中药鉴定学中药安全性评价

中药的安全性评价中药的安全性评价 n中药的安全性评价（safety evalulation）就是利用毒理学和理化分析等方法，检测中药的毒性和有害物质、评价其在临床使用过程中的安全性。n中药的安全性评价是中药质量标准中不可缺少的组成部分，也是保证临床用药安全可靠的重要措施。n据统计，自据统计，自19151994年间的年间的110种医药学种医药学期刊上关于中药不良反应的报道累计达期刊上关于中药不良反应的报道累计达6061例。例。n这些不良反应主要集中在这些不良反应主要集中在肝、肾、肺、心肝、肾、肺、心以及内分泌系统、造血系统、免疫系统、以及内分泌系统、造血系统、免疫系统、神经系统、生殖系统神经系统、生殖系统等诸多方面。等诸多方面。n近期在国外发生的中药不良反应，如日本近期在国外发生的中药不良反应，如日本的小柴胡事件、欧洲的马兜铃事件、新加的小柴胡事件、欧洲的马兜铃事件、新加坡、马来西亚的黄连事件等，更加深了人坡、马来西亚的黄连事件等，更加深了人们对中药安全性的担忧。们对中药安全性的担忧。n然而，中医药体系具有自身的特殊性，影响中药安全性的因素也较为复杂，除剂量问题外，还涉及到品种、炮制、配伍、煎服方法等诸多因素，而且可变因素多，检测难度大。因此，如何科学正确地评价中药的安全性给中药研究者提出了更高的要求。因为它既关系到临床的用药安全，又关系到中医药事业的顺利发展，是一项具有战略意义的重大研究课题。n第一节第一节 影响中药安全性的物质分影响中药安全性的物质分类类第一节第一节 影响中药安全性的物质分类影响中药安全性的物质分类一、内源性具有毒副作用的物质内源性具有毒副作用的物质n这些化学成分大多是生物体的次生代谢产这些化学成分大多是生物体的次生代谢产物（物（secondary metabolites），包括生物），包括生物碱、萜类、挥发油类、酚类、醌类、内酯碱、萜类、挥发油类、酚类、醌类、内酯类、苷类等。这些成分很早就作为药物在类、苷类等。这些成分很早就作为药物在临床应用，但随着研究的不断深入，逐渐临床应用，但随着研究的不断深入，逐渐地发现这些产生药效的物质也常伴有不同地发现这些产生药效的物质也常伴有不同程度的毒副作用。通常按其毒害的部位分程度的毒副作用。通常按其毒害的部位分类。类。1具有消化系统毒性的中药具有消化系统毒性的中药 常表现为胃肠道反应，如恶心、呕吐、上腹不适、腹痛、腹泻等。同时，还有可能常表现为胃肠道反应，如恶心、呕吐、上腹不适、腹痛、腹泻等。同时，还有可能引起肝脏毒性反应，如黄疸、肝肿大、肝炎、胆汁淤积、肝硬化、肝细胞坏死等。引起肝脏毒性反应，如黄疸、肝肿大、肝炎、胆汁淤积、肝硬化、肝细胞坏死等。根据临床报道和动物实验结果表明，常根据临床报道和动物实验结果表明，常引起胃肠道反应的中药有引起胃肠道反应的中药有：鸦胆子鸦胆子Brucea javanica（L.）Merr.、了哥王了哥王Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.、常山常山Dichroa febrifuga Lour.、苦楝子苦楝子Melia azedarach L.、巴豆巴豆Croton tiglium L.等。等。具有肝脏毒性的中药有具有肝脏毒性的中药有：姜半夏姜半夏Pinellia ternate（Thunb.）Breit.、桑寄生桑寄生Taxillus chinensis（DC.）Danser、蒲黄蒲黄Typha angustifolia L.等。等。天花粉天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.或其注射剂可引起肝功能异常；或其注射剂可引起肝功能异常；千里光千里光Senecio argunensis Turcz.可造成肝内血管闭塞；可造成肝内血管闭塞；野百合野百合Crotalaria sessiliflora L.提取物可引起急性肝炎。提取物可引起急性肝炎。川楝子川楝子Melia toosendan Sieb.et Zucc.、苍耳子苍耳子Xanthium sibiricum Patr.、草乌草乌Aconitum kusnezoffii Reichb.、蓖麻子蓖麻子Ricinus communis L.、雷公藤雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.等中药的煎剂可导致肝损害；等中药的煎剂可导致肝损害；大黄大黄Rheum palmatum L.、泽泻泽泻Alisma orientalis（Sam.）Juzep.或其静脉注射液会引起胆红素代谢障碍导致黄疸。