小鼠巨噬细胞

RAW264.7细胞株的相关信息X/ATCC细屋库商家诚信度：*联系人:ATUU细胞咨询乌电话:1.800.638.6597邮件:biomart地址:395 Oyster Point Blvd., Suite国该商羸已通过实名认证RAW 264.7价格:$431.0商 家：ATUU细胞库技术资料：免费索取技术资料民索取报价母丁香通采购保障计划，让您的采购更放心查看详時Designations: RAW 264.7Depositors:WC RaschkeBiosafety Level:2Shipped:frozenMedium &See PropagationSerum:Growth adherentProperties:0rganism:Mus muscuiusmonocyte/macrophageMorphology:Strain: BALB/cTissue: ascitesSource:Disease: Abelson murine leukemia virus-induced tumorCell Type: macrophage; Abelson murine leukemia virus transformedCellularlysozymeProducts:In addition to the MTA mentioned above, other ATCC and/or regulatory permits may be required for the transfer of Fermits/Forms:this ATCC material. Anyone purchasing ATCC material is ultimately responsible for obtaining the permits.Please click here for information regarding the specific requirements for shipment to your location.Biulogical responseApplications:transfection hostReceptors:complement (C3) 1207 AntigenH-2dExpression:Age:adultGAnrlnr-mainThis line V/as established from a tumor induced byAbelson murine leukemia virus. They are negative for surface immunoglobulin (sig-), la (la-) and Thy-1.2 (Thy-1.2) This line does not secrete detectable virus particles and is negative in the XC plaque formation assay. The cells w pinocytose neutral red and 训ill phagocytose latexComments:beads and zymosan. They are capable of antibody dependent lysis of sheep erythrocytes and tumor cell targets. LPS or FFD treatment for 2 days stimulates lysis of eiythrocytes but not tumor cell targets. Data communicated in Feb. 2007 by Dr Janet W. Hartley, indicates the expression of infectious ecotropic MuLV closely related, if not identical, to the Moloney MuLV helper virus used in the original virus inoculum. The cells also express polytropic MuLV, unsurprisingly based on the mouse passage history of the virus stocks PubMed 18177500, ATCC complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbeccos Modified Eagles Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the follov/ing components toPropagation:the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%.Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%Temperature: 37.0CProtocol: Subcultures are prepared by scraping.For a 75 cm2 flask, remove all but 10 ml culture medium (adjust amount accordingly for other culture vessels).Dislodge cells from the flask substrate with a cell scraper; aspirate and add appropriate aliquots of the cellSubculturing:suspension into new culture vessels.Subculthvtion Ratio: A subcultivation ratio of1:3to 1:6 is recommendedMedium Renewal: Replace or add medium eveiy 2 to 3 days.Preservation:Freeze inedium: Complete growth medium supplemented with 5% W1/) DM SOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phaseRelatedRecommended medium (without the additional supplements or serum described under ATCC Me di um): ATCC30-2002Products:recommended serum:ATCC 30-20201135: Ralph P, Nakoinz I. Antibody-dependent killing of eiythrocyte and tumor targets by macrophagecell lines: enhancement by FFD and LPS. J. Immunol. 