微生物基础知识及卫生管理培训.ppt

微生物基础知识与卫生管理培训,2019年8月3日星期六,1,药品生产质量管理规范附录中第二十条 凡在洁净区工作的人员（包括清洁工和设备维修工）应当定期培训，使无菌药品的操作符合要求。培训的内容应当包括卫生和微生物方面的基础知识。未受培训的外部人员（如外部施工人员或维修人员）在生产期间需进入洁净区时，应当对他们进行特别详细的指导和监督。 第二十九条 所有人员都应当接受卫生要求的培训，企业应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品生产造成污染的风险 第三十一条 企业应当对人员健康进行管理，并建立健康档案。直接接触药品的生产人员上岗前应当接受健康检查，以后每年至少进行一次健康检查。 第三十二条 企业应当采取适当措施，避免体表有伤口、患有传染病或其他可能污染药品疾病的人员从事直接接触药品的生产。 第三十五条 进入洁净生产区的人员不得化妆和佩带饰物。 第三十六条 生产区、仓储区应当禁止吸烟和饮食，禁止存放食品、饮料、香烟和个人用药品等非生产用物品。,2019年8月3日星期六,2,微生物的定义,微生物:存在于自然界中的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物。 按其结构、化学组成及生活习性可分为: 原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体 真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类 非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等 按其致病性可分为: 病原性微生物 非病原性微生物,2019年8月3日星期六,3,微生物分布广泛 江河、湖海、土壤、空气中都存在种类不一、数量不等的微生物，人体体表、体内亦有多种微生物的存在 土壤中微生物最丰富，1克土壤中可有几亿到几十亿个 大多数微生物对人类是有益的，而且是必需的 自然界中N、C、S等多种元素要靠微生物的代谢活动来循环 固氮菌。农业制造菌肥。工业用于食品发酵、皮革、石油化工、医药。 正常情况下，寄生在人体的微生物是无害的，有些尚具有拮抗病原微生物的作用，肠道正常菌群，大肠杆菌等提供人体必需的硫胺素、核黄素、氨基酸等。 没有微生物，植物就不能新陈代谢，人类和动物也难以生存,2019年8月3日星期六,4,微生物学（microbiology)：研究微生物在一定条件下的形态、结构、生命活动和规律、进化、分类以及与人类、动物、植物、自然界相互关系等问题的一门科学 微生物学的发展历史 （一）经验时期 制酒（公元前两千年前，制酒） 制醋 （二）实验微生物学时期 列文虎克 显微镜 巴斯德 有机物发酵与腐败与微生物 防酒发酵成醋-巴氏消毒,2019年8月3日星期六,5,微生物学的开山祖列文虎克 1674年荷兰人列文虎克用自己 制造的能放大 200-300 倍的显 微镜观察了污水、牙垢、腐败有机物等， 发现了许许多多肉眼看不见的微小的生 物，为微生物的存在提供了有力的证据。,2019年8月3日星期六,6,微生物学的发展历史,微生物学的奠基人巴斯德：从1862年起法国科学家巴斯德解决了葡萄酒变酸问题、发明了巴斯德灭菌法、医治了蚕病、炭疽病和疯狗病而成为伟大的微生物奠基人。 微生物方法学和医学微生物学的奠基人科赫：德国科学家科赫发现了炭疽杆菌、结核杆菌、霍乱弧菌、鼠疫杆菌，并第一次用科学的方法证明某种特定的微生物是某种特定疾病的病原。于1905年，获得了诺贝尔医学和生理学奖，主要是为了表彰他在肺结核研究方面的贡献。,2019年8月3日星期六,7,微生物学的发展历史,（三）现代微生物学时期 随化学、物理学、生化、遗传学、细胞生物学、分子生物学等学科的发展，以及电子显微镜、组织化学、细胞培养、免疫荧光、免疫酶、同位素标记、分子杂交等新技术的应用，微生物学得到极为迅速的发展 细菌细胞和病毒结构的研究提高到亚超微结构水平 分子遗传学 使基因的DNA片段移植到细菌中去，通过质粒载体转移到大肠杆菌，在大肠杆菌中表达，制备药物 克隆技术的应用,2019年8月3日星期六,8,自然界中的主要微生物,真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹） 细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 支原体：肺炎支原体 衣原体：沙眼 立克次体：斑疹伤寒 螺旋体：梅毒 病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。,2019年8月3日星期六,9,常见污染微生物,1.葡萄球菌：可引起局部感染 2.大肠杆菌：胆道及尿道感染 3.绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎 4.枯草杆菌：结膜炎 5.酵母菌：使糖分解，药液产生有机酸 6.霉菌：使制剂霉坏、酸败变质,2019年8月3日星期六,10,1、体积小，面积大,微生物的个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清。 杆菌的宽度是0.5微米，因此80个杆菌“肩并肩”地排列成横队，也只有一根头发丝的宽度。杆菌的长度约2微米，故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长。 