大赛璐手性柱注意事项

注意事项及常见问题注意事项及常见问题 多糖涂敷型多糖涂敷型 键合型键合型 CR（+），），MA（+） AGP 其他其他 Daicel大部分手性柱是涂敷型产品，在市场上具有独特性。大部分手性柱是涂敷型产品，在市场上具有独特性。 若导入错误的溶剂若导入错误的溶剂(CH2Cl2、乙酸乙酯、甲苯等、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子会，柱子会马上被破坏马上被破坏。 当流动相或样品溶液导入错误的溶剂时，柱压剧增，分离当流动相或样品溶液导入错误的溶剂时，柱压剧增，分离突然变差突然变差。 一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。 若您遇到此类分析故障，请对照出厂报告重新确认柱子的若您遇到此类分析故障，请对照出厂报告重新确认柱子的性能或与大赛璐联系性能或与大赛璐联系多糖涂敷型多糖涂敷型 DaicelDaicel正相手性柱的流动相和样品溶液不能使用水溶正相手性柱的流动相和样品溶液不能使用水溶液。液。 若不小心导入水，柱子不会彻底受损若不小心导入水，柱子不会彻底受损。 。 只需要使用色谱级无水乙醇低流速将水置换出来只需要使用色谱级无水乙醇低流速将水置换出来。 。 D Daicelaicel反相手性柱，水相的含量不高于反相手性柱，水相的含量不高于90%.90%.多糖涂敷型多糖涂敷型1.用异丙醇将HPLC所有管路彻底清洗。2.用流动相将HPLC所有管路彻底清洗。所有溶剂入口所有溶剂入口泵泵与进样阀之间定量环进样阀清洗液进样阀与柱子之间柱子与检测器之间检测器多糖涂敷型多糖涂敷型 正相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为正相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为Hexane/IPA=90/10，室，室温保存。温保存。 反相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为反相多糖涂敷型柱通常保存溶剂为H2O/ACN=60/4080/20，室温保存。，室温保存。多糖涂敷型多糖涂敷型 IA,IB和和IC等键合柱可用于正相，也可用于反相。但需要小等键合柱可用于正相，也可用于反相。但需要小心过渡，通常用异丙醇。心过渡，通常用异丙醇。 IA修复方法：先用修复方法：先用EtOH小流速冲洗小流速冲洗30min，再用，再用DMF，小，小流速冲洗流速冲洗3小时，然后小时，然后EtOH过渡，验柱。若效果不好，再过渡，验柱。若效果不好，再用用EtOH冲洗冲洗30min，然后，然后THF冲洗冲洗2小时。小时。 IB，IC修复方法：用乙酸乙酯冲洗修复方法：用乙酸乙酯冲洗30min-120min，在室温，在室温下保存下保存2天或更久。验柱。天或更久。验柱。键合型键合型CR（+） MA（+） 安装色谱柱前，整个仪器管路先用纯水清洗，再安装色谱柱前，整个仪器管路先用纯水清洗，再用流动相清洗。用流动相清洗。 CR（+），甲醇的含量低于），甲醇的含量低于15%. 样品中不含钾离子。使用后保存在纯水中，放置样品中不含钾离子。使用后保存在纯水中，放置于冰箱。于冰箱。 MA（+），甲醇或乙腈的含量低于），甲醇或乙腈的含量低于15%.硫酸铜硫酸铜aq.保存。保存。CR（+）-出峰不断提前，或没有保留。出峰不断提前，或没有保留。这是填料流失的表现，主要是由于甲醇的比例超过这是填料流失的表现，主要是由于甲醇的比例超过15%或是系统中进了有机溶剂造成的，以上情况造成的填料或是系统中进了有机溶剂造成的，以上情况造成的填料流失是不可逆的损坏，柱子将无法修复。流失是不可逆的损坏，柱子将无法修复。可能造成此现象的原因：可能造成此现象的原因：泵的抽力不正常泵的抽力不正常配制的高氯酸水溶液密度不均匀配制的高氯酸水溶液密度不均匀流动相中甲醇的比例超过流动相中甲醇的比例超过15%在使用前未用纯水彻底冲洗整个系统在使用前未用纯水彻底冲洗整个系统样品溶解过程中使用了甲醇等有机溶剂，或者油样品溶解过程中使用了甲醇等有机溶剂，或者油状样品中有有机溶剂残留状样品中有有机溶剂残留流动相及样品溶液中有流动相及样品溶液中有K+存在存在CR（+） MA（+） IPA含量最好低于含量最好低于25%，其他有机相含量最好低于，其他有机相含量最好低于15%. 建议使用温度：建议使用温度：20-25. pH范围：范围：4-7. 缓冲盐溶液浓度不超过缓冲盐溶液浓度不超过100mM.AGPl流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。l样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。l流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂，流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂， 如如IPA, EtOH，流速应控制在，流速应控制在0.1-0.3 ml/minl 每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的色谱柱说明书色谱柱说明书。l 彻底过滤流动相及样品溶液。彻底过滤流动相及样品溶液。l 样品预处理样品预处理l 更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速l 仪器设定保护柱压仪器设定保护柱压原因：原因：后果：后果：l 长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。解决方法：解决方法：其他其他-压力压力残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留1.用用醇洗涤可除去大部分的碱性残留物醇洗涤可除去大部分的碱性残留物2.用酸洗涤也可除去碱性残留物用酸洗涤也可除去碱性残留物3.用碱洗涤可除去酸性残留物用碱洗涤可除去酸性残留物4.或分开使用酸性条件手性柱和碱性条件手性柱或分开使用酸性条件手性柱和碱性条件手性柱其他其他- -“残留效应残留效应” ” 问：手性柱谱图中异构体的分离度下降了，可能问：手性柱谱图中异构体的分离度下降了，可能是什么原因，该怎么办？是什么原因，该怎么办？ 