自身免疫性疾病及其免疫检测.ppt

常见自身免疫性疾病的自身抗体检测 自身抗体 autoantibody 是指抗自身细胞内 细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白 是自身免疫和自身免疫病重要特征之一 某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体 谱 分类 脏器特异性自身抗体脏器非特异性自身抗体 自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤 一 自身抗体的特性 自身抗体免疫球蛋白补体淋巴细胞细胞因子 自身免疫性疾病的主要实验检测 1948年Haragraves等发现LE细胞现象 1957年Holborow等应用IIF检测ANA 1961年Beck等发现ANA不同荧光染色模型 60 70年代IIF ID CIE应用 新的自身抗体 1979年Towbin等应用免疫印迹技术检测自身抗体 80年代IB RIP应用 蛋白多肽水平认识自身抗原 1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究 近十年应用分子生物学技术 自身抗体研究发展简史 抗核抗体 ANA 抗可提取性核抗原抗体 ENA 抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCA 类风湿因子 RF 抗角蛋白抗体 AKA 抗环瓜氨酸肽抗体 抗CCP抗体 抗心磷脂抗体 ACLA 常检测的自身抗体 常见自身免疫性疾病的标志抗体 间接免疫荧光法 IIF ELISA免疫印迹法 Western blot 酶免疫斑点法 检测自身抗体常用的方法 抗核抗体 以真核细胞 如HEp 2细胞 肝细胞 的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称 二 抗核抗体的检测与应用 抗核抗体谱 以首先检出该抗体的患者名字命名 如抗Sm 抗Sa抗体等 以相关疾病命名 如抗Scl 70 抗SS A 抗SS B抗体等 以抗原的部位命名 如抗核仁抗体 抗线粒体抗体 抗核膜抗体 抗细胞浆抗体等 以抗原的化学名称分类命名 如抗DNA 抗RNP 抗组蛋白抗体 抗核小体抗体等 抗核抗体谱的分类和命名 间接免疫荧光法 indirectimmunofluorescence IIF 酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法 Western blot 抗核抗体检测方法 间接免疫荧光法示意图 细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型 dots IIF检测ANA荧光染色模型 斑点型 nRNP Sm 高滴度的抗U1 nRNP为MCTD的特征 抗Sm抗体对SLE具有高度特异性 斑点型 SSA SSB 抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮 100 抗SSB抗体几乎仅见于女性 可出现于SS和SLE 均质型 抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体 histone 抗ssDNA抗体抗核小体抗体 nucleosome 周边型 可见于胶原病 PBC CAH等患者 核点型 DOTS 见于SLE SS PBC 风湿病 抗着丝点型 PSS局限型标志抗体 抗原纤维蛋白型 仅见于5 10 的PSS 男性高于女性 抗RNA多聚酶 型抗体 仅见于硬皮病患者 阳性率为4 抗PM Scl PM 1 抗体 见于重叠综合征 多发性肌炎PM 皮肌炎DM 弥漫性PSS 抗Scl 70型 PSS弥漫型的标志抗体 增殖细胞核抗原 型 PCNA SLE特异性抗体 与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关 抗核糖体P蛋白 rib P 抗体 抗线粒体抗体 AMA SLE标志抗体 原发性胆汁性肝硬化标志抗体 抗Jo 1抗体 抗高尔基体抗体 多发性肌炎 PM 标志抗体 偶见于SLE和SS 抗肌动蛋白抗体 见于自身免疫性慢性活动型肝炎 抗双链DNA抗体 抗dsDNA抗体与细胞核DNA 外围区 脱氧核糖磷酸框架结合 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体 其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性 抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段 抗双链DNA抗体 检测方法及应用 间接免疫荧光检测 是目前国内外临床常规检测抗dsDNA抗体最常用的方法 抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95 100 但其敏感性仅为30 50 因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断 检测方法及应用 抗dsDNA抗体 SLE特异性抗体 与病情活动度相关 抗核小体抗体 核小体 nucleosome 是真核生物细胞核染色质的基本单位 凋亡细胞是核小体的重要来源 当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低 