物体的表面积和体积之比称为比表面积。大肠杆菌的比表面积是人的30万倍。 微生物的数量和种类是十分惊人的。一滴水，一颗土粒往往都是一个微生物“社会”。其中以土壤内的生存密度最大，1克较肥活的土壤常含有几亿到几十亿个微生物；贫瘠土壤每克也含有几百万到几千万个，一只肮脏的苍蝇，全身能携带5亿多个细菌，三对足能粘附700万至1000万个细菌，可见微生物的密集度之大。,2019年8月3日星期六,11,2、吸收多，转化快,微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。 如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40年之久。,2019年8月3日星期六,12,3、生长旺，繁殖快,微生物以惊人的速度“生儿育女”。 例如大肠杆菌在合适的生长条件下，12.520分钟便可繁殖一代，每小时可分裂3次，由1个变成8个。每昼夜可繁殖72代，由1个细菌变成重约4722吨，细菌数量的翻番只能维持几个小时，不可能无限制地繁殖。因而在培养液中繁殖细菌，它们的数量一般仅能达到每毫升1-10亿个，最多达到100亿。中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌。,2019年8月3日星期六,13,4、适应强，易变异,多数细菌能耐0196的低温； 在海洋深处的某些硫细菌可在250300的高温条件下正常生长； 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活； 产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年、几百年。 由于微生物繁殖快，也可在短时间内产生大量变异的后代。正是由于这个特性，人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物，如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升20单位上升到近10万单位，利用变异和育种得到如此大幅度的产量提高。,2019年8月3日星期六,14,5、分布广，种类多,微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。 微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营，约占微生物总量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，不论数量或种类均最多。在肥沃的土壤中，每克土含有20亿个微生物，即使是贫瘠的土壤，每克土中也含有35亿个微生物。 空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。哪里的尘埃多，哪里的微生物就多。 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的20%，人类生产和生活中仅开发利用了已发现微生物种数的1%。,2019年8月3日星期六,15,微生物的特点,个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 吸收多，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍 生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代 适应性强，易变异（耐药性产生的原因） 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。,2019年8月3日星期六,16,葡萄球菌,酵母菌（芽痕）,棒状杆菌,大肠杆菌,弧状菌,链球菌,2019年8月3日星期六,17,菌落单位,菌落单位-CFU 由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉眼可见的菌落，每个菌落就是1CFU,2019年8月3日星期六,18,微生物的菌落形态,2019年8月3日星期六,19,微生物的分布,土壤：是微生物生活的最适环境 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所 空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。,2019年8月3日星期六,20,人体中的微生物,人自出生后，外界的微生物就逐渐进入人体。在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种腔道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群，包括细菌、真菌、螺旋体、支原体等，称为正常菌群。 能使宿主致病的为致病菌或病原菌，不能造成宿主感染的为非致病菌或非病原菌。有些细菌在正常情况下并不致病，但当在某些条件改变的特殊情况下可以致病，这类菌称为条件致病菌或机会致病菌,2019年8月3日星期六,21,人体内外微生物,人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。,2019年8月3日星期六,22,人是最大的污染源？