机能实验学：蛙心灌流实验2016

离体蛙心灌流实验一、实验目的:1学习离体蛙心的灌流方法。2观察灌流液中几种离子浓度的改变, 相应受体激动剂和阻断剂对心脏收缩活动的影响。二、实验原理：心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na+、K+、Ca2+等的浓度，pH值和温度），内环境的变化直接影响到心脏的活动。在体心脏还受到交感神经和迷走神经的双重支配。交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体蛙心保持在适宜的理化环境（与其内环境相似的任氏液）中，在一定时间内仍能保持节律性兴奋，产生节律性收缩和舒张。改变灌流液中的离子浓度或加入某些受体激动剂和阻断剂，可以观察到心脏舒缩活动的改变。本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法，并观察Na+、K+、Ca2+三种离子以及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。三实验材料1.实验动物：蟾蜍2.实验试剂与器材RM6240生物信号处理系统、计算机、张力换能器、蛙心夹、铁支架、蛙心插管、玻璃分针、蛙板、蛙类手术器械、滴管、烧杯、棉球、丝线、定滑轮。任氏液、0.65%的NaCl溶液，1%的KCl溶液，1%的CaCl2溶液，3%乳酸，2.5%的NaHCO3，1:10000的肾上腺素，1:10000乙酰胆碱和1:2000阿托品。四实验步骤：A.离体蛙心的制作：1、将毁损脑脊髓后的蟾蜍仰卧位固定在蛙板上，从剑突下将腹部皮肤向上剪开皮肤，打开胸腔，暴露心脏。2、用眼科剪剪开心包膜。3、用蛙心夹夹住心尖部约2mm。4、蛙心插管：在左、右主动脉干下方穿一线，静脉窦与腔静脉交界处做一结扎，结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦，以免心脏停博。（此步骤也可不做）左侧主动脉穿一根线并结扎之，用于心脏插管时牵引。在总主动脉下穿一线，打活结，用于固定离体蛙心。在左主动脉干根部向心脏方向剪一“V”型小切口，将装有少量任氏液的蛙心插管从切口处插入动脉圆锥。将蛙心插管与心尖部呈45度角，并将插管外旋插入心室。见液面上下波动，心室部可触及插管，即插管已进心室，用备用线结扎血管及插管。轻轻提起蛙心插管，在结扎线外侧剪断左、右主动脉干及腔静脉，游离蛙心。将插管中的血液用新鲜任氏液冲洗干净，直至蛙心插管内任氏液完全清澈。B.仪器设备的安装连接：1、将蛙心插管用木夹子固定在铁三脚架上。2、在木夹子的下方，将张力传感器、滑轮固定在铁三脚架上。3、将夹在蛙心尖上的丝线系在张力传感器的簧片小孔上。线的松紧适度。4、张力传感器与BL-420通道1相连。打开心血管实验模块蛙心灌流，开始实验。四、观察项目按照下列顺序添加药品，观察实验并且记录波形：1. 正常的蛙心搏动曲线；2. 用0.65%NaCl替换任氏液；3. 在任氏液中滴加1%CaCl2 1-2滴；4. 在任氏液中滴加1%KCl 1-2滴；5. 在任氏液中滴加1:10000肾上腺素1-2滴；6. 在任氏液中滴加1:10000乙酰胆碱1-2滴；7. 先加入1:2000阿托品，再加入1:10000乙酰胆碱；8. 在任氏液中滴加3%乳酸1-2滴；9. 在任氏液中滴加2.5%的NaHCO3 1-2滴。注：所有加入药品之前都会等到心跳恢复正常波形才开始加药，并且在加药过程中注意肾上腺素跟乙酰胆碱的量。正常的心搏曲线如下图所示：曲线的疏密：代表心率快慢；曲线的顶点：代表心室收缩程度；曲线的基线：代表心室舒张程度。五实验注意事项1. 各药品的滴管分开使用，做好标记，不能混淆。2. 每次给药前要有正常心搏曲线和给药标记。3. 药效出现后立即将药吸出，并冲洗干净，等心脏搏动恢复正常以后再进行下一项实验。4. 心插管不要插得太深，防止损伤心脏。5. 管内液平面应保持一致（用记号笔做好标记）。操作难点：1. 暴露心脏，在左主动脉干下穿线，操作轻柔，避免将动脉弄破；2. 在左主动脉干上合适的部位剪口，剪得过深，容易将动脉剪破；3. 蛙心插管时，插管进入动脉圆锥后，将插管稍作后退 (因主动脉内有螺旋瓣会阻碍插管前进)，并将插管尾端稍向右主动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进，在心室收缩时经主动脉瓣进入心室。