导致核小体在患者体内大量存积 激活B细胞产生抗核小体抗体 Antinucleosomeantibody AnuA 检测及应用 AnuA的检测通常采用ELISA检测法 AnuA具有同抗ds DNA抗体相同的诊断特异性 可达到95 在系统性硬化 SSc 病中可有20 50 低浓度阳性率 其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性 AnuA的表达与SLE病情活动分数相关 检测及应用 抗ENA抗体谱 可提取核抗原抗体的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括 抗Sm抗U1 RNP抗SSA抗SSB抗Jo 1抗Scl 70抗rib P蛋白 三 抗ENA抗体谱的检测与应用 抗可提取性核抗原 ENA 抗体 双向免疫扩散 ID 对流免疫电泳 CIE 免疫印迹法 Western blot ELISA酶免疫斑点法 ENA检测方法 免疫印迹法 SDS PAGE电泳 转移电泳 酶免疫检测 免疫印迹法 抗可提取性核抗原 ENA 抗体 抗Sm抗体 SLE标记性抗体 20 30 抗nRNP抗体 MCTD95 100 高滴度 抗SSA抗体 PSS60 75 其它CTD 抗SSB抗体 PSS10 40 其它CTD 抗Scl 70抗体 SSc25 75 标记性抗体 抗Jo 1抗体 PM DM25 标记性抗体 抗rRNP抗体 SLE特异性抗体 10 30 抗中性粒细胞胞浆抗体 anti neutrophilcytoplasmicautoantibodies ANCA 是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原 与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体 对系统性血管炎 炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义 四 与小血管炎相关的自身抗体检测与应用 荧光染色型 靶抗原 胞浆型 cANCA 蛋白酶3 PR3 杀菌 通透性增高蛋白 BPI 核周型 pANCA 髓过氧化物酶 MPO 组织蛋白酶G Cath G 乳铁蛋白 LF 白细胞弹性蛋白酶 HLE 非典型型 aANCA 兼有两种特性 ANCA荧光染色型与靶抗原 周边型抗中性粒细胞胞浆抗体 pANCA 主要见于炎症性肠病 溃疡性结肠炎和克罗恩病 胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体 cANCA 主要见于Wegener s肉芽肿及微小多动脉炎 ANCA临床应用 髓过氧化物酶 MPO 与显微镜下多血管炎 坏死性新月体型肾小球肾炎 过敏性肉芽肿性血管炎相关 杀菌 通透性增高蛋白 BPI 主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系 蛋白酶3 PR3 与Wegener s肉芽肿 WG 密切相关 仅cANCA诊断WG的特异性大于90 联合PR3可超过95 活动期几乎100 阳性 组织蛋白酶G Cath G 白细胞弹性蛋白酶 HLE 乳铁蛋白 LF 可见于SLE IBD PBC PSC等 RA早期诊断相关自身抗体 抗角质层蛋白抗体 AKA 1979年Young等报告靶抗原 filaggrin 40KD 抗核周因子 APF 1964年Nienhuis等报告靶抗原 profilaggrin 37 41KD 及其降解产物 抗聚角蛋白微丝蛋白抗体 AFA 1993年Simon等报告靶抗原 filaggrin 40KD 抗Sa抗体 1994年Despres等报告靶抗原 50 55KD非酰基多肽 半抗原 瓜氨酸 抗环瓜氨酸肽抗体 抗CCP抗体 1998Schellekens 五 与RA相关自身抗体的检测与应用 类风湿因子 rheumatoidfactor RF 为抗变性IgGFc的自身抗体 主要是IgM型致病机理 RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物 激活补体或被吞噬细胞吞噬 产生炎性介质导致组织炎性损伤 使患者发生骨关节炎及血管炎 1 胶乳颗粒凝集实验定性 半定量 敏感性和特异性不高 测定IgM RF2 速率散射比浊法 ARRAY IMAGE 定量 准确 快速 测定IgM RF3 ELISA定量 准确 可测定不同类型的RF 检测方法 1 RF在RA SLE PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出 临床应用 2 RF滴度与RA患者临床表现呈正相关 IgM RF效价 80IU ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良 3 IgG RF与RA患者的滑膜炎 血管炎和关节症状密切相关 常伴随IgM RF同时出现 在正常人及非RA患者中很难检出 4 IgA RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性 AKA主要见于RA 阳性率36 59 特异性95 99 其出现可以先于临床表现 高滴度可预示较严重的RA类型 抗角蛋白抗体 AKA 常用方法 ELISA临床意义 RA特异性自身抗体 敏感性65 85 特异性为94 98 