高效液相色谱仪验证

中心化验室型高效液相色谱仪验证（一）验证方案（二）验证报告中心化验室型高效液相色谱仪验证方案(SOP-YZ-?)制定日期:审查日期:审核日期:批准日期:方案制定人:方案审查人:方案审核人:方案批准人:1、概述2、验证目的3、验证实施小组成员及有关责任4、验证文件5、合格标准6、验证方法和步骤7、验证结果分析和综合评价8、最终评价9、验证周期10、验证记录1、概述高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 是 一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂 的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测 器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由 于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分 析速度快的特点。高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统 组成。其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液 相色谱仪。2、验证目的检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。3、验证实施小组成员及有关责任验证实施小组组长?？负责协调及异常情况的处理；操作员？?？负责验 证的具体操作工作；QA?负责监督实施本方案。4、主要验证文件高效液相色谱法(SOP-ZL-?)、中华人民共和国国家计量检定规程 液相色谱仪(JJG705-2002)、UV-VIS 检测器 SPD-20A/SPD-20AV 说明书、溶液传输单元LC-20AB说明书、中华人民共和国药典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作说明书 安装手册和维修手册。5、合格标准验证部件验证项目合格标准输液泵流量设定值误差ss0.5ml/min: V5%； 1.0ml/min: V3%；2.0ml/min: V2%流量稳定性误差sR0.5ml/min: V3%； 1.0ml/min: V2%；2.0ml/min: V2%柱温箱柱箱温度设定值误差ATsV2C柱箱控温稳定性TC寸C自动进样器进样量准确度误差2%检测器基线噪声W 2X10-5AU最小检测浓度W1X 10-7g/mL(萘的甲醇溶液)基线漂移W5X10-4AU/h整机性能定性测量重复性误差RSDW0.5%定量测量重复性误差RSDW1.0%6、验证方法和步骤6.1验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱 温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。6.2验证步骤6.2.1输液泵泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差Sr的检定将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量 设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设 定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动 相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算Ss和Sr。表1流量设定值(mL/mln)0.51.02.0测量次数333流动相收集时间(mln)1055Ss=(FmFs)/FsX100%(1)SR=(Fm Fmin)/FX100%(2)式中：S 流量设定值误差(%)；SS 流量稳定性误差(%)； RFm=(W2W1)/ p t t，流量实测值(mL/mln)；W 容量瓶+流动相的重量(g)；2W 容量瓶的重量(g)；1Fs流量设定值(mL/mln)；p t实验温度下流动相的密度(g/cm3)；t收集流动相的时间(mln)；Fmax同一组测量中流量最大值(mL/mln)；Fmin同一组测量中流量最小值(mL/mln)；F同一组测量值的算术平均值(mL/mln)。输液泵泵流量设定值误差ss、流量稳定性误差Sr的检定记录见附录一6.2.2柱温箱柱箱温度设定值误差 Ts和控温稳定性Tc的检定将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35C和45C进行检定。按仪器 说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每 隔10mln记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为 Ts， 7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。柱温箱柱箱温度设定值误差 Ts和控温稳定性Tc的检定原始记录见附录二。6.2.3自动进样器进样量准确度误差的检定取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样 器上让其进样10次，每次50p 1。进样完成后再精密称定其重量，由重量差 计算进样量准确度。自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录见附录三。6.2.4检测器的检定6.2.4.1检测器基线噪声和基线漂移的测定取七色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0m1/min，检测器波长设 定为254nm，开机预热，待仪器稳定后(约60min)记录基线60min，从30min 内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。6.2.4.2检测器最小检测浓度的测定取七色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0m1/min，检测器波长设 定为254nm,开机预热，待仪器稳定后取1X10-7g/m1的蔡/甲醇溶液进样20p 1， 记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度cl。公式如下:CL=(2XNdXC)/H式中CL最小检测浓度，g/m1；Nd基线噪声峰峰高，mm；C标准溶液浓度，g/m1；H标准溶液峰峰高，mm。检测器的检定原始记录见附录四。6.2.5整机性能的检定取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0m1/min，检测器波长设 定为254nm （当选用蔡时）或272nm （当选用咖啡因时），柱温设定为40C。开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的蔡/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇 溶液进样10M 1,连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算 其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。整机性能的检定原始记录见附录五。7、验证结果分析和综合评价验证部件验证项目合格标准验证结果结论输液泵流量设定值误差SS0.5m1/min: 5%1.0m1/min: 3%2.0m1/min: 2%流量稳定性误差SR0.5m1/min: 3%；1.0m1/min: 2%；2.0m1/min: 2%柱温箱柱箱温度设定值误差T S2C柱箱控温稳定性TCW1C自动进样 器进样量准确度误差W2%检测器基线噪声W 2X10-5AU最小检测浓度W1 X 10-7g/mL（萘的甲 醇溶液）基线漂移W5X10-4AU/h整机性能定性测量重复性误 差RSDW0.5%定量测量重复性误 差RSDW1.0%验证小组签名人员日期部门8、最终批准批准人：批准日期： 年 月 日9、验证周期10、验证记录（1）输液泵泵流量设定值误差ss、流量稳定性误差Sr的检定记录（2）柱温箱柱箱温度设定值误差AT和控温稳定性Tc的检定原始记录（3）自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录（4）检测器的检定原始记录（5）整机性能的检定原始记录附录一泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定原始记录S1液相色谱仪型号：泵型号：流动相：色谱柱：检定日期：检Fs0.5ml/minL0ml/min第一次第二次第三次第一次第二次第三次1W1W2tTP.Fm=(W2W1)/ p t tSs=(FmF)/FsX100%平均ssF= (Fmi+ Fm2+ Fm3) /3f maxfminSR=(Fm Fmin)/FX100%此项检定结论:附录二柱温箱柱箱温度设定值误差 Ts和控温稳定性Tc的检定原始记录液相色谱仪型号：柱温箱型号：数字温度仪型号：t设定35 C45 C时间读数时间读数稳定时第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次t平均t最大t最小A Ts= T平均-T设定Tc= T最大- T最小此项检定结论:附录三液相色谱仪型号：自动进样器型号：进样前进样瓶加水的总重：W1=g；进样后进样瓶加水的总重：W2=g；检定温度： C,水的密度p g/ml；进样量准确度误差=(W1- W2)-(50X10X10-3Xp )/ (50X10X10-sXp ) X 100%此项检定结论:附录四液相色谱仪型号：检测器型号：流动相： 流速： 色谱柱： 蔡甲醇标准溶液浓度C： 配制人： 配制日期： 基线噪声:N 二d基线漂移：H=最小检测浓度的计算CL=(2XNdX C)/H此项检定结论:检定人：复核人:检定日期:附录五整机性能的检定原始记录仪器型号：流动相：色谱柱：检测波长：标准溶液类型：浓度：配制人：配制时间：定性测定（保留时间）定量测定（峰面积）第一次第二次第三次第四次第五次第六次平均值测量误差的RSD备注：RSD采用EXCEL函数表格计算此项检定结论: