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中药化学成分预试验大全（1）系统预试法应用一些简单的定性试验，对中药中所含各类化学成分作全面检查。 单项预试法根据需要，有重点的检查某类成分或某药效成分。 方法：试管反应+薄层层析检查 中草药主要来源于植物。植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。 各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味若者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。 中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时常常互相干扰，不易得到正确结果。因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。 一、 预试溶液的制备 1、 水提取液糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质 2、 乙醇提取液酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体 3、 5%HCl-乙醇提取液生物碱 4、 石油醚提取液甾体、萜类、脂肪油 （一）鉴别注意事项 1根据各灰成分不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。 2检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。 3检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。相差甚大时应事先调节。 4提取液较深时，常易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。 5鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。 6在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全医.学敎育网搜集整理面分析。首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应，否则应检查其他类成分能否产生该反应，从多方面加以判断。但也应注意，某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应，如检查黄酮类的盐酸镁粉试验，它只对黄酮类中的羟基黄酮类（黄酮醇类）反应明显，其余类的黄酮类则不甚明显，但也不能轻易否定不是黄酮类，为了避免孤立和片面的下结论，一定要全面考虑综合分析。 中草药化学成分一般鉴别试验屯只是一个初步判断，最后确证尚需进一步提纯，以鉴定后才能予以肯定。 中药化学成分预试验大全（2）：氨基酸、多肽、蛋白质氨基酸、多肽、蛋白质 （1）加热沉淀试验：加热煮沸 混浊或沉淀 （蛋白质）+5%H2SO4（不加热）混浊或沉淀 （2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4 紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质） （3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质） （4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液 各种颜色（氨基酸） （5）Millon反应：+Hg，H2NO2 红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成） （6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸 各色（蛋白质分子中有色氨酸组成） （7）氨基酸的薄层层析检查：吸附剂硅胶G 展开剂 n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O 显色剂0.25%茚三酮试液 紫红色斑点 （1）加热或矿酸试验：取检品的水溶液1ml于试管中，加热至沸或加5盐酸，如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。 （2）缩二脲试验：取检品的水溶液1ml，加10氧化钠溶液2滴，充分摇匀，逐渐加入硫酸铜试液，随加摇匀，注意观察，如呈现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸。 凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键（CONH）者均有此反应，能在碱性溶液中与Cu2+医.学敎育网搜集整理生成络合物，呈现一系列的颜色反应，二肽呈蓝色，三肽呈紫色，加肽以上呈红色，肽键越多颜色越红。 （3）茚三酮试验，取检品的水溶液1ml，加入茚三酮试液23滴，加热煮沸45分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋白质、胨类、肽类及氨基酸）。 氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。 【注】茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液pH值以57为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。 此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。 （4）氨基酸薄层层析检出反应： 吸附剂：硅胶G。 展开剂：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5） 显色剂：0.5茚三酮丙酮溶液，喷雾后于1100烘箱放置5分钟，显蓝紫允或紫色。中药化学成分预试验大全（3）：皂苷皂苷 （1）泡末试验：振摇 大量持续性泡末 +0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷） +0.1M NaOH 碱管高于酸管（甾体皂苷） （2）溶血试验：+2%红血球悬浮液 溶血 （3）LiebermanBurchard反应：+醋酐-浓硫酸 紫红色（三萜皂苷） 黄-红-紫-污绿（甾体皂苷） （1）泡沫试验：取检品的水溶液2ml于带塞试管中，用力振摇3分钟，即产生持久性蜂窝状泡沫（维持10分钟以上），且泡沫量不少于液体体积的13。 【注】常用的增溶剂吐温、司盘，振摇时均能产生持久性泡沫，要注意区别。 （2）溶血试验：取试管4支，分别加入滤液0.25、0.5、0.75 ml，然后依次分别加入生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5 ml，使每一个试管中的溶液都成为2.5ml, 再将各试管加入2的血细胞悬液2.5ml，振摇均匀后，同置于37水浴或2527的室温中注意观察溶血情况，一般观察3小时即可，或先滴红细胞于显微镜下，然后滴加检液看血细胞是否消失。如有溶血现象示正反应。 【注】鞣质对血红细胞有凝集作用，干扰溶血试验的观察，应事先除去（可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀）。 检液应为中性溶液。 （3）醋酐浓硫酸试验（Liebrmann Burchard反应）取检医.学敎育网搜集.整理品的水溶液置蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣加入少量冰醋酸使溶解，再加入醋酐浓硫酸（19：1）试液，呈现红紫色并变成污色绿色（甾类、三萜类成分或皂甙） （4）区别甾体皂甙和三萜皂甙：取带塞试管两支，各盛检品的水溶解1 ml，1支加0.1N盐酸溶液2ml，另一支加0.1N氢氧化钠溶液2ml用力振摇1分钟（需左右手交替振摇各半分钟），观察两管泡沫的多少，若两管泡沫体积相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加碱管泡沫多于加酸管示含甾示含甾体皂甙。 三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳定的泡沫；甾体皂甙为中性皂甙在碱笥溶液中能形成较稳定的泡沫。 浓硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、浓硫酸-香草醛等的显色原理主要是使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。 中药化学成分预实验大全（4）：糖和甘糖和苷 （1）斐林试剂：+硫酸铜、酒石酸钾钠 砖红色沉淀（还原糖） （）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元） 30min 上清液（+）（多糖、苷） （2）Molish反应：+-萘酚-浓硫酸 紫红色环 （3）银镜反应：+0.1N硝酸银、5N氨水 银褐色（还原糖） （4）薄层层析检查：吸附剂硅胶G或纤维素 展开剂 n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc 显色剂 苯胺-邻苯二甲酸 （1）碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液12ml（如为醇溶液须将醇蒸发除去），加入碱笥酒石酸铜试液1ml，于沸水浴上加热5分钟，产生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀，示有还原糖。 还原糖能使二价铜盐（蓝色）还原成氧化亚铜，醛糖的醛基氧化成羧基： 【注】如检液呈酸性，应先碱化。 此反应所产生的沉淀由于条件不同，其颜色也不同，质点上的呈黄色，质点大的呈红色。有保持性胶体存在时，也常产生黄色沉淀。 职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分，或中划药制剂中附加的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应。 （2）萘酚试验（Molisch紫环反应）：取检品的水溶液1ml，加5萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入56滴浓硫酸，使成两液层，待23分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类）。 多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存医.学敎育.网搜.集整理在下与萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。 【注】甙的分子结构中含有糖基，一般属于单糖类，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（双糖）或多分子糖（多糖）。在上述反应条件下，甙被水解成单糖，因此甙萘酚试验，系分子中糖部分的反应。 由于此反应较为灵敏，如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中，都能产生上述反应。故滤过时应加注意。 （3）多糖的确证试验：取检品的水溶液5ml于水蒸发至干，加入1ml蒸馏水，再加入乙醇5ml，如出现沉淀，滤过收集后用少量热乙醇洗涤，再将沉淀物溶于3ml蒸馏水中，做下例试验。 