高浓度抗CCP抗体是RA发生关节侵蚀的危险因子之一 定量检测有助于判断预后 抗环瓜氨酸肽抗体 抗CCP抗体 自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病 其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎 AIH 原发性胆汁性肝硬化 PBC 原发性硬化性胆管炎 PSC 重叠综合征 六 与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用 在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中 自身抗体在发病机制中起重要作用 自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱 自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义 自身免疫性肝病与自身抗体 自身免疫性肝病及其自身抗体谱 疾病类型相关自身抗体自身免疫性肝炎 AIH 型AIHANA ASMA 型AIHanti LKM 1anti LC 1 型AIHanti SLA 可溶性肝抗原 原发性胆汁性肝硬化 PBC AMA M2 M4 M8 M9 anti gp210 sp100ACA原发性硬化性胆管炎 PSC pANCA 自身免疫性肝病及其自身抗体谱 抗甲状腺球蛋白抗体 TGAb 抗甲状腺过氧化物酶抗体 TPOAb 抗促甲状腺素受体抗体 TSH RAb 七 与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用 重症肌无力 MG 自身抗体谱 抗骨胳肌抗体 ASA 抗乙酰胆碱受体 AchR 抗体多发性硬化 MS 自身抗体谱 抗髓鞘碱性蛋白 MBP 抗体 抗脑苷脂抗体 抗神经结苷脂抗体急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病 格林 巴利综合征 自身抗体谱 抗髓鞘糖脂抗体 抗髓鞘硫脂抗体 八 与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用 大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体 特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中 自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标 第五节自身抗体检测的临床应用 筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合选择相关的自身抗体检测项目切忌盲目的全面检测实验中应同步设置阳性和阴性对照 一 自身抗体检测的一般原则 95 99 可排除SLE SLE治疗缓解病情特重 大量IC沉积消耗抗体 低滴度常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断SLE的依据ENA抗体谱检测 不能排除抗dsDNA Sm rib抗体 可帮助诊断 ANA初筛 二 实验室方法的选择及结果的确认 ANA在自身免疫性疾病中的检出率 第六节自身免疫性疾病的相关实验检测 在自身免疫病患者体内 因有多种自身抗原的存在 自身抗体的种类也可有交叉重叠现象 故实验中检测出多种自身抗体阳性时还必须结合临床症状进行综合分析 自身抗体 免疫球蛋白 II型及III型自身免疫病消耗补体 补体 监测病情 一 免疫球蛋白及补体检测及临床意义 淋巴细胞数量及功能 反应患者体内免疫细胞状态 二 淋巴细胞检测及临床意义 细胞因子介导和调节免疫应答及炎症反应或应用治疗 监测病情或指导治疗 三 细胞因子检测及临床意义 CIC与多种自身免疫病相关 辅助诊断疾病 四 循环免役复合物检测及临床意义 1 区分自身免疫和自身免疫性疾病 2 自身免疫性疾病分为几类 其代表性疾病有哪些 3 ANA有哪些种类 它们在AID及SLE诊断中的价值如何 4 自身免疫病的发病机制是什么 5 自身免疫性疾病根据超敏反应类型可分为几类 代表性疾病有哪些 6 常见的免疫荧光法检测ANA的核型有哪些 有何临床意义 7 抗ENA抗体谱的可检测自身抗体项目包括哪些 有何临床意义 8 SLE和RA诊断的筛查试验和确诊试验分别是什么 9 小血管炎相关的自身抗体和自身免疫性肝病相关自身抗体检测项目分别有哪些 10 自身免疫性疾病的实验室诊断指标有哪些 思考题 自身免疫性疾病是自身免疫应答引起的疾病 其体内产生针对自身成份的自身抗体或自身反应性T淋巴细胞 自身抗体是自身免疫性疾病诊断的重要标志 IIF检测的ANA结果及其荧光模型在自身免疫性疾病的临床诊断与鉴别诊断中是重要的筛选试验 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体 抗Sm抗体是SLE的血清标志抗体 高滴度的抗RNP抗体是诊断MCTD的重要血清学依据 抗SSA Ro抗体和抗SSB La抗体与干燥综合症密切相关 抗Jo 1抗体常见于多发性肌炎 抗Scl 70抗体几乎仅见于进行性系统性硬皮病 其他疾病相关的自身抗体还有 与小血管炎相关的抗中性粒细胞胞浆抗体 抗磷脂抗体 与RA相关的RF 抗角蛋白抗体 抗环瓜氨酸肽抗体 与自身免疫性肝病相关的抗平滑肌抗体 抗线粒体抗体等 小结