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清热降糖颗粒中葛根素的含量测定【关键词】 高效液相色谱法;,清热降糖颗粒;,葛根素摘要:目的应用高效液相法测定清热降糖颗粒中葛根素的含量。方法以甲醇-水(2476)为流动相,用外标法定量。结果葛根素在0.037 80.472 5 g范围内,葛根素峰面积值与进样量呈良好的线性关系;回归方程为:Y=4 047.36X-1.77,r=0.999 9;加样回收率为102.6%,RSD=0.98%(n=5)。结论该法简便、准确、灵敏度高,可作为该品含量测定方法。关键词:高效液相色谱法; 清热降糖颗粒; 葛根素清热降糖颗粒处方由葛根等药材组成,具有滋阴清热,生津止渴作用。主治糖尿病阴虚热盛重症,可降血糖,改善胰岛素抵抗。用于咽干口燥,心烦畏热,渴喜冷饮,多食渴饥,溲赤便秘,舌红苔黄,脉细滑数等症。葛根素是葛根的主要有效成分,因此采用高效液相法测定葛根素的含量,为控制本制剂质量提供实验依据。1 器材1.1 仪器Agilent1100高效液相色谱仪,包括:四元泵,在线脱气机,柱温箱,VWD检测器,化学工作站(chemistation system工作站);梅特勒电子天平(瑞士)。1.2 试剂均为色谱纯。1.3 试药葛根素对照品:由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号:0752-9907);清热降糖颗粒由江苏省中西医结合医院制剂室提供。2 方法与结果2.1 色谱条件ZORBAX SB-C18(4.6 mm150 mm);流动相:甲醇-水(2476);流速:1.0 ml/min;检测波长:250 nm;柱温:30。2.2 供试品溶液的制备取本品内容物适量,研细,精密称取0.25 g,加入30%乙醇溶解并定容至100 ml,精密量取1 ml,加30%乙醇定容至25 ml,摇匀,用微孔滤膜(0.45 m)滤过,取续滤液,即得。2.3 对照品溶液的制备及标准曲线绘制2.3.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品2.362 5 mg,置25 ml量瓶中,加30%乙醇至刻度,摇匀,精密量取2 ml,置10 ml量瓶中,加30%的乙醇至刻度,摇匀,即得。2.3.2 标准曲线绘制精密吸取上述葛根素对照品溶液,加甲醇配成不同浓度的溶液。精密吸取不同浓度的对照品溶液各 20 l,按上述色谱条件测定峰面积。以对照品量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,计算得回归方程为:Y=4 047.36X-1.77,r=0.999 9。结果表明,在0.037 80.472 5 g范围内,葛根素峰面积值与进样量呈良好的线性关系。2.4 精密度实验精密吸取对照品溶液(0.026 05 mg/ml),连续进样6次,20 l/次,峰面积的RSD=1.6%。结果表明,葛根素在该色谱条件下,精密度良好。结果见图1。2.5 重复性实验按拟定的含量测定方法,取样品分别制备供试液,测得峰面积并计算含量,葛根素含量RSD=0.5%。结果见图2。2.6 稳定性实验按拟定含量测定方法,制备样品供试液,每隔1 h测定1次,测定各峰面积值,测定结果RSD=0.7%。结果显示供试液在8 h内稳定。2.7 加样回收率实验取本品颗粒(批号:20030608,葛根素含量平均测定结果为:2.926 mg/g),研碎,精密称定粉末0.25 g,加入每毫升含葛根素 0.433 2 mg的葛根素对照品溶液1 ml,按拟定的含量方法测定,计算回收率,结果见表1。图1 葛根素对照品HPLC图谱(略) 图2 样品HPLC图谱(略)表1 葛根素加样回收率(略)2.8 样品测定取3批样品,按拟定的含量测定方法测定,结果见表2。表2 样品中葛根素的测定结果(略)根据3批中试样品的测定结果,将葛根素最低含量每包25.22 mg,下浮20%,暂定为其下限,即每粒含量下限为20 mg。暂定含量下限数据仅来自3批中试结果,最终确定,有待于更多数据的积累。3 结论葛根素的含量测定,已报道的有薄层扫描法、高效液相色谱法等。参照中国药典2000年版部葛根药材中葛根素的 HPLC测定法1,建立高效液相色谱法测定本品中葛根素含量的方法,本法能达到有效分离各组分的目的,且空白实验证明在葛根素色谱峰处其它成分无干扰,具有分离效果好、灵敏、准确等优点,可作为清热降糖颗粒的含量测定质量控制标准。参考文献:1 国家药典委员会.中国药典,部S.北京:化学工业出版社,2000:273.
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