119: 950-954,1977. PubMed: 8940311207: Raschke WC, et al. Functional macrophage cell lines transformed byAbelson leukemia virus. Cell 15: 261-267.1978. PubMed: 21219832443: Denlinger LC, et al. Regulation of inducible nitric oxide synthase expression by macrophage purinoreceptors and calcium.丄日皿.ChEm. 271: 337-342,1996. FubMed: 855058332466: Hambleton .J, et al. Activation of c-Jun N-terminal kinase in bacterial lipopolysaccharide-stimulated macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2774-2778,1996. PubMed: 861 011632553: Taylor GA, et al. Identification of anovel GTPase, the inducibly expressd GTPase, that accumulates in response to interferon gamma.丄 Eli匸il. Chem. 271: 20399-20405,1996. FubMed: 8702776For-Profit: $2Non-Profit: $2DulbEccos Modified Esigl-s Medium (DMEM) (ATCC卷已0-2002巴Qty:1Add to CartATCC1-1 Number: 30-2002-Quaiitity: 500 mLStorage: Store medium at 2C to &C 川 the dM、w/ien not in use.Applications:Duibeccos Modified Eagles Medium (DMEM modified to contain 4 m/W L-giutamine. 4500 mg/L glucose, 1 m/W sodiumand 1300 mg/L sodium bicarbonate.Formulation: Foe?輛&杯onProduct Format: 500 mLComments:NOTE: This reduced level of sodium bicarbanate (NaHCO3f 1.5 g/Q is intended for use in 5% CO2 in air. Additionai sodium bicarbonate may be required for use in incubators containing higher percentages of CO2.Subculturing ProcedureSubcultures are prepared by scraping For a 75 cm2 flask; remove all but 10 ml culture medium (adjust amount accordingly for other culture vessels). Dislodge cells from the flask substrate with a cell scraper; aspirate and add appropriate aliquots of the cell suspension into new culture vessels.Subcultivation Ratio: 1: 3 to 1: 6Medium RenewalReplace or add medium every 2 to 3 days.Complete Growth MediumThe base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbeccos Modified Eagles Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10% This medium is formulated for use with a 5% CO2 in air atmosphere. (Standad DMEM formulations contain 3.7 g/L sodium bicarbonate and a 10% CO2 in air atmosphere is thenecommended).ATCC tested fetal bovine serum is available as ATCC Catalog No. 30-2020 and ATCC Catalog No. 30-2021 (100ml).ATCGl美国模式培养物集存库(AmeriCanWpe cul ture collec tion)的简写 Complete growth medium described above supplemented with 5% (v/v) DMSO.收到冷冻管细胞的处理方式1. 收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形，若有请立即通知。细胞株请 尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于- 70C，隔夜后，移到液氮)。