碘试验：取检品的不溶液1ml，加碘试液1滴，观察颜色变化，如呈蓝黑色为地衣糖；紫黑色为糊精；蓝色加热消失，冷后蓝色再现为淀粉。 多糖水解：取检品的水溶液1ml，加入稀盐酸5滴，置沸水浴中加热1015分钟，然后用10氢氧化钠液中和至中性，再加新配制的碱性酒石酸铜试淮4滴，另取检液1ml，不加酸水解直接加入上述试液4滴，两管同置水浴上煮沸56分钟。如果水解后生成棕红色常常物的量比未经水解的多，则示有多糖。 多糖水解后产生单糖，利用单糖的还原性，使铜离子还原成氧化亚铜。中药化学成分预试验大全（5）：酚类和鞣质酚类和鞣质 （1）FeCl3试剂：+1tCl3试液 蓝、暗绿或蓝紫色 （2）三氯化铁-铁氰化钾试剂：喷洒蓝色斑点 （3）香草醛-盐酸试剂：喷洒 红色（间苯二酚、间苯三酚） （4）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠 红色 （5）薄层层析检查：吸附剂硅胶G或纤维素 展开剂 n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc 显色剂1% FeCl3试液 1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液 蓝、绿或黑色 鞣质与酚类的区别：+明胶 沉淀 上清液 +1tCl3试液 蓝、暗绿或蓝紫色 （1）三氯化铁试验：取检品的水溶液1ml，加医.学敎育.网搜.集整理三氯化铁试液12滴，呈现绿色、污绿色、蓝黑色或暗紫色（可水解鞣质显蓝一蓝黑色，缩合鞣显绿色一污绿色）。 鞣质均是多羟基酚的衍生物，即多元酚，能和三价铁离子发生颜色反应生成复杂的络盐。 【注】此反应如遇有矿酸或有机酸、醋酸盐等存在，能阻碍颜色的生成。硝基酚类对三氯化铁试剂无明显反应。 （2）明胶试验：取检品的水溶液1ml，加氯化钠明溶液23滴，即生成白色沉淀物。 鞣质有凝固蛋白的性能。 （3）溴试验：取检品的水溶液1ml，加溴试液12滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或儿茶酚鞣质。 【注】过多的溴会阻碍鞣质的沉淀，因此溴水不宜多加。 （4）香草醛一酸试验：取检品的水溶液点于滤纸片上，干后，喷雾或滴加香草醛一盐酸试液，呈现红色斑点（多元酚类物质）。 （5）鞣质、酚类薄层层析检出反应： 吸附剂：聚酰胺；硅胶；硅胶；石膏：水（5：1：7）调成状，涂成薄板，105烘干45分钟。 展开剂：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）。 显色剂：10三氯化铁溶液；1三氯化铁乙醇溶液与1铁氰化钾水溶液（1：1）显蓝一紫色斑点。 中药化学成分预试验大全（6）：黄酮及其甙类黄酮及其甙类 （1）盐酸-镁粉反应：+HCl-Mg 红色 （2）三氯化铝反应：+AlCl3 黄色 （3）浓氨水反应：+NH3亮黄或橙色 （4）薄层层析检查：吸附剂聚酰胺或硅胶G （1）盐酸一镁（或锌）粉试验：取检品的乙醇溶液1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸45滴，置沸水浴中加热23分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素）。 黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元而医.学敎育.网搜.集整理呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色）。这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红色，应加以区别。 【注】此反应仅在化学结构中，第三位上带羟基的酮醇类显色较明显，而其它黄酮烷酮类均不甚明显。因此试验呈阴性反庆是不能做出否定的结论，尚需结合其他实验再做结论。 试验应在醇中进行，水分多会影响颜色的生成。此反庆较慢，有时需置水浴上加热，以促使反应的进行。 （2）荧光试验： 三氯化铝试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后再点1次，使其浓度庥中），干后，喷雾1三氯化铝乙醇试液，在紫外光灯下观察，呈现黄色、绿色、橙色等荧光为黄酮类；呈现天蓝色或黄绿色；荧光，则为二氢黄酮类。这是区别二氢黄酮类化合物的一种鉴别反应。 硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：取检品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及10枸橼酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光灯下观察，管内呈现强烈的绿色荧光（黄酮或其甙类）。 （3）碱液试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上（干后，再点一次，使其溶液集中），干后，喷1碳酸钠溶液或在氨蒸气中熏几分钟，呈现亮黄、绿或橙黄色。如将氨气熏过的滤纸露置空气中，颜色逐渐裉去而变为原有的颜色（黄酮或其甙类）。 聚酰胺柱分离总黄酮类的方法聚酰胺吸附属于氢键吸附，化合物中羟基越多，吸附越牢固，越难以洗脱。吸附强弱取决于与之形成氢键缔合的能力。 医.学教育网搜集整理聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物，洗脱时大体有以下规律：1、苷元相同，洗脱先后顺序一般是： 叁糖苷、双糖苷、单糖苷、苷元；2、母核上增加羟基，洗脱顺序一般是：具有邻位羟基黄酮、具有对位（或间位）羟基黄酮；3、不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮醇；4、查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。