清热降糖颗粒中葛根素的含量测定

清热降糖颗粒中葛根素的含量测定【关键词】 高效液相色谱法；,清热降糖颗粒；,葛根素摘要：目的应用高效液相法测定清热降糖颗粒中葛根素的含量。方法以甲醇-水（2476）为流动相，用外标法定量。结果葛根素在0.037 80.472 5 g范围内，葛根素峰面积值与进样量呈良好的线性关系；回归方程为：Y=4 047.36X-1.77，r=0.999 9；加样回收率为102.6%，RSD=0.98%（n=5）。结论该法简便、准确、灵敏度高，可作为该品含量测定方法。关键词：高效液相色谱法； 清热降糖颗粒； 葛根素清热降糖颗粒处方由葛根等药材组成，具有滋阴清热，生津止渴作用。主治糖尿病阴虚热盛重症，可降血糖，改善胰岛素抵抗。用于咽干口燥，心烦畏热，渴喜冷饮，多食渴饥，溲赤便秘，舌红苔黄，脉细滑数等症。葛根素是葛根的主要有效成分，因此采用高效液相法测定葛根素的含量，为控制本制剂质量提供实验依据。1 器材1.1 仪器Agilent1100高效液相色谱仪，包括：四元泵，在线脱气机，柱温箱，VWD检测器，化学工作站（chemistation system工作站）；梅特勒电子天平（瑞士）。1.2 试剂均为色谱纯。1.3 试药葛根素对照品：由中国药品生物制品检定所提供（供含量测定用，批号：0752-9907）；清热降糖颗粒由江苏省中西医结合医院制剂室提供。2 方法与结果2.1 色谱条件ZORBAX SB-C18（4.6 mm150 mm）；流动相：甲醇-水（2476）；流速：1.0 ml/min；检测波长：250 nm；柱温：30。2.2 供试品溶液的制备取本品内容物适量，研细，精密称取0.25 g，加入30%乙醇溶解并定容至100 ml，精密量取1 ml，加30%乙醇定容至25 ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，取续滤液，即得。2.3 对照品溶液的制备及标准曲线绘制2.3.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品2.362 5 mg，置25 ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加30%的乙醇至刻度，摇匀，即得。2.3.2 标准曲线绘制精密吸取上述葛根素对照品溶液，加甲醇配成不同浓度的溶液。精密吸取不同浓度的对照品溶液各 20 l，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算得回归方程为：Y=4 047.36X-1.77，r=0.999 9。结果表明，在0.037 80.472 5 g范围内，葛根素峰面积值与进样量呈良好的线性关系。2.4 精密度实验精密吸取对照品溶液（0.026 05 mg/ml），连续进样6次，20 l/次，峰面积的RSD=1.6%。结果表明，葛根素在该色谱条件下，精密度良好。结果见图1。2.5 重复性实验按拟定的含量测定方法，取样品分别制备供试液，测得峰面积并计算含量，葛根素含量RSD=0.5%。结果见图2。2.6 稳定性实验按拟定含量测定方法，制备样品供试液，每隔1 h测定1次，测定各峰面积值，测定结果RSD=0.7%。结果显示供试液在8 h内稳定。2.7 加样回收率实验取本品颗粒（批号：20030608，葛根素含量平均测定结果为：2.926 mg/g），研碎，精密称定粉末0.25 g，加入每毫升含葛根素 0.433 2 mg的葛根素对照品溶液1 ml，按拟定的含量方法测定，计算回收率，结果见表1。图1 葛根素对照品HPLC图谱（略） 图2 样品HPLC图谱（略）表1 葛根素加样回收率（略）2.8 样品测定取3批样品，按拟定的含量测定方法测定，结果见表2。表2 样品中葛根素的测定结果（略）根据3批中试样品的测定结果，将葛根素最低含量每包25.22 mg，下浮20%，暂定为其下限，即每粒含量下限为20 mg。暂定含量下限数据仅来自3批中试结果，最终确定，有待于更多数据的积累。3 结论葛根素的含量测定，已报道的有薄层扫描法、高效液相色谱法等。参照中国药典2000年版部葛根药材中葛根素的 HPLC测定法1，建立高效液相色谱法测定本品中葛根素含量的方法，本法能达到有效分离各组分的目的，且空白实验证明在葛根素色谱峰处其它成分无干扰，具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可作为清热降糖颗粒的含量测定质量控制标准。参考文献：1 国家药典委员会.中国药典,部S.北京：化学工业出版社，2000：273.