或其静脉注射液会引起胆红素代谢障碍导致黄疸。2具有泌尿系统毒性的中药具有泌尿系统毒性的中药 毒性症状有尿少、尿闭、尿频、尿急、浮肿、血尿、蛋白尿、尿毒症、肾功能衰竭等。n关木通Aristolochia manshuriensis Kom.、n广防己Aristolochia fangchi Y.C.Wu ex L.D.chou et S.M.Hwang。另据报道，具有肾脏毒性的常用中药还有n草乌Aconitum kusnezoffii Reichb.、n巴豆Croton tiglium L.、n天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.、n蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch、n斑蝥Mylabris phalerata Pallas、n光慈菇Tulipa edulis（Miq.）Baker、n益母草Leonurus heterophyllus Sweet、n厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.等。3具有中枢神经系统毒性的中药具有中枢神经系统毒性的中药 症状为口唇麻木、嗜睡、抽搐、惊厥、牙关紧闭、眩晕、意识模糊、烦躁不安、昏迷、瞳孔缩小或放大、严重者死亡。临床常用的中药:马钱子Strychnos nux-vomica L.所含士的宁（strychnine）；颠茄属Hyoscyamus植物含有的阿托品（atropine）、天仙子胺（hyoscyamine）；西红花Crocus sativus L.所含的藏红花素（crocetin）；罂粟Papaver somniferum L.所含的吗啡（morphine）都被动物实验证实具有不同程度的中枢神经毒性。4具有造血系统毒性的中药具有造血系统毒性的中药 n症状是溶血性贫血、缺血性贫血、白细胞减少、粒细胞缺乏、再生障碍性贫血、严重者导致死亡。n可引起造血系统毒性反应的中药有:n雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.、n光慈菇Tulipa edulis（Miq.）Baker、n八角莲Dysosma versipellis（Hance）M.Cheng、n青风藤Sinomenium acutum（Thumb.）Rehd.et Wils.n以及正清风痛宁、蝮蛇抗栓酶、穿琥宁注射液、小檗碱（berberine）、枯痔宁、感冒清、感冒通等中成药制剂。5具有心血管系统毒性的中药具有心血管系统毒性的中药 n常见的心血管毒性的症状是心律失常、心悸、胸闷、循环衰竭、严重者死亡。n乌头Aconitium carmichaeli Debx.、附子及其炮制品均为临床常用中药，具有镇静、强心、抗肿瘤等作用，常用于多种痛症的治疗。其主要药效成分乌头碱（aconitine）、中乌头碱（mesaconitine）、次乌头碱（hypaconitine）等可引起心血管毒性，并可损害外周脊髓。n其它具有心血管毒性反应的中药还有蟾酥Venenum Bufonis、藜芦Veratum nigrum L.、黄花夹竹桃Thevetia peruviana（Pers.）.K.Schum.等。6具有呼吸系统毒性的中药具有呼吸系统毒性的中药 症状有咳嗽、呼吸困难、肺水肿、呼吸麻痹、呼吸衰竭、甚至窒息死亡。常见产生呼吸系统毒性的中药有：苦杏仁Semen Armeniacae Amarum和桃仁Semen Persicae所含苦杏仁苷（amygdalin）、闹羊花Rhododendron molle G.Don所含毒性成分八厘麻毒素（andromedotoxin）、乌头Aconitium carmichaeli Debx.和附子中所含成分乌头碱（aconitine）、细辛Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.所含成分甲基丁香酚（methyleugenol）等，这些成分主要是通过影响延髓呼吸中枢引起呼吸困难乃至呼吸衰竭。7具有免疫系统毒性的中药具有免疫系统毒性的中药 最常见的免疫系统的毒性就是过敏反应。通常表现为皮疹、荨麻疹、哮喘、发热、黏膜水肿等症状，有时甚至会导致过敏性休克等严重后果。常引起过敏反应的大多是中药注射剂。造成这种毒性作用的原因之一就是中药注射剂中所含的大分子动、植物蛋白，以及具有抗原或半抗原性质的物质，如绿原酸、酶、皂苷和角质蛋白等。有些中药如雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.