鸡三碘甲状腺原氨酸T3酶联免疫分析

精品资料，欢迎大家下载！鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用.检测范围：96T4ng/ml-120ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中三碘甲状腺原氨酸(T3)含量.实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)水平.用纯化的鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次参加三碘甲状腺原氨酸(T3),再与HRP标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的三碘甲状腺原氨酸(T3)呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)浓度.试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlx1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(240ng/ml)0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlx1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlx1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlx1/瓶12密封袋1个标本要求标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.假设不能马上进行试验,可将标本放于-20C保存,但应防止反复冻融1. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性.操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可根据以下图表在小试管中进行稀释.120ng/ml5号标准品150U的原倍标准品参加150pl标准品稀释液60ng/ml4号标准品150U的5号标准品参加150标准品稀释液30ng/ml3号标准品150U的4号标准品参加150标准品稀释液15ng/ml2号标准品150U的3号标准品参加150标准品稀释液7.5ng/ml1号标准品150U的2号标准品参加150标准品稀释液1. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品准确加样50此待测样品孔中先加样品稀释液40此然后再加待测样品10U样品最终稀释度为5倍.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.2. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟.3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.4. 加酶：每孔参加酶标试剂504,空白孔除外.5. 温育：操作同3.6. 洗涤：操作同5.7. 显色：每孔先参加显色剂A504,再参加显色剂B50U,轻轻震荡混匀,37C避光显色10分钟.8. 终止：每孔加终止液50山终止反响此时蓝色立转黄色.9. 测定：以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度OD值.测定应在加终止液后15分钟以内进行.操作程序总结：准备试剂,样品和标准品参加准备好的样品和标准品,37C反响30分钟洗板5次,参加酶标试剂.37C反响3.分钟洗板5次,参加显色液A,B,37TC显色10分钟参加终止液15分钟之内读0D值计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值计算出标OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度.1. 考前须知试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟前方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以防止试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值,请先用样品稀释液稀释一定倍数n倍后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数XnX5.5. 封板膜只限一次性使用,以防止交叉污染.6. 底物请避光保存.7. 严格根据说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.8. 本试剂不同批号组分不得混用.保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8C.2.有效期：6个月以上资料仅供参考，如有侵权，留言删除！