2. 收到T25 flask细胞的处理方式于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask均加满培养基。2.1. 检查flask外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。2.2. 将原封之T25 flask静置于37C， 5% CO2培养箱中，使细胞回温至37C，并让 运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。2.3. 隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，（取出之培养基可以再使用），仅 留约5-10ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。RAW2647 细胞株的 Cell Culture一、RAW264.7细胞培养的特点1、RAW264.7细胞一般为圆形或椭圆形，功能活跃时，可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形, 染色较深。贴壁特别牢固。2、RAW264.7具有很强的吞噬能力，当吞噬抗原后，细胞会释放趋化因子，进一步促进细胞 伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、 长梭形，镜下会看到具有细长伪足的小细胞被类似上皮的梭形大细胞取代。3、每次传代都很难消化下来。用力过大则对细胞损伤较大，这种细胞传代时接种密度要大， 否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形，并且不能回复，这是培养这种细胞时 最需要注意的问题。4、对于RAW264.7细胞他的声场时喜欢结伴。正常生长状态应该是一小片一小片的生长，片 片之间不连接，等到长到更多更密的时候会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控 制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。5、RAW264.7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴很多，刚贴壁是细胞呈圆形，折光 度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后，部分细胞会变成类 似四角形，伸出伪足之类的。这个时候就是提醒你注意传代了，这部分细胞如再不传代，很 容易就老化掉。二、RAW264.7细胞传代1）将培养瓶内旧的培养液弃掉，然后用D-Hanks液洗两次，（一定要洗干净，以免影响胰 酶的消化作用）1含钙镁含酚红H：=LTlkE ?含钙槎，不含酬红D- H：=mkE? 不含钙镁 含酚红H_ H：=LrLkEJ不含钙镂不含酚红EFBS不含钙镂不含酚红FBS不含钙镂不含酚红10*FBS不含钙镂不含酚红g/Lg/Lg/Lg/L旳g/Lg/LNal888808SONa2HP0.12H2C0. 1260 1260. 1260. 162. 929 2N200000CKClQ.40.40.40.40.20.22KH2P040. OS0.060.060.060.20. 242. 4Mg5040. 0980 0980o口00Ca120 140. 14000.601111000酚红0.0100.C10G00滋加N3HC030：35C.350.350.35Q2）加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培养瓶加0.4ml, 37度消化5min,镜下看到细胞变圆,间隙增大。（值得注意的是该细胞对机械损伤比较敏感） 3）立即加含10%FCS的培养液终止消化，用细胞刮刀轻刮，注意，这时候用吸管吹不下来, 但是刮刀却很容易刮下来，而且对细胞的损伤极小 4）离心，弃上清，加新的培养液（10%FCS），小心吹匀，分装入新的培养瓶三、RAW264.7细胞冻存及复苏我之前也养过R_aw264.了的细胞，冻存和复苏的方法和你都有点不同拣存时拣存液为5010%DMSO, 40%培养基，啟入拣存盒后4C30min,直接转A-80C,过夜后转入液氮。复苏时将液氮中细胞直接&A37-C左右水浴中快速解冻，后加典5倍悴积培养基，800rpm3min,转典培养瓶中培养成功率基本上99.9%,役什么间题.（一）细胞冻存1. 配制冻存培养液；（通用的为培养基：血清：DMS0=7： 2： 1,但其中的血清可进行 调整，如上面的仁兄用的4： 5： 1，比例过高）2. 取对数生长期的细胞（冻存前一天换液），用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来， 悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中；3. 离心 lOOOrpm, 5min；4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细 胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5X106/m llX107/ml；5. 将细胞分装入冻存管中，每管11.5 ml （不超过冻存管容量的80%）；6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1-2C/min；当温度达-25C以下时，可增至 -5C-10C/min；到-100C时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20C 冰箱2h，然后放入-70C冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。（具体操作为4 C 20min，-20 C30min, -70C过夜，转入液氮中）（二）细胞复苏1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37C温水中，并不时摇动令其尽快融化。（1min 以内溶解完毕，不能将口进入水面下）2. 从37C水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加 10倍以上培养液，混匀；3. 