,人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/min，一般活动时发菌量为1501000个/min，行走时发菌量为9002500个/min。咳嗽一次发菌量为70700个/min，喷嚏一次为400060000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。,2019年8月3日星期六,23,如何阻断人体污染源,进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触产品。 无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。,2019年8月3日星期六,24,人体中的微生物,部位 常见菌种 皮肤 表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等 口腔 链球菌（甲型或乙型）、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、 白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏 球菌、类白喉杆菌 胃 正常一般无菌 肠道 类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球 菌、 葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破 伤风杆菌、产气荚膜杆菌等 鼻咽腔 甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链 球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等 眼结膜 皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等,2019年8月3日星期六,25,防范措施：,1.建立个人健康档案 新员工入厂全面体检，直接接触药品的生产人员每年至少体检一次， 如发现有传染疾病应立即隔离。 2.清洁的个人卫生 勤洗澡、理发、剪指甲 正确的洗手、更衣流程及防护方式 3.洁净区内的自我约束 不佩带首饰，不化妆 进出次数应可能地少，在操作过程中应减小动作幅度 规范各类操作及避免违规行为,2019年8月3日星期六,26,防范措施：,一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对 而言，脚底是最脏的部分。 脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。 一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微 生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。 二更 带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱 下口罩。 带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整 的包裹头发。 穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开 连体服。 手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%的酒精能杀灭 手部95%以上的微生物。,2019年8月3日星期六,27,设备的卫生应从设备的设计开始，要求产尘少、脱落粒 子少、易清洗、消毒和灭菌。设备与物料的接触面不得与物 料反应，不得吸附物料，设备的内表面材质要平整、光滑， 凹凸不平的区域不仅不易清洗，而且易存留残液等，它将成 为微生物繁殖滋生的场所。管道的安装要避免批与批之间的 交叉污染，管道要能定期清洗消毒。 防范措施： 建立相应的设备清洁保养制度及规程 保持一贯的清洁状态，发现污渍、污水、残余物等应立即清除 机修人员在线维修设备时，应注意操作尽量减少对药品产生污染 对直接接触药品的设备进行清洁验证,设备与微生物,2019年8月3日星期六,28,物料与微生物,对于物料卫生的问题，从供应商的审计、物料进厂后的检 验、使用全过程，均要严格按照GMP规定的卫生要求进行。 物料主要包括：原辅料、玻瓶、工艺用水。 防范措施： 正确的原辅料的脱包、消毒、运送(容器)及投加操作。 正确的胶塞清洗流程。 对精洗残余水、清洗水及工艺用水的定期监测。 原辅料使用前的抽检。,2019年8月3日星期六,29,操作方法与微生物,洁净区人员的操作是否规范，影响药品灭菌前的微生物 负荷，最终将影响产品的无菌保证值(SAL)。 F06D121+D121lgN0 F0 :标准灭菌时间; N0：产品灭菌前的带菌量； D121：在121下杀灭90%微生物所需时间。 防范措施： 制定日常操作的规范并严格执行。 直接与药品有接触的操作应带无菌手套并频繁冲洗，操作过程中动作不宜过大。 加强对微生物知识的了解，增强无菌操作意识。,2019年8月3日星期六,30,环境与微生物,环境中的微生物种类繁多，主要有附着于尘埃上的从 地面飞起的球菌属（包括八叠球菌属在内的好氧菌）；形 成孢子的好氧性杆菌（如枯草芽孢杆菌）；青霉等霉菌的 孢子等。微生物的存在严重影响着药品生产的安全，依次 必须加以严格控制。