溃疡性结肠炎模型选择及评价指标.doc

溃疡性结肠炎模型选择及评价指标1， 实验候选模型：葡聚糖硫酸钠（DSS）致动物溃疡性结肠炎模型。DSS UC模型的特点: 采用自由饮用或者定量灌胃DSS溶液的方法建立模型， 实验条件和操作方法简单， 损伤易复制， 便于掌握和推广；可通过改变DSS溶液的浓度和作用时间建立急性、慢性和急慢性交替性模型，模型持续时间长， 体现了急性向慢性转化的动态过程，解决了UC的慢性化和维持问题，这是以前许多模型无法比拟的；已证实DSS模型是由1型/2型辅助性T细胞( Th1/ Th2) 型细胞反应介导的，其发病与TNF-、IFN-和IL-10等有关，这与人类UC 的免疫学反应很相似；不同种系动物对DSS的敏感性不同，为揭示遗传因素与UC的关系提供了新的依据；DSS UC模型的组织学特点和临床表现与人类UC极为相似，如病变从肛门侧自下而上连续性发展，急性期可见黏膜充血水肿、散在溃疡和中性粒细胞浸润，慢性期可见腺体萎缩、结肠缩短和巨噬细胞浸润，临床表现主要为腹泻、体重减轻、血便等。2， 实验候选动物：C3H/HeJ Bir小鼠或者BALB/c小鼠动物种系: DSS UC模型适用于多种动物，包括各种大鼠、小鼠、仓鼠和豚鼠等， 但各种系对DSS的易感性和病变部位存在差异，其中大鼠、小鼠的病变主要以直肠和左半结肠为主，而仓鼠、豚鼠则以盲肠和右半结肠较为明显。Mahler等将3.5% DSS(分子量为Mr 3600046000) 溶于饮用水，予9只不同种系的小鼠饮用以诱导UC，结果临床和组织病理学表现各不相同，C3H/HeJ Bir小鼠对DSS最敏感，病变主要位于远端结肠和回盲部； C57BL/6J小鼠的中段和远端结肠易发生炎症；大部分NON/LtJ小鼠对DSS不敏感；BALB/c小鼠对DSS 敏感，病变主要位于结肠远端。溃疡性结肠炎是一种局限于结肠粘膜及粘膜下层的炎症过程。病变多位于乙状结肠和直肠，C3H/HeJ Bir小鼠和BALB/c小鼠对DSS致溃疡性结肠炎敏感，且病灶部位与人类相似（乙状结肠和直肠），因此可作为实验研究理想动物。3， DSS分子量及浓度：Mr=40000，浓度=3%-5%1%10%DSS浓度可用于UC 模型。DSS诱导肠黏膜急性损伤的程度呈浓度依赖性， 已在BALB/c小鼠中得到了证实。Granger等研究了DSS摄取量的计算公式，DSS用量(mg/g) =总饮水量(ml)DSS (mg)/100 ml/小鼠初始体重( g)，指出诱导可靠和重复性好的UC模型以组织髓过氧化物酶(MPO) 的活性和组织病理变化为标准)，DSS总摄取量的最低阈值为30mg/g体重，只要DSS的负荷量达到30mg/g这一关键剂量，其总摄入量的差异不会影响炎症反应的严重程度。 DSS 浓度是制摸成功的最关键因素，可影响造模时间和临床表现。据报道，小鼠饮用含1% DSS溶液90天后，仅出现大便隐血试验阳性。Egger等应用不同浓度的DSS( 0%、2.5%、5%、7.5%) 溶液喂养BALB/c小鼠7天，结果发现结肠腺体损伤评分随DSS浓度的提高呈线形增加，但与DSS总摄取量无相关性，由此推断DSS诱导黏膜损伤的程度依赖于DSS 浓度，而非总摄取量。但DSS浓度过高，动物死亡率也会升高。予无胸腺小鼠饮用含5% DSS溶液，与饮用1.5%、2.5% DSS 溶液( 各浓度的分子量相同)组比较，其致死率明显升高。目前，实验中中最常采用3%或5%的DSS溶液进行造模。4评价指标4.1 疾病活动度 用大便情况作为疾病活动度（DAI）评价，评价细则如下见表-1.表-1 DAI评分细则评分 大便性状 隐血或血便0 正常 阴性1 软便 阴性2 软便 隐血阳性3 腹泻 隐血阳性4 腹泻 血便4.2 结肠病灶病理组织显微镜检查并评分（CMDI），评分标准如下：溃疡：分三级，0无，1小溃疡（小于3mm），2大溃疡（大于3mm）炎症：0无，1轻度，2重度肉芽组织：0无，1有病变深度：0无，1粘膜下层，2肌层，3浆膜层纤维化：0无，1轻度，2重度4.3 对免疫器官的影响：1）免疫器官脏器系数脾脏，胸腺；2）4.4 免疫指标 1）抗人中性粒细胞胞质抗体（P-ANCA）：蛋白水解酶（PR3）、组织蛋白酶G（CG）。2）抗结肠抗体（ACA），3）免疫球蛋白IgA和IgG，局部免疫反应已证实结肠粘膜产生大量IgA和IgG，焦君良等以人体结肠粘膜为抗原，用之攻击大鼠后，大鼠结肠粘膜出现典型溃疡，病变部位大量淋巴、单核和嗜中性细胞浸润，全部造型动物血清抗大肠抗体阳性，免疫球蛋白IgA 和IgG明显增高，淋巴细胞转化率显著降低。以上结果均支持溃疡性结肠炎的自身免疫发病学说。4）细胞免疫指标：CD4、CD8、T淋巴细胞和可溶性白细胞介素2受体（SIL-2R）作为细胞免疫的主要指标被认为与溃疡性结肠炎的严重程度有关5）炎症细胞因子：TNF-、IL-1、IL-6、IL-8、IL-4、IL-104.5 其他生化指标：MPO，SOD，MDA