MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

MAPK在葡萄糖及Ang致血管平滑肌细胞增殖反响中的作用张严高，秦永文，吴弘，王文清，文军慧，李闻捷【关键词】丝裂原活化卵白激酶(APK)；细胞外信号调治AP激酶类(ERKs)；血管告急素(Ang)；高糖；肌,平滑,血管/细胞学；增殖反响RegulatinfAPKingluse/angitensininduedprliferatinfvasularsthusleells【Abstrat】AI:TstudytherlefitgenativatedprtEinkinase(APK)ingluseGS/angitensin(Ang)induedprliferatinfratvasularsthusleell(VS).ETHDS:TheprteinsythesisrateandprteinntentereusedastheindexesfVSprliferatininurstudy.TheDNAsynthesisrateasquantifiedby3Hthyidineinrpratin.Theprteinsynthesisrateasquantifiedby3Hleuineinrpratin.Regulatinfextraellularsignalregulatedkinase(ERKs)inAnginduedprliferatinereinvestigatedbypreinubatinitheitherPD098059r/andhighgluse(HG).RESULTS:Ang(10-7l/L)signifiantlyinreased3Hthyidineinrpratinand3HleuineinrpratinandHG(10-3l/L)signifiantlyinreased3Hthyidineinrpratinand3Hleuineinrpratin,andAng+HGexertedaresignifianteffet.PreinubatinfVSithPD098059signifiantlyinhibitedtheinreasef3HthyidineinrpratininduedbyAngandverysignifiantlyinhibitedtheinreasef3HthyidineinrpratininduedbyAng+HG.PreinubatinfVSithPD098059partlyinhibitedtheinreasef3HleuineinrpratininduedbyAngandsignifiantlyinhibitedtheinreasef3HleuineinrpratininduedbyAng+HG.NLUSIN:TheativatinfAPKplaysaniprtantrleinVSgrthandprliferatinreatininduedbyGS/Ang.【Keyrds】itgenativatedprteinkinase(APK);extraellularsignalregulatedAPAPkinasesangitensin(Ang);highgluse(HG);usle,sth,vasular/ytlgy;prliferativerespnse【摘要】目的：研究丝裂原活化卵白激酶(APK)信号途径在葡萄糖GS和/或血管告急素(Ang)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其大概的调控机制.要领：实行以平滑肌细胞卵白合成速率和卵白含量为平滑肌细胞增殖的指标，以平滑肌细胞3亮氨酸掺入率表现细胞卵白质合成速率，通过3H胸苷(3HTdR)反响平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖环境；并通过赐与PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处置惩罚，不雅察它们对细胞卵白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响.效果：Ang(10-7l/L)处置惩罚平滑肌细胞，3胸苷掺入率显着增高；HG(2510-3l/L)处置惩罚平滑肌细胞，3胸苷掺入率显着增高；AngHG处置惩罚平滑肌细胞3胸苷掺入率明显增高.Ang增长3胸苷掺入的作用可显着被PD098059所按捺；AngHG增高3胸苷掺入的作用也可被PD098059所按捺.Ang(10-7l/L)处置惩罚平滑肌细胞，3亮氨酸掺入率显着增高；HG(2510-3l/L)处置惩罚平滑肌细胞，3亮氨酸掺入率增长；AngHG处置惩罚平滑肌细胞3亮氨酸掺入率明显增长.Ang增长3亮氨酸掺入的作用可部门被PD098059所按捺；AngHG增长3亮氨酸掺入的作用可明显被PD098059所按捺.结论：应用APK的特异性按捺剂PD098059按捺血管平滑肌细胞的增殖，证明APK激活在GS和/或Ang导致平滑肌细胞增殖反响中有紧张作用.【关键词】丝裂原活化卵白激酶(APK)；细胞外信号调治AP激酶类(ERKs)；血管告急素(Ang)；高糖；肌，平滑，血管/细胞学；增殖反响0弁言引起高血压及动脉粥样硬化的发病机制非常庞大，此中重要的病理改变之一就是血管滑肌细胞增生、胖大，继而造成血管壁弹性落落、管腔变窄.已证明高葡萄糖及血管告急素均对血管平滑肌细胞VS增殖及DNA合成有促进作用，引起VS增殖是PK途径，并与APK信号途径的激活有关1-3.本研究通过应用APK信号转导途径的特异性停滞剂PD098059对体外造就的SD大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖的影响，进一步探究APK信号途径在心血管疾病中的作用机制，为心血管疾病防治提供根据.1质料和要领1.1质料SD大鼠由等二军医大学实行动物中央提供；D098059和血管告急素购自Siga公司；3胸苷、3亮氨酸、小牛血清、高浓度葡萄糖、DE造就基及其他实行用品由长海病院中央实行室提供3H液闪计数检测由长海病院中央实行室完成.统计学要领:效果以xs表现,统计学用2查验，P0.05表现差异有明显性意义.2效果2.1GS和/或Ang对SD大鼠颈动脉VS的DNA合成速率的影响在无血清造就液中，Ang剂量依靠性增长SD大鼠VS的3胸苷掺入；GS浓度依靠性增长SD大鼠VS的3胸苷掺入.