,新版GMP对洁净区微生物的动态要求,2019年8月3日星期六,31,防范措施：,1.合理的厂房布局及高效的空气过滤系统 2.完善的洁净区日常卫生管理 3.每天进行空气消毒(臭氧、甲醛、过氧化氢熏蒸) 4.定期对洁净环境进行监测,2019年8月3日星期六,32,微生物的作用及危害,1. 微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。 2. 微生物的危害 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。,2019年8月3日星期六,33,微生物的类群和形态结构,一、细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。 细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。 细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。,2019年8月3日星期六,34,球菌(coccus),脑膜炎奈瑟菌,双球菌(diplococcus),2019年8月3日星期六,35,链球菌(streptococcus),球菌(coccus),2019年8月3日星期六,36,球菌(coccus),葡萄球菌(streptococcus),2019年8月3日星期六,37,球菌(coccus),四联球菌(tetrad),2019年8月3日星期六,38,球菌(coccus),八叠球菌(sarcina),2019年8月3日星期六,39,杆菌(bacillus),不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。,2019年8月3日星期六,40,杆菌的形态多样,杆菌(bacillus),2019年8月3日星期六,41,杆菌(bacillus),杆菌的形态多样,分枝杆菌,双歧杆菌,2019年8月3日星期六,42,螺形菌(spiral bacterium),2019年8月3日星期六,43,2、细菌的繁殖,细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长率随之下降并趋于停滞。,2019年8月3日星期六,44,微生物的生长规律,微生物整个生长过程可以分为4个阶段： 延滞期：细胞变大，细胞内RNA含量增高，培养基不丰富 时延滞期较长。 对数期：细胞分裂最快，代谢旺盛，生长速率由营养成分决定。 稳定期：总体数量保持不变，开始产生代谢产物或开始形成芽孢。 衰亡期：由于代谢毒素的积累，死亡数超过新生数。,最易处理期,2019年8月3日星期六,45,细菌：是一类细胞细而短、直径一般为0.55.0m，结 构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物， 分布广泛。生长最适温度为3035，主要去除方法有紫外杀 菌法、滤膜过滤法及高温杀灭法等。 个别细菌如：嗜热脂肪芽孢杆菌，能在121条件，可耐受 45min。,灭菌柜验证中作为生物指示剂 最适合生长条件为5560,2019年8月3日星期六,46,二、真菌,真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。 真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。 真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。,2019年8月3日星期六,47,三、病毒,病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。 病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,2019年8月3日星期六,48,病毒猪流感病毒 猪流感(Swine influenza，SI)是由A型流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。 H1N1亚型流感病毒 流感病毒属于正黏病毒科。 A型流感病毒可以感染多种动物，包括许多禽类和哺乳动物。 禽流感病毒亚型主要为H5N1、H9N2、H7N7 猪流感症状 人感染猪流感后的症状与感冒类似，患者会出现发烧、咳嗽、疲劳、食欲不振等。,猪流感病毒,病毒是最常见的致病微生物，人类传染病中大约75%是由病毒引起的。乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒,2019年8月3日星期六,49,肝炎病毒,病毒性肝炎是危害人类健康的最严重的疾病之一。主要分为 甲型、乙型、丙型、丁型。其中甲型肝炎病毒由消化道传 播，引起急性肝炎，不转为慢性肝炎或慢性携带者。乙型与 丙型肝炎病毒均由输血、血制品或注射器污染而传播，除急 性肝炎外，可致慢性肝炎，并与肝硬化以及肝癌有关，故危 害性极为严重。丁型肝炎病毒必须在乙型肝炎病毒等辅助下 方能复制，故其传播途径与乙型肝炎病毒相同。,2019年8月3日星期六,50,1.甲型肝炎病毒（HAV）在体外抵抗力较强， 在-20条件下保存数年，其传染性不变，能 耐受5630分钟的温度及PH3的酸度。 甲型肝炎病毒引起甲型肝炎，这种肝炎的 传染源主要是病人。其病毒通常由病人粪便 排出体外，通过被污染的手、水、食物、食 具等传染，严重时会引起甲型肝炎流行。