离心，lOOOrpm, 5min；4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培 养瓶，37C培养箱静置培养；（复苏时细胞密度稍大，可提高复苏效率）5. 次日更换一次培养液，继续培养。（可更换一半培养液，避免跨度太大，影响细胞 状态）三）接种总结下各种孔板细胞接种呈仅供参考細胞培养瓶板）接种呈生长而积容蜀细胞数（大约）96孔板4-5X10 435mtTi 培养 JTTI1 Xio 648孔板1.3X10 560inm 培养JUT.2.6X10 624孔板2.5X10 5lOOmni 培养JUT.7X10612孔板5X 10 5150iiitn 培养JTH.1.8X1076孔板L2X1Q6细胞瓶面积容量12.5cm225ml25cm25&ml35gtti275ml75 ctn2150ctn2700nil细脳数日5X10 51X1062X10 64X 10 61.1X107补充：不同孔板.所如焙养液的液而都不宜丈深，一般在23吋 范闱，结合不同 孔的底ini积就可算出各培养孔的适宜加液呈参考下表）.若加液量过多会影响 气体（氧气）交换而且在搬动过程中易溢岀血成污染。具体所加细胞密度恢实 验的日的不同灵活掌握。传代细胞接种密度及接种量参考-VessekSmface Aiea(cm2)?.0r| 103/cm2+6.0r|103/cm2total volume of liieclium96 - welk0.321600180024-well、2.001.00 XIO4120 X 10 铅0.54(0.7)-12-well、4.012.00 XIO42+40 X 104J1-2(1.5)6-well9.624.81 Xiol5+56X 10 铅2-3(2.560mm28.271.41X111.70X 10M3-5(5)T2*25.001.25X10l+50X 曲4-5(5)T7*75.003.75 X1H4.50X 10M12-15(15)T175175.008.75X10l+05X 1035-40(40培养器皿心底面积（cm2）+加培养液量血）心可茯细胞量卫96孔培养板卫0.珈0. 21024孔培养板卩2P1. Z5X10V12孔培养板心4.胖2. 2106孔培养板心9. 62.沖2.5X104乩培养板心珈5. 27X103.北皿培养皿卩3. 22.0X10阮m培养皿14215. E5.2X10Sm培养皿心4410. 0心12.2X106LOck培养皿门5510. 213/7X1 小第啦塑料培养瓶卩25.冲5X10北m塑料培养瓶卩押15302X10茨皿玻璃培养瓶P4.冲3X10100cm玻王离培养瓶卩37.共10. 026X10250cm培养瓶卩7815. 0心2X102o00cie旋转培养瓶#7001002602.5X10B四、RAW264.7细胞形态不好时的处理方法1. 倒掉旧的培养基，加入 3ml 新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走 然后再加入 3ml 的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后 吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。2. 把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱 内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20 分钟，30 分钟观察一次。选择 一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培 养基，加入 3ml 新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况 以及形态。我称之为“二传”。3. 如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合 细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反 之亦然。不明之处:培养之前，一切与细胞接触的玻璃器皿和器具都要进行过去热源处理（200-250C 烘烤 4-6h）?RAW264.7 细胞株 Cell Culture 的材料（一）仪器1. 净化工作台2. 离心机3恒温水浴箱4. 冰箱（4C、-20C、-70C）5. 倒置相差显微镜6. 培养箱7. 液氮冰箱（二）玻璃器皿1. 吸管（弯头、直头）2. 培养瓶3. 玻璃瓶（250ml、100ml）4. 废液缸（三）塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 胶塞4. 移液管（10ml）5. 15ml离心管6. 冻存管（12ml）（四）其他物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板3. 记号笔4. 医用橡皮膏5. 移液枪（五）试剂1. D-Ha nks 液2. 胎牛血清3. 培养液4. 双抗（青霉素、链霉素）5. 胰蛋白酶（0.25%）6.7.4%NaHCO37. DMSO （分析纯）或无色新鲜甘油附 1. 胎牛血清品牌整理 第一类，最高级别，是专门用于干细胞的特级胎牛血清1、Hyclone 的特级胎牛血清 目前，性能最好的血清，还是要说说 Hyclone 的特级胎牛血清，货号是 SH30070.03，它是 Hyclone 的“招牌菜”。Hyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号SH30070，是世界上唯一经过40 纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含 量GOEU/ml,血红蛋白含量G0mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。2、Gibco 的特级胎牛血清稍次一点的是 Gibco 公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是 16000-044，是 100nm 过滤 3 次，内毒素和血红蛋白含量都可以与 Hyclone 的 SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，所 以渠道特殊。