、防己Stephania tetrandra S.Moore等，还存在不同程度的免疫抑制作用。8具有致畸胎、致突变及致癌作用的中药具有致畸胎、致突变及致癌作用的中药 n有些中药可干扰胚胎的正常发育而引起畸胎。具有这种生殖毒性的中药有雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.、棉酚（gossypol）、昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum（Lvl.）Hutch.、苦瓜Momordica charantia L.、川楝子Melia toosendan Sieb.et Zucc.、天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）n有些中药可引起基因突变和癌变，如槟榔Areca catechu L.、款冬花Tussilago farfara L.、千里光Senecio argunensis Turcz.、广防己Aristolochia fangchi Y.C.Wu ex L.D.chou et S.M.Hwang、关木通Aristolochia manshuriensis Kom.、细辛Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.、土荆芥Chenopodium ambrosioides L.、雄黄(Realgar)、砒霜(Arsenouse oxide)、土贝母Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franq.、野百合Crotalaria sessiliflora L.等。如果长期过量使用这类中药，可增加基因突变和引发癌症的概率。n此外，石菖蒲Acorus tatarinowii Schott、花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim.、八角茴香Illicium verum Hook.f.等植物所含的黄樟醚（safrole）和青木香Aristolochia debilis Sieb.et Zucc.等所含的N-硝基化合物等，现已证实可诱发动物产生肝癌。9具有内分泌系统毒性的中药具有内分泌系统毒性的中药 n中药引起内分泌毒性的研究报道不多，但较为明确地是含重金属中药对内分泌具有较大的毒性，例如砒霜和朱砂。砷元素破坏人和动物的内分泌系统，通常是以阻断或模仿激素的方式来干扰正常激素的作用。二、外源性具有毒害作用的物质二、外源性具有毒害作用的物质n外源性具有毒害作用的物质主要来自中药材的栽培或养殖、采收加工、包装、运输和贮藏等环节。此外，中药制剂生产中所涉及到的辅料、提取溶剂、工艺设备、接触器皿等也都是外源性有毒副作用物质污染的重要途径。1农药类有害物质农药类有害物质 目前我国生产和使用的农药主要分为5类：第一类为有机磷农药，属磷酸酯类或硫代磷酸酯类化合物，是应用最广泛的农药。长期少量接触有机磷农药会出现慢性中毒症状，表现为神经衰弱综合征头痛、头昏、乏力、恶心、食欲不振、视物模糊。第二类为氨基甲酸酯类农药，属中低毒性农药。可经呼吸道、消化道侵入人体，也可经皮肤、黏膜缓慢吸收，中毒症状与轻度有机磷农药中毒相似。第三类为杀虫脒，皮肤吸收或消化道侵入人体，可直接对心肌和血管平滑肌引起损害以及严重的高铁血红蛋白症造成缺氧，最终导致组织或器官的损害。第四类为溴氰菊酯（凯嗪灵），毒症状主要表现为皮肤刺激，有烧灼感、红斑、丘疹；神经系统症状表现为：恶心、呕吐、腹痛、头痛、头昏、乏力、肌肉跳动、流涎、视物模糊。第五类为百草枯，毒性非常强，不但损害肾小管，导致蛋白尿、血尿，引起肾功能损害，而且极易引起进行性呼吸困难，最终导致呼吸衰竭而死亡，还会造成心、肝、肾上腺中毒，引起相应症状和体征。由于中药的需求量日渐增多，药农们不得不频繁地使用各种农药，预防病虫害，以达到提高中药栽培品的产量的目的。因此，造成了中药中农药的污染严重。目前，中药常见的农药残留（pesticide residues）种类主要有三大类：有机氯农药，如六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）、及五氯硝基苯（PCNB）等。有机磷农药，如敌敌畏、对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、乙酰甲胺磷等。