答：分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色答：分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。变化。 首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上的。如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。其他其他- -分离度下降分离度下降其他其他- -峰裂分现象峰裂分现象 问：手性柱谱图中的峰出现裂分，可能是什么原因，该怎问：手性柱谱图中的峰出现裂分，可能是什么原因，该怎么办？么办？ 答：峰裂分的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了答：峰裂分的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。有时样品溶液浓变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。有时样品溶液浓度太高，进样量太大也会裂缝，这种情况只需减少浓度进度太高，进样量太大也会裂缝，这种情况只需减少浓度进样量即可。样量即可。 如果排除了各种外在因素，那么色谱柱本身的原因可能是如果排除了各种外在因素，那么色谱柱本身的原因可能是柱头被污染，或者柱压太高导致柱头塌陷。柱头被污染，或者柱压太高导致柱头塌陷。 柱头污染的话，可以按照说明书采用不同的溶剂溶剂冲洗柱头污染的话，可以按照说明书采用不同的溶剂溶剂冲洗色谱柱，最好是反方向冲洗；或者更换保护柱。色谱柱，最好是反方向冲洗；或者更换保护柱。 如果是压力太高导致柱头塌陷，那么除了增补填料，基本如果是压力太高导致柱头塌陷，那么除了增补填料，基本没有其他方法补救了，只能更换色谱柱。没有其他方法补救了，只能更换色谱柱。 问：基线不稳定可能是哪些原因，如何解决？问：基线不稳定可能是哪些原因，如何解决？ 答：答：1.仪器刚从反相置换到正相系统时，基线会不稳定，仪器刚从反相置换到正相系统时，基线会不稳定，只需要多平衡一会儿即可。只需要多平衡一会儿即可。 2.检测器污染。卸下检测器，更换透镜；或者取出透检测器污染。卸下检测器，更换透镜；或者取出透镜，用甲醇、异丙醇、水或其他溶剂（根据该仪器平时的镜，用甲醇、异丙醇、水或其他溶剂（根据该仪器平时的使用情况而定）超声清洗。安装时注意透镜的方向，一面使用情况而定）超声清洗。安装时注意透镜的方向，一面是平面，一面凸透。是平面，一面凸透。 3.确认使用的两元（或三元四元）流动相彼此互溶性确认使用的两元（或三元四元）流动相彼此互溶性良好。良好。 4.确认正使用的流动相和仪器之前刚用过的流动相彼确认正使用的流动相和仪器之前刚用过的流动相彼此互融；若不互融，需要选择合适的溶剂过渡。此互融；若不互融，需要选择合适的溶剂过渡。 5.若噪音很大，有可能是需要更换氘灯。若噪音很大，有可能是需要更换氘灯。 6.柱压不稳定导致的基线不稳柱压不稳定导致的基线不稳?其他其他- -基线不稳基线不稳 问：柱压不稳定的原因可能有哪些，如何解决？问：柱压不稳定的原因可能有哪些，如何解决？ 答：答： 1泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，可用注射器泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，可用注射器抽出空气。抽出空气。 2比例阀失效，更换比例阀即可。比例阀失效，更换比例阀即可。 3泵密封垫损坏，更换密封垫即可。泵密封垫损坏，更换密封垫即可。 4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，通常是超声溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，通常是超声法脱气。法脱气。 5系统检漏，找出漏点，密封即可。系统检漏，找出漏点，密封即可。 6梯度洗脱，这时压力波动是正常的。梯度洗脱，这时压力波动是正常的。其他其他- -柱压不稳柱压不稳 问：正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基问：正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？线分离，什么原因？如何解决？ 答：该方法为答：该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线分离。采用流溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线分离。采用流动相溶解即可。动相溶解即可。 通常手性分析时，若流动相为通常手性分析时，若流动相为H/I，H/E体系，且体系，且Hexane不超过不超过85%，则溶解样品时可用流动相，也可用，则溶解样品时可用流动相，也可用100%醇直醇直接溶解。谱图通常差别不大。但是对小极性样品和流动相接溶解。谱图通常差别不大。但是对小极性样品和流动相，尤其，尤其hexane超过超过90%时，一定注意用流动相溶解时，一定注意用流动相溶解。其他其他- -小极性样品的溶解小极性样品的溶解 问：样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？问：样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？ 答：答： 1. 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。定。 2.流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。应等。 3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在在MA（+）柱上出现较多。）柱上出现较多。 4.酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。 5. 流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。流动相和样品溶液尽量现用现配。其他其他- -保留时间漂移保留时间漂移欢迎您访问！欢迎您访问！