3、TCB 的特级胎牛血清TCB（Tissue Culture Biologicals）公司作为一家生物行业类的著名供应商，成 立于 1978 年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亚。每一批的原材料都经 过严格筛选，所有的产品都在 FDA 认证的 cGMP 车间进行！4. Bioind 特优级胎牛血清血源来自北美和澳大利亚 BioInd 公司的生产完全符合 GMP 的要求，并通过 IS09000:2001和ISO 13485:2003质量认证。以安全，稳定，高效为原则的Biol nd 公司，所有的产品质量均完全符合国际标准。Biological Industries主营细胞培 养类产品， BioInd 工厂加工的胎牛血清均符合 USDA 标准及欧洲标准血清。根 据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）和口蹄疫（FMD） 疫情的国家。 Biological Industries 三步滤菌处理法，最后的过滤步骤为连续通 过三个 100 纳米的滤膜。血清生产的洁净级别为 100 级。所有分装工作台都通 过高效微粒空气过滤器过滤，并保持正压分装环境要对总微粒、悬浮微粒数和压 力进行监控。分装之后，终产品迅速-20 度冻存，并隔离，直到所有的质量控制 检测完成。第二类，优等胎牛血清1、Hyclone 的加拿大优等胎牛血清性价比最高 的 是 Hyclone 加拿大优等胎牛 血 清 （ CharacterizendFBS ） SH30396.03 血清采自加拿大，由 hyclone 公司总部的员工采集加工，采集方法， 加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产 的。经过3次100nm过滤，内毒素含量s25EU/ml，血红蛋白含量S25mg/dl2、Hyclone 的南美优级胎牛血清大体与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，货号是SV30087.02，该 胎牛血清来源于南美洲，以封闭的心脏穿刺方式采集，产品经 3 次 100nm 过滤， 经严格检测确保无支原体，细菌病毒检测依据美国药典（USP）和美国联邦法规 第九篇（9CFR），内毒素含量10 EU/ml，血红蛋白含量20 mg/dl，完全符合 美国 HyClone® 优等胎牛血清的检测标准。3、Gibco 的澳大利亚胎牛血清情况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。 这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。因 为，此胎牛血清属于澳大利亚生产的，不在疫区，可以正常报关进口，目前没有 受到任何影响，所以，就目前而言，算是最好的胎牛血清了，有不少客户都此血 清来培养干细胞，效果还是比较不错。4、TCB 的优级胎牛血清情况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是2300元/500ml左右。 这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。第三类，一般级别的进口胎牛血清1、Hyclone 的南美胎牛血清目前，市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS)SV30087，此血 清采自南美，在国内(兰州)过滤并测试检验，经三次 100 纳米过滤，根据中 国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量GOEU/ml,血红蛋白含量s20mg/d。 此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说 有少数人用于干细胞培养的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用 于干细胞，2、Gibco 的南美胎牛血清这款血清，是Gibco针对Hyclone南美胎牛血清做的，价格比较贵，好像是1780元/500m。3、Gemini 的胎牛血清4、TCB 的胎牛血清5、PAA的胎牛血清6、JRH 澳洲胎牛血清第四类，国产的各种系列胎牛血清 国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血 的，而国内都是剖腹产出胎牛， 8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。 价格便宜但是遇到的问题非常多。附 2. Hyclone 液体培养基普通液体培养基列表描述货号包装储存温度BME 培养基(Basal Medium Eagle)EBSS*，含L-谷氨酰胺。 SH30157 01500 ml2-8Co SH30157.021000 ml2-8CDMEM 培养基(Dulbeccos Modified Eagles Medium)咼糖，含4.0 mM L-谷氨酰胺，不含丙酮酸钠。 SH30022.01B500 ml2-8C SH30022.FS6 x 500 ml2-8C SH30022 02B1000 ml2-8C SH30022.LS6 x 1000 ml2-8C高糖，不含L-谷氨酰胺与丙酮酸钠。 SH30081.01500 ml2-8C SH30081.FS6 x 500 ml2-8C SH30081 021000 ml2-8C SH30081.LS6 x 1000 ml2-8Co SH30081 0320 L袋装2-8Co SH30081 0410 L袋装2-8C高糖，含4.0 mM L-谷氨酰胺、丙酮酸钠。SH30243.01B500 ml2-8CSH30243.FS6 x 500 ml2-8CSH30243 021000 ml2-8CSH30243.LS6 x 1000 ml2-8CoSH30243 0310 L袋装2-8CoSH30243 0420 L袋装2-8C高糖，含L-谷氨酰胺、HEPES，不含丙酮酸钠。SH30249.01500 ml2-8CSH30249 021000 ml2-8C高糖，不含钙、镁。