拟除虫菊酯类农药，如氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯等。2重金属类有害物质重金属类有害物质 n在常见的重金属元素中，铅（Pb）、镉（Cd）、汞（Hg）、砷（As）是目前被公认的对人体最有害的4种元素。这些物质的毒性作用主要是通过与体内一系列蛋白质、酶和氨基酸内的官能团上的巯基（-SH）和双硫键（-S-S-）牢固地结合在一起，从而使蛋白质变性，酶失去活性，组织细胞出现结构和功能上的改变。n铅主要损害造血、消化、神经、血液、心血管和泌尿系统。n镉可抑制各种氨基酸脱羧酶、组氨酸酶、淀粉酶、过氧化物酶的活性，从而使肝、肾等组织中的酶系统正常功能受损。此外，镉还有致癌、致畸、导致基因突变的作用。n汞主要是损害肾脏，造成肾功能衰竭。汞中毒还严重影响人的中枢神经系统、使听力减弱、语言失控、四肢麻痹甚至造成痴呆。n砷主要是扩张毛细血管，麻痹血管舒张中枢，使腹腔脏器严重充血，引起肝、肾、心等实质脏器的损害。长期吸收砷化合物会诱发肺癌和呼吸道肿瘤。3黄曲霉毒素黄曲霉毒素 n黄曲霉菌（aspergillus flavus）含多种黄曲霉毒素（aflatoxins），有强烈的致肝损害和致癌作用。4其它外来杂质其它外来杂质 中药在采收、加工和贮藏等过程中有可能混入其它有毒有害物质，如某些中药在产地加工时，为了使药材色泽洁白，防止霉烂，常在干燥前后用硫黄熏制，造成药材中二氧化硫（SO2）残留。除此之外，砂石、泥块、尘土、明矾、盐等无机化合物以及其它非药用部位的杂质都直接影响着中药的安全性。因此，中药的质量标准中常设置有专项检查。第二节第二节 中药安全性评价方法中药安全性评价方法 中药安全性评价方法也分为二大类：n一类是属于中药毒理学方面的实验方法。主要分为三个阶段：临床前的中药毒理学研究、临床中药毒理学以及中药上市后的不良反应监测。n另一类是物理和化学分析实验方法。此类方法主要是利用经典的或现代的物理和化学手段，针对产生毒副作用的中药成分和有害物质进行定性和定量的分析和测定。一、农药残留量的检查方法及限量指标一、农药残留量的检查方法及限量指标（一）农药残留量检测样品的处理（一）农药残留量检测样品的处理 1取样原则取样原则 2样品的前处理样品的前处理 常规的提取纯化方法 先进的提取方法：固相萃取、固相微萃取、超临界流体萃取、微波辅助萃取、凝胶渗透色谱和免疫亲和色谱等先进方法（二）农药残留量的测定方法（二）农药残留量的测定方法1毛细管气相色谱测定法毛细管气相色谱测定法 采用高效能的毛细管气相色谱柱（CGC）和火焰光度检测器或高灵敏度的电子捕获器（ECD）分离和检测常见的农药的残留量。具有灵敏度高、选择性强等特点。应用于中药中的有机磷、有机氯和拟虫菊酯类农药残留量的测定。2气相气相-红外光谱测定法红外光谱测定法 可将多种微量的混合农药成分分离又可给出明确的结构信息。缺点：灵敏度较低，检测限每组约100ng。光管的温度不能高于30，否则会影响色谱柱的温度，使信号强度降低，噪声急剧增长，造成联机检测困难。谱库检索是GC-FTIR定性的主要方法，而农药的气相红外光谱库存量很小，严重地影响了检测结果的分析。（三）农药残留量的其他测定方法（三）农药残留量的其他测定方法填充柱气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、超临界流体色谱法、薄层色谱法、毛细管电泳色谱法、酶联免疫吸附法、流动注射化学发光法、共振光散射比浊法以及基于酶抑制原理的分光光度法等。（四）限量指标（四）限量指标中国药典（2005年版）在甘草和黄芪项下规定了每2克药材所含有机氯类农药限量为：n六六六（总BHC）不得过千万分之二；n滴滴涕（总DDT）不得过千万分之二；n五氯硝基苯（PCNB）不得过千万分之一。二、重金属及有害元素的检查方法及限量指标二、重金属及有害元素的检查方法及限量指标（一）重金属及有害元素检测样品的前处理（一）重金属及有害元素检测样品的前处理 传统的方法：湿法消化传统的方法：湿法消化 干法灰化干法灰化 先进的方法：微波消解技术先进的方法：微波消解技术 梯度升压微波消解技术梯度升压微波消解技术（二）重金属及有害元素检测方法（二）重金属及有害元素检测方法 1比色法比色法 目前中国药典（2005年版）中收载的重金属总量的测定是比色法。2原子荧光光度法原子荧光光度法 砷、锑、硒、锗、锡、铅、锌、汞3原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 分为冷原子吸收法、石墨炉原子吸收法和火焰原子吸收法（1）冷原子吸收法冷原子吸收法：冷原子吸收法较适合测定汞汞的含量。