 IVIG对早产儿 CBMC体外培 养后 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞表达的影响 0 0.5 1 1.5 2 2.5 A组 B组 C组 结 果 0 5 10 15 20 25 30 35 IL-10 TGF- 1 A组 B组 C组 图 4 IVIG对早产儿 CBMC体外培 养后 IL-10和 TGF-1水平影响 12 讨 论 IVIG除免疫替代外可通过多种机制发挥免疫 调节作用、用于治疗多种免疫相关性疾病 中和清除致病抗原，特别是超抗原 改变免疫复合物的特性，减少免疫复合物的沉积 免疫封闭巨噬细胞和 B淋巴细胞，抑制巨噬细胞的 吞噬功能和 B淋巴细胞的活化 恢复独特型 -抗独特型网络，抑制自身抗体的产生 抑制 T淋巴细胞活化，减少各种细胞因子的产生等 13 新生儿（包括早产儿） Thl/Th2功能状态特点 足月儿 T淋巴细胞功能呈生理性低下状态，且其 Th细 胞亚群功能发育不平衡， Th2类细胞功能相对占优势 早产儿 IFN- 、 IL-4的水平明显低于足月儿，以 IFN- 更为突出 ， 即仍然 Th2亚群功能相对占优势 14 IVIG对新生儿 T细胞功能的影响： 体外实验显示： IVIG10mg/ml可以明显抑制 PHA-P 诱导的足月新生儿 CBMC分泌 IFN- ，也可以抑制 CBMC中 IL-4 mRNA的表达；同时抑制 PHA诱导的足 月新生儿 CBMC分泌 IL-10与 TGF- 1。 IVIG能抑制脂多糖诱导的新生儿单核巨噬细胞的 活化，从而抑制其分泌 IL-6，而 IL-6能促进 T细胞 的活化及向 Thl、 Th2分化，间接证明了 IVIG对 T细 胞尤其是 Thl、 Th2细胞因子的抑制作用 15 IVIG对新生儿肺炎似无明显疗效，大剂量使用 IVIG 可能因其至少短期内具有抑制 T、 B淋巴细胞功能作用 而加重新生儿期暂时免疫缺陷。 对极低出生体重儿过大剂量或短期内反复使用 IVIG预 防感染无明显疗效，而且可能加重暂时免疫低应答反 应，影响细胞免疫的自然发育过程。 16 本实验研究结果： 与近似生理状态组比较，低剂量 IVIG组 CBMC分泌 IL-4显著 降低，而 IFN- 变化轻微；较大剂量 IVIG组 IFN- 和 IL-4 的水平皆明显降低，但以 IFN- 降低更为显著 结果提示： IVIG可抑制早产儿脐血 Thl、 Th2细胞功能，并 且与其剂量相关。低剂量时主要抑制 Th2细胞功能，较大 剂量时 Th1、 Th2细胞均受抑，但以 Th1细胞更为显著 17 本实验研究结果显示： 早产儿 CBMC经不同剂量 IVIG干预后，其 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞表达率无显著差异。 较大剂量 IVIG组 CBMC分泌 IL-10水平明显低于低剂量组和近生理状 态组，低剂量组也明显低于近生理状态组；较大和低剂量组 CBMC 分泌 TGF-1水平均明显低于近生理状态组，但较大剂量组与低剂量 组比较无显著性差异。 结果提示： IVIG对早产儿 CBMC中天然 Treg细胞的数量并无影响 。 但 IVIG能抑制早产儿 CBMC IL-10和 TGF-1的分泌。 IVIG浓度越高， IL-10分泌越少；而 TGF-1当 IVIG达到一定浓度后其抑制分泌程度无 进一步加重。 18 1. 正常 2. 过敏体质伴炎症反应 3. 过敏体质未伴炎症反应 1 2 3 TH1/TH17/TH2/Treg细胞 19 综合国内外文献和本研究结果： 早产儿应用较大剂量 IVIG对其 T细胞功能有明显 影响，可进一步加重 Th1/Th2失衡，抑制 Treg细 胞功能， 加重暂时免疫低应答反应，影响细胞免 疫的自然发育过程，可能增加日后变态反应性疾 病的发生。 提示早产儿应用 IVIG需选择适宜剂量。 20 结 论 IVIG可抑制早产儿脐血 Thl、 Th2细胞功能，并且 与其剂量相关。低剂量时主要抑制 Th2细胞功能， 较大剂量时 Th1、 Th2细胞均受抑，但以 Th1细胞更 为显著。 IVIG不能直接影响早产儿脐血天然 Treg细胞的数 量，但可以通过调节细胞因子 IL-10和 TGF-1的 分泌抑制 Treg细胞的功能且有剂量依赖效应。 21 树突细胞 （ DC） 在机体免疫系统中处于中心地位 作为一种专职抗原提呈细胞， DC可经其膜表面的 Toll样受体（ TLR）等来识别各 种微生物的病原相关分子模式（ PAMP），通过提呈抗原、表达共刺激分子和分 泌相应细胞因子，在指导 Th0细胞分化为 Th1、 Th2、 Th17、 Treg细胞的过程中发 挥了重要作用 22 APC诱导 T细胞亚群分化 Th9 IL-4 iTh9 TSLPR ？ 23 免疫系统和免疫反应 - TOLL样受体