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优秀精品课件文档资料,酶联免疫吸附实验(ELISA),目的和要求,掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项 了解ELISA实验结果的读取和分析,实验原理,借助酶标记抗体(或抗原)在体外与抗原(或抗体)结合,通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原(或抗体)量的多少有关。 特点:灵敏、特异 类型: 双抗体夹心法、竞争法、间接法等,双抗夹心法ELISA,竞争法 ELISA,实验材料,BSA包被的测定板 酶标抗鼠IgG抗体 待检血清,阳性血清,阴性血清 洗涤液: PBS吐温-20 底物液:邻苯二胺(OPD) 终止液:10% H2S04,实验步骤,加入稀释好的待测血清每孔100ul, 37孵育40min,加入100ul酶标抗体, 37孵育30min,洗板3次,每次1min,洗板3次,每次1min,实验步骤,加入100ulTMB底物液避光室温孵育15min,终止反应:每孔加1滴10硫酸,结果观察,注意事项,加样:应将所加物加在ELISA板孔的底部,并注意不可溅出,不可产生气泡。 洗板:每次洗液加入后,应静置1分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。 液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。 底物有毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,尽量避免接触。,将待测血清1:100稀释后,再做倍比稀释到各孔,每孔100l,见表。注意混匀。,100ul,血清稀释及加样,
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