其主要原理是利用汞在常温下蒸气压较高和在空气中不易氧化的特点，用还原剂将高价汞还原成汞蒸气，汞蒸气对其特征谱线（253.7nm）具有强烈吸收作用，用载气将汞蒸气吹出，通过石英吸收池，汞蒸气对汞空心阴极灯的辐射产生吸收，从而达到定量分析的目的。（2）石墨炉原子吸收法石墨炉原子吸收法：较适合于铅、镉铅、镉等重金属元素。其主要原理是利用电能加热盛放试样的石墨容器，使之达到高温，以实现试样的蒸发和原子化，达到原子化的样品通过炉内光路产生吸收的目的。（3）火焰原子吸收法火焰原子吸收法：铜铜。火焰原子吸收法的原理是利用化学火焰实现原子化，使被测元素由试样中转入气相，并解离为基态原子。原子化器由雾化器、雾化室和燃烧器三分部分组成，雾化器将试液雾滴均匀化，然后再喷入火焰中，使进入火焰的微粒原子化。通过测定被测元素的吸收度，计算出被测元素的含量。4电感耦合等离子体质谱联用技术电感耦合等离子体质谱联用技术（ICP-MS）n原理：将样品经由高频等离子炬激发电离后，在电磁场中离子按照质荷比进行定性和定量，具有谱线简单，干扰少、检出限极低，适应范围宽达8个数量级和同时多元素测定等优点。n电感耦合等离子体质谱配备有溶液进样、电热蒸发、激光烧蚀进样系统。5电感耦合等离子体原子发射光谱电感耦合等离子体原子发射光谱ICP-AES n高频感应电流产生的高温将反应气加热、电离、利用元素发出的特征谱线进行测定，谱线强度与重金属量成正比。nICP-AES具有灵敏度高，干扰小，线性宽，可同时或顺序测定多种元素，特别是对高温金属元素可以进行快速分析，但灵敏度较ICP-MS略差，可用于除镉、汞以外的大多数重金属元素的测定。6高效液相色谱法高效液相色谱法n利用痕量金属离子与有机试剂形成稳定的有色络合物，然后利用HPLC分离，紫外-可见检测器检测，可实现多元素的同时测定。n卟啉类试剂能和多种金属元素生成稳定的络合物，且灵敏度较高，因而常用来作为金属离子的衍生试剂，但络合试剂的选择有限，使HPLC的广泛应用受到限制。7酶抑制法酶抑制法n利用重金属离子与形成酶活性中心的巯基或甲巯基结合后，改变了酶活性中心的结构与性质，引起酶活力下降，从而使底物-酶系统中的显色剂颜色、pH值、电导率和吸光度等发生变化，这些变化可直接通过肉眼或借助于电信号、光信号等加以区别。n与传统的重金属分析方法相比，酶抑制法具有快速、简便、对所分析的样品需要量少等优点，特别适合于重金属的现场快速检测。目前由于脲酶廉价易得，故使用最广泛。8免疫分析法免疫分析法n选用合适的络合物或其他化合物与金属离子结合，使其获得一定空间结构，从而产生反应原性，然后，将结合了金属离子的化合物连接到载体蛋白上，产生免疫原性，再通过酶联免疫吸附反应（ELISA）进行检测。由于重金属抗体的制备要求特异性较高，因此在很大程度上限制了重金属离子免疫分析方法的发展。（三）限量指标（三）限量指标 中国药典（2005年版）在白芍、甘草、黄芪、西洋参、丹参、金银花等大宗、常用中药材中首次规定了：n铅不得过百万分之五n镉不得过千万分之三n砷不得过百万分之二n汞不得过千万分之二n铜不得过百万分之二十 三、黄曲霉毒素的检查方法及限量三、黄曲霉毒素的检查方法及限量指标指标（一）检测方法（一）检测方法 n1薄层色谱法薄层色谱法 n2高效液相色谱法高效液相色谱法 n3其他方法其他方法溴化荧光分光光度法（SFB）、竞争性酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫测定法、质谱法、荧光偏振免疫测定法、微柱筛选法（二）限量指标（二）限量指标n根据中华人民共和国对外贸易经济合作部发布药用植物及制剂进出口绿色行业标准中的规定，药用植物原料、饮片、提取物及其制剂中黄曲霉毒素的限量要求暂定为黄曲霉毒素B15mg/kg。其他相关标准中对黄曲霉毒素的限量要求一般为24g/kg。中国药典（2005年版）暂未作相关规定。第三节第三节 中药安全性评价的现状及发展趋势中药安全性评价的现状及发展趋势一、现状分析及存在问题一、现状分析及存在问题n1对中药不良反应的相关研究较为缺乏对中药不良反应的相关研究较为缺乏 。n2现行的安全性评价模式不适合评价中药现行的安全性评价模式不适合评价中药的安全性的安全性 n3中药安全性控制力度不够中药安全性控制力度不够思考题：n你认为如何能更好地进行中药的安全性评价？你认为如何能更好地进行中药的安全性评价？二、未来发展趋势二、未来发展趋势n1扩大中药安全性研究的范围扩大中药安全性研究的范围 n2完善中药安全性评价方法完善中药安全性评价方法 n3深入开展中药安全性相关的研究深入开展中药安全性相关的研究 。