如 1988年1月，上海市出现了较大规模的流行性 甲型肝炎，主要原因是人们食用了被甲肝病 毒污染的毛蚶。,甲型肝炎病毒图,2019年8月3日星期六,51,乙型肝炎病毒,2.乙型肝炎病毒（HBV）HBV在体外抵 抗力很强，紫外线照射，加热604 小时及一般浓度的化学消毒剂(如苯 酚，硫柳汞等)均不能使之灭活，在 干燥或冰冻环境下能生存数月到数 年，加热60持续10小时，煮沸 (100)20分钟，高压蒸汽12210分 钟或过氧乙酸(05%)7.5分钟以上则 可以灭活。 传播途径主要为：血液、血制品传 播，母婴传播。,2019年8月3日星期六,52,.肝炎病毒常用的家庭消毒方法 肝炎病毒常用的家庭消毒方法有物理消毒法与药物消毒法两种。 物理消毒法： 1）高压蒸汽消毒法：通常采用98.066千帕压力与121-126C温度10- 15分钟，可杀灭各型肝炎病毒；采用蒸笼蒸煮或家用高压锅，待冒气盖 阀后20分钟，即可达到消毒效果 2）煮沸消毒法：在100C的温度下煮1分钟，就能使乙、丙、丁、戊 型及甲型肝炎病毒失去活力和传染性；煮沸15-20分钟以上，可将各型肝 炎病毒杀灭。 本法适合于食具、护理用具及棉织品的消毒。至于塑料制品、合成纤 维及皮毛制品则不适合。新洁尔灭、氯已定（洗必泰）不能肯定，度米 芬、来苏、石炭酸、米醋、熏醋对乙型肝炎病毒无作用。此外，肝炎患 者的剩饭剩莫须有最好也要煮沸消毒后再弃去。 3）阳光曝洒法：凡不能蒸煮的物品，则宜采用本法，一般曝晒6小时 以上。 4）焚烧法：患者污染并丢弃的杂物、一次性医护用品、垃圾（包括月 经纸、手纸）等均应焚烧掉，以达彻底消毒之目的。,2019年8月3日星期六,53,HIV,1.传染源和传播途径 HIV感染者是传染源，曾从血液、精液、阴道分泌液、 眼泪、乳汁等分离得HIV。 传播途径有： 性传播：通过男性同性恋之间及异性间的性接触感染。 血液传播：通过输血、血液制品或没有消毒好的注射器传 播，静脉嗜毒者共用不经消毒的注射器和针头造成严重感 染，据我国云南边境静脉嗜毒者感染率达60%。 母婴传播：包括经胎盘、产道和哺乳方式传播。,2019年8月3日星期六,54,病毒 呼吸道病毒、肠道病毒、肝炎病毒 虫媒病毒、疱疹病毒、逆转录病毒,HIV病毒,腺病毒,2019年8月3日星期六,55,热原与内毒素,许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。 1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖。 2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反应。 3、其他理化特性耐热性：120加热4h，可破坏98%。180加热2h或250加热30min，才可彻底破坏。滤过性：其体积小，约在15nm之间，故能通过滤器进入滤液中。具有水溶性及不挥发性。能被强酸、强碱和氧化剂破坏,2019年8月3日星期六,56,热原与内毒素,4、热原引入的途径 从溶剂中带进 从原料中带进 从容器、用具、管道和装置等带进 制备过程中的污染 从输液器带入,2019年8月3日星期六,57,内毒素大量进入血液就会引起发热反应“热原反应”。内毒素大量进入、集聚于血液中，超过机体各自卫系统的清除能力，则可导致不同程度的内毒素血症。对于易于引入内毒素的药品医疗器械等必须通过内毒素检测。内毒素的检测常用家兔热原法和鲎试验法。中国药典收录的细菌内毒素检查法包括2种方法：凝胶法和光度法，使用鲎试剂来定性或定量检测内毒素。,2019年8月3日星期六,58,热原与内毒素,5、消除细菌内毒素的方法 高温破坏法：可用180干烤34h或250干烤30min。 吸附法：一般选用活性炭。 蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水。 化学酸碱和氧化法。 离子交换法。 反渗透法。 凝胶过滤法。 超滤法,2019年8月3日星期六,59,药品的微生物污染,药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品及生产环境带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。 污染药品的细菌：常见污染药物制剂的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。 药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员,2019年8月3日星期六,60,消毒与灭菌,下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。,2019年8月3日星期六,61,化学指示物 chemical indicator:利用某些化学物质对某一杀菌因子的敏感性，使其发生颜色或形态改变, 以指示杀菌因子的强度(或浓度)和作用时间是否符合消毒或灭菌处理的要求 生物指示物 biological indicator:将适当载体染以一定量的特定微生物, 用于指示消毒或灭菌效果的制品。