GPC操作规程技术学习

排阻色谱SEQ分析排阻色谱SEQ分为GPC（凝胶渗透色谱）和GFC（凝胶过滤色谱）GPC主要用于聚合物领域，GFC主要用于生物科学领域。以下介绍岛津GPC分析系统特点：以分子量大小分离：分子量大的先洗出，小的后洗出。按保留时间计算分子量分布。专用色谱柱分类：以分子量大小分类（表明分离线性范围）。以流动相分类使用四氢呋喃作流动相。使用DMF作流动相。（二甲基甲酰胺）使用氯仿作流动相。使用水性溶液作流动相。根据色谱柱线性分布，色谱柱可以串连使用，先连接分子量大的，再接分子量小的。岛津GPC Vol.1.02软件操作首先，在CLASS-VP中对标准品进行色谱分析，优化积分后，得到理想的色谱图和数据，即去掉杂质峰和负峰（Method Integration Events中Min Area最小峰面积，Intergate off禁止积分，WIDTH半峰宽 等等）。然后进入GPC分析软件：1 点击开始程序GPCGPC for CLASS-VP出现下面对话框：在Data filename下为从CLASS-VP中由色谱文件（*。dat）转换成的对应GPC文件起名和排序号 *.D* （如DLSICA。D01）。然后点击OK 进入下面菜单：在窗口中有以下七个处理功能图标： GPC GPC Mol GPC Super Single File configuration Method Weight Batch Impose Chrmatogram Manager GPC配置 GPC方法 分子量 批处理 叠加 单色谱 文件管理上述图标中选择 GPC GPC方法 即可以满足日常分析应用。 Method2下面再返回到CLASS-VP工作站中操作，先将其它界面最小化，如图：如图：选择FileDataOpen打开标准品色谱数据选择数据文件后，打开选择FileMethodOpen 打开分析该标准品的方法（已优化积分完毕）选择AnalysisAnalyze 分析计算该标准品一次。3点击最下方图标栏中的GPC for CLASS-VP图标，如图：进入下面界面：双击GPC方法 图标，进入下面菜单：该菜单分为三部分：Calibration Curve Table为校准曲线表，编辑标准品保留时间Time，分子量Molecular等参数Calibration Curve（Linear）标定后，显示校准曲线。Chromatograph 显示打开的标准品GPC格式图谱。4如图选择FileLoad LC Data file 选择（2）中分析标准品时转换的GPC数据文件，确定 后显示下面界面：点击该界面中的 GET 键，得到下面界面：提问是否Clear Calibration Table ？（清除现在的校准表？）选择 是 显示下面界面：在Calibration Curve Table校准曲线表中的Molecular 项中，分别键入各个组分峰的分子量然后点击该表左下角的 Draw 显示得到拟合曲线的界面： 在该界面（Calibration Curve（Linear）中，显示标定后的校准曲线。如果校准曲线拟合的不理想，可以点击该曲线左下角的 Type 键，显示下面界面，选中合理的拟合类型： 点击 OK 得到下面重新拟合后的曲线：修正：*如果样品与标准品一致（例如皆为聚苯乙烯）则不需修正。在上面界面中选择ParameterGPC Parameter 如图：出现下面界面：Name Q factor V- V-k 样品名 粘度系数 标准品值 标准品k值 如无则粘度系数Q和， k 皆输入1 ，点击 OK 校准曲线立即得到修正。*如果样品与标准不一致（标准与样品不一致）则需修正。在上面界面中选择ParameterMH Conversion如图：出现下面界面： V 粘度系数（据MH公式手册查出键入），Vk 粘度系数（据MH公式手册查出键入）PolymerA 标准品的，k 值。PolymerB 样 品的，k 值。点击 OK 校准曲线立即得到修正。如果查不到样品的粘度系数， k 值，则不做该相修正。粘度修正 ParameterMH Conversion在说明书后有介绍，请仔细阅读。 有时样品，k值化学手册查不到，可以不修正，则最后样品的分析报告，为相对于标样(如聚苯乙烯)的分子量分布。（Mn ，M/W等）保存校准曲线：点击FileSave File As出现下面界面：在File name 中键入*在Path name中确定保存路径: : :点击Save 键，该校准曲线已保存完毕，将来使用者再做相同样品，相同条件的GPC分析时可以随时打开调用，不用每次分析都做标准品分析标定。需要注意的是，如果分析条件发生变化（如流动相，流速等），出峰的保留时间产生偏移较大时，应该重新分析标准品标定校准曲线，以保证分析结果的准确。5样品的GPC 分析：现在可以返回到CLASS-VP中对样品进行色谱分析，分析结束后，执行分析计算一次即可。也可以调入已做完的样品色谱数据，执行分析计算一次，都会得到相应转换的GPC 文件。然后进入GPC 方法界面，点击如图Calculation GPC Calculation：出现下面界面：在LC Calc。Data ：中点击图标打开需要的样品GPC文件名在GPG Method ：中确认所用的校准曲线文件名，如下图：点击 确定再点击上面界面中的Calculation 键，显示下面界面：样品的GPC计算即告完成。6分析报告检查：点击View菜单中各项点击ViewSlice 检查切片数据点击ViewPeak 检查个峰数据点击ViewAverage Molecular Weight检查分子量数据点击ReportFormat 编辑报告输出格式在下面界面各项中选择打印内容和打印位置：点击ReportPrint 则直接在打印机打印报告。7GPC分析软件的退出：先从最小化图标中逐项打开各项操作界面并关闭。在CLASS-VP中清洗系统。然后停止CLASS-VP的系统运行。最后退出CLASS-VP。8关闭所有单元电源开关。24互联网络