SH30262.01500 ml2-8CoSH30262.021000 ml2-8C高糖，含L-谷氨酰胺，不含酚红与丙酮酸钠。SH30284 01500 ml2-8CSH30284 021000 ml2-8C高糖，含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺。SH30285.01500 ml2-8CSH30285 FS6 x 500 ml2-8CSH30285.021000 ml2-8CSH30285.LS6 x 1000 ml2-8CoSH30285 0320 L袋装2-8CoSH30285.0410 L袋装2-8C高糖，改良型，不含酚红、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺。oSH30585.01500 ml2-8CSH30585 021000 ml2-8C高糖，改良型，不含酚红、L-谷氨酰胺，含丙酮酸钠。SH30604.01500 ml2-8CSH30604.021000 ml2-8C高糖，含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺、甲硫氨酸、胱氨酸。OSH30606.01500 ml2-8CCSH30606 021000 ml2-8C高度改良，含丙酮酸钠、25 mM HEPES，不含L-谷氨酰胺。OSH30563.01500 ml2-8COSH30563 021000 ml2-8C高糖，含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺、磷酸盐。OSH30607.01500 ml2-8C低糖，含4.0 mM L-谷氨酰胺、110 mg丙酮酸钠。SH30021.01B500 ml2-8CSH30021 FS6 x 500 ml2-8CSH30021.021000 ml2-8C含 2.50 mM L-谷氨酰胺、15 mM HEPES。SH30023 01B500 ml2-8CSH30023 FS6 x 500 ml2-8CSH30023.021000 ml2-8C含HEPES，不含L-谷氨酰胺。SH30126.01500 ml2-8CSH30126 FS6 x 500 ml2-8COSH30126.021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺、HEPES、丙酮酸钠。SH30261.01500 ml2-8CSH30261 021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺，不含HEPES oSH30271.01500 ml2-8CSH30271.FS6 x 500 ml2-8CSH30271 021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺，不含HEPES、酚红。SH30272.01500 ml2-8CSH30272.021000 ml2-8CHams培养基(Hams Nutrient Mixture)F10培养基，含L-谷氨酰胺。SH30025.01500 ml2-8COSH30025 021000 ml2-8CF12培养基，含1.00 mM L-谷氨酰胺。，1XSH30026 01B500 ml2-8CSH30026.FS6 x 500 ml2-8CSH30026 021000 ml2-8CF12培养基,Kaighns改良型。SH30526.01500 ml2-8COSH30526.021000 ml2-8C昆虫培养基(Insect Media)Graces无添加剂培养基OSH30610.01500 ml2-8COSH30610 021000 ml2-8CTNM-FH培养基SH30280 02500 ml2-8CSH30280.031000 ml2-8CIMDM 培养基(Iscoves Modified Dulbeccos Medium)含L-谷氨酰胺、HEPES，不含a-硫代甘油。SH30228 01B500 ml2-8CSH30228.FS6 x 500 ml2-8CSH30228.021000 ml2-8C不含L-谷氨酰胺。SH30259 01500 ml2-8CSH30259.021000 ml2-8CLeibovitz 培养基(Leibovitz Medium)L-15培养基，含2.05 mM L-谷氨酰胺。SH30525 01500 ml2-8CSH30525.021000 ml2-8CM199 培养基(Medium 199)EBSS*，含L-谷氨酰胺。SH30253 01B500 ml2-8CQSH30253.FS6 x 500 ml2-8CSH30253 021000 ml2-8CHBSS*，含L-谷氨酰胺。QSH30233 01100 ml2-8CQSH30233.02500 ml2-8CHBSS*,含L-谷氨酰胺、L-氨基酸。QSH30330 01500 ml2-8CQSH30330 021000 ml2-8CMcCoys 5A 培养基(McCoys 5A Medium)含L-谷氨酰胺。SH30200 01500 ml2-8CSH30200 FS6 x 500 ml2-8CSH30200.021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺，不含酚红。SH30270.01500 ml2-8CQSH30270.021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺、HEPESoQSH30602.01500 ml2-8CQSH30602 021000 ml2-8CQSH30602.03100 ml2-8CMEM 培养基(Minimum Essential Medium)EBSS*，含2.0 mM L-谷氨酰胺。SH30024 01B500 ml2-8CSH30024.FS6 x 500 ml2-8CSH30024.021000 ml2-8CSH30024 T .S6 x 1000 ml2-8CEBSS*，含L-谷氨酰胺，用于悬浮培养。QSH30235.01500 ml2-8CQSH30235 021000 ml2-8CEBSS*，不含L-谷氨酰胺。SH30244 01500 ml2-8CSH30244.FS6 x 500 ml2-8CSH30244.021000 ml2-8CQSH30244 LS6 x 1000 ml2-8Ca改良型，含L-谷氨酰胺、核糖核苷及脱氧核糖核苷。SH30265.01B500 ml2-8CSH30265 021000 ml2-8CSH30265 FS6 x 500 ml2-8Ca改良型，不含L-谷氨酰胺、核糖核苷及脱氧核糖核苷。SH30568.01500 ml2-8CCSH30568 FS6 x 500 ml2-8CQSH30568 021000 ml2-8CRichters改良型，不含酚红。QSH30600.01500 ml2-8CQSH30600 021000 ml2-8CRichters改良型，含L-谷氨酰胺、酚红。SH30601 01500 ml2-8COSH30601.021000 ml2-8C用于悬浮培养，不含L-谷氨酰胺、氯化钙及镁。CSH30603 01500 ml2-8COSH30603.021000 ml2-8CRPMI 1640 培养基(RPMI 1640 Medium)IX，含 2.05 mM L-谷氨酰胺（冋 SH30091 ）。SH30027 01500 ml2-8CSH30027.FS6 x 500 ml2-8CSH30027 021000 ml2-8CSH30027 T .S6 x 1000 ml2-8CIX，含 2.05 mM L-谷氨酰胺（冋 SH30027）。OSH30091.0120 L袋装2-8COSH30091 0210 L袋装2-8C不含L-谷氨酰胺SH30096 01500 ml2-8CSH30096.FS6 x 500 ml2-8CSH30096 021000 ml2-8COSH30096 LS6 x 1000 ml2-8COSH30096.0410 L袋装2-8COSH30096 0520 L袋装2-8C含HEPES，不含L-谷氨酰胺。OSH30203.05500 ml2-8COSH30203.061000 ml2-8C含L-谷氨酰胺、25 mM HEPES。SH30255 01500 ml2-8CSH30255.FS6 x 500 ml2-8CSH30255 021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺、不含酚红。SH30605 01500 ml2-8COSH30605.021000 ml2-8C含L-谷氨酰胺，不含硝酸钙。SH30809.01B500 ml2-8CSH30809 02B1000 ml2-8C货号标记说明：“” 表示常规生产产品。“。”表示按客户订单生产产品，有一定的最小定制量并需要一定时间。“ ” 表示未储存类项目，需要一段时间供给。货号后标有“B”的为赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司生产，其他的为美国原产。附 3. 文章中的写作Cell culture and transiection|RAW 264.7 cells (a murine macrophage cell line) were purchased from American type culture collection (ATCC) and cultured in DM EM supplemented with 1() % (v/v) FBS (HyClone, Logan, LIT, USA). For all the experiments, cells were subjected to no more than eight passages. One day before transfection, RAW 264.7 cells were plated at a density of L5 x I (f cells per ml in DMEM without antibiotics. Cells were transfected with synthetic miR-l 55 mimics (M, 80 nM), miR-l55 mimics plus inhibitor (M + I, 8() + l(K) nM), miR-155 mimic negative control (MNC, 80 nM), or niiR-155 mimic negative control plus miR-l 55 inhibitor negative control (M + I)NC, 80 + 100 nM) (GenePharma, Shanghai, China) in antibiotic-free opti-MEM medium using Lipofectamine 2XK) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). To facilitate overex- pirssion of FADD, cells were transfected with FADD- exptrssing vector using Lipofectamine 2(KK).2.2. Cell Culture und Virus Cufture1. RAW264.7 mouse macrophage wa& purchased from American lrpe Culture Collection (ATCC number TIB-71) and were grown on plastic in Dnlbeccos modified Eagles medium (DMEM) with 10% fetal bovine 5rum (FBS) (Sigma-Aldrich, St. Loui土 MO)h 100 units of peniciLLtri! and 100 g/mL of streptomycin at 7DC under 5% CO2. Cells were u&ed at to 5 passages. Baby humhr kidney (BHK) clls and C6/36 cells were cultured in DMEM Invitrci耳亡n Life Technologies) containing FBS. DENV2 PL046 strain was nwntaiDfd in C6/36 cells. Monolayers of C6/J56 cells were incubated with DENV at a multiplicity