,2019年8月3日星期六,62,消毒与灭菌的一般原理 作用于微生物的蛋白，破坏微生物的膜蛋白结构 作用于微生物的核酸，不能进行转录、复制及蛋白合成 干扰细菌的酶系统和代谢 同时作用于微生物蛋白和核酸,2019年8月3日星期六,63,芽胞,芽胞是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞； 一般的芽胞在普通的条件下可保存几年至几十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5亿年； 其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力； 杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。,2019年8月3日星期六,64,消毒与灭菌,一、物理灭菌方法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法,2019年8月3日星期六,65,消毒与灭菌,热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 1、干热灭菌法采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 2、湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。,2019年8月3日星期六,66,消毒与灭菌,辐射灭菌法 1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超过1.0米为宜 2、电离辐射 高速电子、X射线、射线 3、微波 波长1mm1m,2019年8月3日星期六,67,消毒与灭菌,滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。 滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。 适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,2019年8月3日星期六,68,消毒与灭菌,二、化学灭菌方法 许多化学药物能影响微生物的化学组成、物理结构和生理活性，从而发挥防腐、消毒及灭菌的作用。 洁净室(区)应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。,2019年8月3日星期六,69,甲醛、环氧乙烷及戊二醛化消毒剂发展的三个里程碑 一、 醇类 去除细菌胞膜中的脂类，并使菌体蛋白质变性 乙醇、异丙醇 7075乙醇杀菌力最强，高浓度乙醇杀菌能力反而降低 95-100%的乙醇具有很强的脱水作用, 能使菌体表面蛋白质迅速凝固，当遇到微生物细胞时, 细胞表面很快脱水形成一层保护膜,乙醇分子再不易渗透保护膜起到杀菌作用。对细菌芽胞无杀灭能力，对微生物消灭作用较差。其消毒灭菌作用受蛋白质影响较大。异丙醇的杀菌作用比乙醇强，且挥发性低，但毒性较高。 二、酚类 低浓度时破坏菌细胞膜，使胞质内容物漏出；高浓度时使菌体蛋白质凝固。也有抑制细菌脱氢酶、氧化酶等作用。 石炭酸、来苏尔、洗必泰等,化学消毒灭菌法,2019年8月3日星期六,70,三、烷化剂 对细菌蛋白质和核酸的烷化作用 （一）醛类 甲醛 通过对微生物蛋白质分子上的氨基、羟基、巯基以及对核酸等的烷化作用, 破坏其生命的基本结构, 使之灭活。甲醛气体的杀菌能力是与其浓度成正相关关系。由于甲醛气体穿透力极差,不能穿透管壁进入管腔, 只能通过扩散作用进入腔内。在狭窄的管腔内的甲醛气体, 难以达到有效浓度。由于甲醛气体穿透力差, 为保证器械和物品的消毒效果, 熏蒸消毒时物品应摊开, 分层摆放或悬挂, 避免重叠摆放以及打包装盒等, 确保物品表面充分接触甲醛气体, 以达到预期的消毒效果 戊二醛 杀菌机理主要是其活性基团能与细菌蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性。戊二醛消毒液有广谱、高效、快速和持久的杀菌效果, 随温度升高, 溶液的活性增强, 对芽胞杀灭作用强, 7 小时可杀灭芽胞。杀菌谱广，效果好，性质稳定，杀菌速度快，使用浓度低，无毒性，比甲醛强2-10倍，在PH7.5-8.5时杀菌力最强，对人的刺激比甲醛小。 （二）环氧乙烷 广谱高效杀菌剂 沸点较低，可用水浴使其挥发，不宜超过60度。但易燃易爆，有中等毒性，对人体有毒灭菌机理是由于它的烷基的取代性质。对细菌、芽胞、真菌、微生物等各种微生物都有杀灭作用，消毒后残留量较大，需置通风处1时后才能使用。用于工业中一次性医疗器械用品的灭菌和皮毛工业的消毒。,2019年8月3日星期六,71,四、 氧化剂 与酶蛋白中的-SH基结合，导致酶活性丧失 （一）含氯消毒剂 能溶解于水产生次氯酸，并分解放出具有强氯化作用的新生态氯起杀菌作用。作用机理是由于氧化作用和抑制细菌的某些含巯基酶使细菌的生长繁殖发生障碍。有脱色能力，无毒性。不足之处是穿透力较差，同时有腐蚀和漂白作用。 杀菌力强，能杀灭细菌繁殖体、芽胞 漂白粉、金星消毒液、“84”消毒液、氯代异氰尿酸、二氧化氯 （二）含碘化合物 碘酊、碘伏 氧化细菌原浆蛋白的活性基团，并与蛋白质的氨基结合而使其变性 主要缺点是有机物干扰大,2019年8月3日星期六,72,（三）过氧化物类消毒剂 过氧乙酸、过氧化氢 在水中可形成氧化能力很强的自由羟基，破坏蛋白质的分子结构 杀菌作用强，应用广泛，但稳定性差 （四）高锰酸钾 强氧化剂 1:1000与1:1250的浓度都具有杀菌作用。0.5-1%的高锰酸钾水溶液于分钟内可杀死大多数细菌；水溶液于小时内可杀死细菌芽孢。在酸性溶液中杀菌作用增高。对霉菌杀伤效果很差。 （五）臭氧 强氧化剂，不稳定； 杀菌迅速，无残留 用于空气、饮用水、生活用水等的消毒,2019年8月3日星期六,73,五、表面活性剂 减低液体的表面张力，使物品表面油脂乳化易于除去，有清洁作用 能吸附于细菌表面，改变胞壁通透性，使菌体内的酶、辅酶、代谢中间产物逸出，呈现杀菌作用 表面活性剂有阳离子型、阴离子型和非离子型三类。因细菌带阴电，故阳离子型杀菌作用较强。非离子型对细菌无毒性，有些反而有利于细菌的生长。 新洁尔灭 可杀死细菌繁殖体，但对结核杆菌与真菌的效果不好 S/D法（有机溶剂/表面活性剂法） 六、重金属盐类 与带阴电荷的菌体蛋白质结合，使之发生变性或沉淀 硫柳汞、二氯化汞（升汞）,2019年8月3日星期六,74,消毒与灭菌 常用消毒剂种类和用途,2019年8月3日星期六,75,常用化学杀菌剂应用范围和常用浓度表,2019年8月3日星期六,76,消毒灭菌的效果受环境、微生物种类及消毒剂本身等多种因素的影响 消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物,影响消毒灭菌效果的因素,2019年8月3日星期六,77,卫生管理,1.了解污染源 对药品生产全过程可能造成污染的来源，进行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。 2.进行微生物监测 在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。,2019年8月3日星期六,78,卫生管理,3.定期进行环境卫生清洁 严格按照“管理规程、卫生管理规定”对生产科各个区域进行清洁卫生，确保生产区域符合GMP卫生管理要求。 4.做好生产人员卫生管理 新进人员的健康检查：药品生产企业在招收新职工时，一定要对新职工进行全面的健康检查，要确保新员工不患有急性或慢性传染病。 建立生产人员健康档案：药品生产企业应对职工建立个人健康档案，直接接触药品的生产人员至少每年体检一次；患有传染病或体表有伤口者不得进入洁净室。 培养药品生产人员良好的个人卫生习惯 洁净区生产人员要求：进入洁净室必须更换洁净服；并按照规定程序进出洁净室；在洁净区生产操作动作要准、稳、轻、少，减少不必要的谈话和活动；生产人员应定期进行微生物基础知识培训和卫生教育。,2019年8月3日星期六,79,关于污染的基本知识 1药品常见的污染形式 尘粒污染 药厂中可能存在的一些微粒。 微生物污染 2药厂传播污染的主要媒介 空气； 清洗用水； 物料及其包装容器表面； 人：人是最常见的污染源 人的头发和皮肤咳嗽或喷嚏排出物衣服 化妆品和手饰生产过程中人群混杂所带来的微生物。,2019年8月3日星期六,80,环境卫生 （1）外环境（洁净厂房外部环境） 总体布局合理，生产、生活、行政、辅助系统分区，不得相互妨碍； 规划考虑风向，严重空气污染源应处于主导风向的下风侧，减少交叉污染； 厂区内人流、物流道路分开； 生产区内及周围无露土地面，厂区内道路硬化； 洁净厂房离主干道距离大于50米； （2）内环境（洁净厂房） 按生产工艺流程及所要求的空气洁净级别合理布局 洁净室（区）的内表面平整光滑、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒，墙壁与地面的交界处宜成弧形，弧度应50mm，以减少灰尘积聚和便于清洁 洁净室(区)的窗户、天棚及进入室内的管道、风口、灯具与墙壁或天棚的连接部位均应密封 门窗造型简单、不易积尘、清洁方便、与内墙面平，无窗台，无外走廊洁净室的外窗采用双层玻璃窗。,2019年8月3日星期六,81,2 设备卫生 设备、容器、工具按定置管理要求放置，不得随意乱放，保持清洁 。管道、管线排列整齐，并包扎光洁，无跑、冒、滴、漏。洁净区设备容器采用相应的消毒措施后才可使用。 各部门应根据本部门的实际情况，制定该部门所使用的设备、容器、生产工具、照明器具、搬运工具的清洁、保养方法。操作人员必须按相关SOP要求，对这些器具清洗至符合标准，作好记录后，才能使用。 更换产品或换批时，应严格清场，设备、工用具、容器应彻底清洗干净。,2019年8月3日星期六,82,3人员卫生 手的卫生 指甲修剪，手上无伤口； 不戴手表、戒指和其他饰物，不用指甲油； 生产操作前、后，接触污物后，要洗手消毒。 不得裸手直接接触药品 头部、面部、体表卫生 经常洗澡、理发、勤换衣服，保持个人清洁，戴帽不露头发，戴口罩不露鼻、口。 不蓄胡须，不化妆，不佩戴项链、耳环等饰品，眼镜应消毒。,2019年8月3日星期六,83,（3）健康要求 患有传染病、隐性传染病、精神病患者、皮肤病（如皮癣、灰指甲等）、体表有伤口者及药物过敏者，不得从事药品生产工作。 生产人员至少每年体检一次并建立健康档案。 （4）人员行为要求 进入生产区域需穿戴规定的工作服（包括工作衣、帽、鞋），按规定的程序进入。工作服不得穿出本区域以外的地方。 进入一般生产区的人员在生产场所不得吸烟，不得吃食物，不得存放非生产物料与私人杂物。工作服按规程要求洗涤，必要时增加洗涤次数。 洁净区工作服应按要求换洗，经常保持清洁干净。 生产车间操作人员的动作要稳、轻、准，减少不必要的谈话和走动 生产人员应定期接受生产车间进行的药品生产的卫生教育，自觉强化生产药品必备的卫生知识。,2019年8月3日星期六,84,洁净室（区）物料卫生要求： 进入生产的原辅料必须符合标准，不洗即用的内包装材料、容器，其生产环境的空气洁净级别必须与药品生产相一致。对可以重复使用的盛装容器，应按SOP要求清洗干净。 