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2 筛选策略,营养缺陷性突变株,与营养要求有关的三类遗传型,2）营养缺陷型的筛选办法,诱变剂处理,淘汰野生型,检出缺陷型,夹层培养法,限量补充培养法,逐个检出法,影印接种法,鉴定缺陷型,菌丝过滤法,抗生素法,淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例较低（百分之几千分之几）。需选用适当的方法淘汰为数众多的野生型菌株，达到“浓缩”极少数营养缺陷型的目的。,过滤法是使能在基本培养基上生长形成菌丝体的野生型留在滤膜上，不能生长的营养缺陷型孢子则能透过滤膜。,营养缺陷型检出逐个检出法,夹层检出法,影印法,限量补充培养法（同一培养皿）,微量蛋白胨的基本培养基上 小菌落是营养缺陷型突变株,生长谱法 方法简便； 回变和污染不影响 结果 测定物质可为粉末 或纸片,缺陷型的鉴定,测定一般应分两阶段： 第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型； 第二阶段：根据第一阶段确定的范围，进一步确定是哪种具体化合物的缺陷型；,组合营养物法,步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）： a. 将多种营养因子编组； b. 将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养； c. 结果分析；,一组：1 2 3 4 5 二组：2 6 7 8 9 三组：3 7 10 11 12 四组：4 8 11 13 14 五组：5 9 12 14 15,营养因子分组编排时注意； 1）每组内无重复的营 养因子 2）每组中应包含只出 现一次的因子 3）每组中其他因子应 分别出现二次,如：,一组：1 2 3 4 5 二组：2 6 7 8 9 三组：3 7 10 11 12 四组：4 8 11 13 14 五组：5 9 12 14 15,营养缺陷型的应用,利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子,抗阻遏和抗反馈突变型,抗阻遏和抗反馈突变型都是由于代谢失调所造成的，在细胞中已经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。,选育结构类似物抗性突变株,结构类似物是指一些和细菌体内氨基酸、嘌呤、维生素等代谢产物结构相类似的物质,主要用于末端产物的积累,抗性突变菌株的筛选,抗生素抗性突变株,条件抗性突变,因环境不同，能表现为野生型菌株的特性和突变型菌株特性的突变称为条件抗性突变或称为条件致死突变。,以温度敏感突变为例： 筛选方法： 用途：常用于提高代谢物产量 原因：是由于某一酶蛋白结构改变后，在高温下活力丧失 重要性：如果此酶为蛋白质、核酸合成途径中所需的酶，则此变异株在高温下的表型就是营养缺陷型。,在富含生物素的培养基中进行发酵时： 先在30（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，适当时间后提高温度（ 40 ，非允许条件），即能获得谷氨酸的过量生产。,应用举例,由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理得到温度敏感变异株Ts88: 30培养时能正常生长 40时死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。,
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