以10-7l/L作为Ang的尺度实行浓度；以2510-3l/L作为GS的尺度实行浓度.Ang处置惩罚VS可使3胸苷掺入显着增长增长183.0%，该作用可被PD098059显着按捺PD098059预处置惩罚组比Ang处置惩罚组低落35.0%,增长被按捺52.3%,表1.HG处置惩罚可使3胸苷掺入显着增长增长53.0%；HG+Ang处置惩罚可使3胸苷掺入明显增长增长239.0%，该作用可被PD098059明显按捺PD098059预处置惩罚组比HG+Ang处置惩罚组低落55.0%,按捺79.0%,表1.2.2GS和/或Ang对SD大鼠颈动脉VS的卵白质合成速率的影响在无血清造就液中，Ang剂量依靠性增长SD大鼠VS的3亮氨酸掺入；GS浓度依靠性增长SD大鼠VS的3亮氨酸掺入.以10-7l/L作为Ang的尺度实行浓度；以2510-3l/L作为HG的尺度实行浓度.Ang处置惩罚VS可使3亮氨酸掺入显着增长增长74.7%，该作用可被APK激酶(EK)特异性按捺剂PD098059部门按捺PD098059预处置惩罚组比Ang处置惩罚组低落11.0%,按捺29.3%,表1.HG处置惩罚可使3亮氨酸掺入增长增长15.0%；HG+Ang处置惩罚可使3亮氨酸掺入显着增长增长85.0%，该作用可被PD098059明显按捺PD098059预处置惩罚组比HG+Ang处置惩罚组低落38.0%,按捺86.0%,表1.表1GS和/或Ang及PD098059对VS3H胸苷掺入率和3H亮氨酸掺入率的影响略bP0.01,aP0.05vs正常比较.3讨论高血压的血管重构、弹性成效低落与血管平滑肌细胞VS增生、胖大严密相干1.Ang作为一种紧张的致血管紧缩因子，具有促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用，在高血压、动脉粥样硬化等病理生理历程中起紧张作用；高浓度葡萄糖可以促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用；并证明APK信号转导途径的逐级激活大概是血管平滑肌细胞增殖、胖大的紧张机制2-3，5.别的，AEi等的改进动脉粥样硬化及血管弹性成效的机制与Ang程度变革及APK信号转导途径均相干6.丝裂原活化卵白激酶(APK)家属是与细胞增殖干系最为严密的细胞内信号转导卵白激酶，是细胞外信号与细胞核之间信息转导的配合通路.在哺乳动物的细胞中并行存在3条APK信号转导通路，此中ERK信号途径被以为是经典的APK信号转导途径1-3.与高血糖、Ang促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用重要相干的也是ERKs途径.APK在细胞信号转导方面有二大特性：活化的APK通过转位方法进入细胞核，激活其卑劣底物，重要是一些编码核转录因子的早反响基因如原癌基因,fs,y,jun和Eng1等表达，调控细胞生长反响，导致次级反响基因如ANF基因、H基因、L2基因等的非常表达，影响细胞成效；APK可将多个差异受体体系如G卵白耦联受体和卵白酪氨酸激酶受体介导的信号加以整合，起着多种信号的交汇点或配合通路的作用.但激活的APK很快被细胞内磷酸酶去磷酸化而失活，因此APK活性受其上游APK激酶及其卑劣APK磷酸酶的双重调控.只有磷酸化的APK才具有活性，因此可通过检测胞浆内及核中的磷酸化APK的含量来测定APK的活性，并通过阐发相干的因素对磷酸化APK的效应来阐发APK大概的作用机制7-10.我们以平滑肌细胞卵白合成速率和卵白含量为平滑肌细胞增殖的指标，平滑肌细胞3亮氨酸掺入率表现细胞卵白质合成代谢速率，通过3胸苷(3TdR)反响平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖环境；并通过赐与APK激酶(EK)特异性按捺剂PD098059预处置惩罚,不雅察其对细胞卵白合成和DNA的代谢及细胞增殖的影响.效果表现赐与HG和/或Ang后VS的DNA合成明显增长，而这种增长效应可被PD098059停滞，说明Ang影响VS的细胞增殖、生长、胖大的效应大概是通过激活APK信号转导途径而促进DNA的合成；效果又表现赐与HG和/或Ang后VS的卵白质合成明显增长，而这种增长效应可被PD098059显着停滞，说明Ang影响VS的细胞增殖、生长、胖大的效应大概是通过激活APK信号转导途径而促进卵白质的合成.别的，HG+Ang组增长卵白合成和DNA的代谢显着，且该作用可被PD098059非常明显按捺.因此以为Ang促进VS细胞增殖、胖大的效应，大概是通过激活APK信号转导途径来完成的，并且与胞浆和胞核的APK信号转导途径均相干，这与外洋的研究相切合.但本研究中提示在与胞浆和胞核的APK信号转导途径均相干，APK体系对DNA合成效应的影响显着大于对卵白质合成的影响.因此以为GS及Ang促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用中，APK体系对DNA合成效应的调治是紧张的机制之一.从而以为糖尿病者Ang促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用更值得器重.综上所述，APK激活在Ang导致平滑肌细胞增殖反响中具有紧张作用,并可通过APK信号途径的特异性按捺剂的按捺效应影响血管平滑肌细胞的增殖；并且HG及Ang促进血管平滑肌细胞增殖、胖大的作用中，APK体系对DNA合成效应的调治更为紧张.相干的APK信号途径确切的调治机制有待于进一步研究.【参考文献】2Page,DubellAF.itgenativatedprteinkinase(APK)inardiatissuesJ.lellBihe,1996,157:49-57.3NatarajR,SttS,Bai,etal.AngitensinsignalinginvasularsthusleellsunderhighgluseJ.Hypertensin,1999,33(1pt2):378-384.4司徒镇强，吴军正.细胞造就，西安：天以下图书出书西安公司出书，2001：69-71；189-191；193-194.5ZhengY,SngHJ,KiH,etal.Inhibitryeffetfepigallatehin3gallatenvasularsthusleellhypertrphyinduedbyangit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