直接与药品（中间产品）接触的设备、工具、容器、内包装容器最后一次冲洗用水应与生产用水一致。 物料净化用室包括物料清洁室、消毒室、气闸室或传递柜（窗）、备料室、（弃废）物料出口的专用传递设施等。 物料应经净化或消毒灭菌后通过物流通道进入。 物流通道不能作为通路 生产过程中产生的废弃物出口不能与物料进口合用同一气闸或传递柜（窗），宜单独设置专用传递设施。,2019年8月3日星期六,85,清洁规程 清洁规程内容 1清洁范围、对象； 2清洁方法和程序； 3清洁工具； 4清洁频次； 5使用的清洁剂、消毒剂配制方法及使用注意事项； 6清洁剂更换周期； 7清洁工具的清洁方法和存放地点； 8清洁卫生检查及评价。 制定范围 1设备； 2器具、容器（包括运输工具）； 3生产区内的运输工具； 4墙面、天花板、地面、台面、门窗； 5管道；风道、过滤器； 6下水道、地漏； 7卫生间； 8水系统； 9工作服。,2019年8月3日星期六,86, 清洁剂与消毒剂 1要求： 对设备、容器、物料及产品不发生化学反应，不污染； 安全、无毒；无腐蚀性； 不带有颗粒性物质（洗衣粉就有颗粒性物质，不宜选用）； 2常用的消毒剂及用途：,2019年8月3日星期六,87,清洁工具 生产用清洁用具管理规定 1要求： 不易脱落纤维和颗粒； 不同区域的清洁工具有明显区别，不混用； 不选用易滋生微生物的材料，如：木、棉； 使用后及时清洗。 2洁净区内清洁用抹布有红、蓝、黄、白四种颜色，红色用于抹设备及工器具表面，蓝色用于抹墙壁，黄色用于抹地面，白色用于抹设备内壁及容器（如物料周转桶）内表面。 3存放 存放间按不同区域设置，规定位置存放； 存放间应通风； 不同洁净级别的清洁工具不能存放在一起。,2019年8月3日星期六,88,清场管理规定 1 清场的定义：清场是指同一岗位上，本批生产结束后所进行的一系列有关设备、容器公用器具、操作间的清洁及物料、生产技术标准的清理活动。 2 清场实施的条件：每批产品生产结束后；更换产品品种、规格、批号时；生产中发生意外污染，经QA确认需要进行清场时 3 清场的内容：清除生产场所的剩余物料、中间产品；清除生产场所的容器及工用器具；技术标准的清理；设备、管道的清洁；生产环境的清洁。 4 清场实施的程序： 物料的清除容器及工用器具的清洁技术标准的清理设备、管道的清洁生产环境的清洁 5 清场有效期。,2019年8月3日星期六,89,状态标志管理规定 1状态标志分为六类：物料状态标志、设备状态标志、管道状态标志、容器状态标志、生产操作间状态标志、计量器具状态标志。 2物料状态标志： 物料状态卡：标明品名、规格、批号、数量、质量、操作人、生产日期。 质量：分为合格、不合格、待检三种。分别用绿、红、黄牌表示 3设备状态标志： 已清洁：表示设备处于清洁完好等待使用状态， 运行：表示设备正处于开启运转状态。 检修：表示设备处于等待检修或正在检修状态。 待清洗：表示已清洗过效期或设备使用检修后清洁之前所处的状态。 清洗：表示设备处于正在清洁状态。,2019年8月3日星期六,90,4.管道状态标志：与设备连接的主要固定管道及生产区内主要管道由设备部标明管内介质名称、流向，主要固定管道按以下规定作色标： 粉红色表示“蒸汽”；绿色表示“饮用水”“纯化水”； 蓝色表示“压缩空气”；白色表示“真空”；黄色表示“物料”； 5.容器状态标志： 已清洁：表示容器已经清洁、干燥、消毒，已清洁容器必须存放于器具间内。 使用：表示容器处于正在使用的状态。该类容器只能出现在生产操作间、中间站及器具清洗间内。 6.生产操作间状态标志： 岗位状态标牌：标明工序名称、生产品名、规格、批号、批量、工序负责人、生产日期。表示该岗位正在进行生产操作的有关情况。 清场合格证：表示该生产操作间清场合格，QA检查员核准的允许下次生产的凭证。 7计量器具状态标志： 校验合格证：表示该计量器具经校验合格可在规定的期限内使用。,2019年8月3日星期六,91,空调净化系统管理制度 洁净区及空调系统消毒灭菌 1当空调系统停运后再重新开工前，质保部检测合格后，再自净1小时后方可进入洁净区；检测洁净度不合格时，应进行重新消毒。 2. 高效过滤器在下列情况下应予更换，并做好记录：气流速度降到最低限度，即使更换初中效过滤器仍不能增大时；高效空气过滤器风量为原风量70%时；高效空气过滤器出现无法修补的渗漏时。 3. 检查周期：洁净区悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、风速检测， 并计算各房间的换气次数。微生物限度检测室：沉降菌，悬浮粒子。高效过滤器调换或修理后需再检测。 4. 洁净区空气消毒灭菌频率：每天一次。,2019年8月3日星期六,92,纯化水系统清洗消毒标 1消毒剂：蒸汽。 2清洁消毒频率：每周一次。 3消毒时间：30分钟。 4纯化水的储存周期。 5纯化水储罐的清洗：打开纯化水储罐的人孔盖，罐内加入适量饮用水，用带有丝光毛巾的不锈钢擦棒，按从上至下的顺序擦洗罐内壁，将罐内水放尽。关闭排水阀，加入纯化水适量，将罐内壁清洗干净。 6纯化水各用水点的卡盘式阀门每周由使用部门清洗一次。每次使用纯化水前，先打开U型管排水阀放水冲洗；停产停止循环后，应放掉U型管内余水。,2019年8月3日星期六,93,常用的灭菌方法 消毒、灭菌、无菌的区别 微生物的特点 影响微生物的营养物质、生长繁殖条件？ 哪些措施可控制人传播微生物污染 （人机料法环五方面）,2019年8月3日星期六,94,填空50分 选择5题10分 简答25-30分,2019年8月3日星期六,95,