HDL和LDL胆固醇检测方法学进展和比较.ppt

HDL和LDL胆固醇检测方法学进展和比较班级 10检二姓名 陈艳慧学号 6302410068 HDL HDL highdensitylipoprotein 运载周围组织中的胆固醇 再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出 动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关 所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白 是冠心病的保护因子 俗称 血管清道夫 LDL LDL的功能是转运胆固醇到外围组织 并调节这些部血浆脂蛋白位的胆固醇从头合成 血浆中的胆固醇是疏水性物质必须与血液中HDL LDL和PL等一起组成脂蛋白 HDL C的检验方法 超速离心法电泳法化学沉淀法直接测定法 超速离心法 美国疾病控制与预防中心 CDC 测定HDL C的参考方法为超速离心法 也为NCEP所推荐 该法分三步进行 1 超速离心 40000r min 18 5小时 除去密度 d 1 006kg L富含甘油三酯的脂蛋白 CM VLDL 2 下层悬浮液用肝素 MnCl2法 Hep Mn2 法 离心沉淀 1500 g 30分钟 以除去富含apoB的脂蛋白 LDL Lp a 3 测定上清液中chol含量 方法用CDC参考方法 ALBK法 电泳法 原理在一定电场条件下 由于各种脂蛋白的分子大小及其在缓冲溶液中所带电荷数的不同 故在支持介质上迁移率亦不同 较小的HDL分子向阳极有较高的迁移率 可将HDL与VLDL LDL区分开 电泳法Helena公司已开发可供REP快速全自动电泳仪使用的HDL C检测试剂盒 其原理是 血清 1 l 经琼脂糖凝胶电泳 400V 15分钟 后 将chol基质试剂均匀铺在凝胶表面 孵育一段时间 10分钟 后用10 冰醋酸固定 然后将凝胶烤干 570nm波长下自动扫描即可确定HDL C百分含量 同时将血清TC值输入 则可求得血清HDL C值 化学沉淀法 常用的沉淀剂为多阴离子 如磷钨酸 PTA DS 肝素 Hep 或非离子多聚体如聚乙二醇 PEG 与某些两价阳离子 如Mg2 Ca2 Mn2 合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白都沉淀 HDL中chol多用酶法 CHOD PAP 测定 美国ReferenceDiagnostics公司推出新一代磁化DS沉淀法检测试剂盒 其原理是单一沉淀剂与血清标本1 5混合在一标本杯中 然后将标本杯放进磁盘 非HDL脂蛋白颗粒因被磁化 能很快被磁盘吸至杯底 沉淀 而与HDL颗粒分离 上清 此过程简单迅速 不需离心 无HDL共沉淀及含apoB颗粒沉淀不完全现象 结果准确 不受高TG干扰 比传统DS50 Mg2 法测定时间大大缩短 亦有一定应用价值 直接测定法 清除法 反应促进剂 过氧化物酶清除剂清除剂和过氧化物酶清除法 PEG修饰酶法选择性抑制法免疫分离法 PEG 抗体包裹法和抗体免疫分离法 PEG 抗体包裹法 akuyama等用PEG和抗apoB 抗apoC 抗体包裹非HDL的脂蛋白 然后用酶法直接测定HDL C的自动化分析方法 日本InternationalReagents公司已研制成功可供商品化自动检测的试剂盒 测定过程包括4种试剂 低浓度的PEG4000 包裹CM VLDL LDL 特异性抗apoB apoC 抗体 使CM VLDL和LDL复合物凝聚 酶试剂 用于检测上述复合物以外脂蛋白胆固醇 即HDL C 盐酸胍试剂 终止酶促反应和溶解含apoB脂蛋白复合物 以免其干扰吸光度测定 选择性抑制法 PPD法 应用两种不同的表面活性剂及多阴离子 根据脂蛋白的酶反应选择性 直接测定HDL C 第一反应中 加入多阴离子和分散型表面活性剂 亦称反应抑制剂 LDL VLDL和CM先在多阴离子下聚集 由于反应抑制剂与LDL VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力 故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈 同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂 但由于亲和力较弱 其结合是可逆的 第二反应中 与胆固醇酶试剂一起加入具有对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力的可溶性表面活性剂 亦称反应促进剂 由于反应促进剂对HDL可溶性的强特异性作用可置换其表面吸附的少量反应抑制剂 从而与酶试剂反应 达到无需沉淀分离直接测定HDL C的目的 超速离心 高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇 一种候选参考方法 检测方法学比较 超速离心 高效液相色谱a 用超速离心法分离脂蛋白 所分离的脂蛋白与应用最广泛的脂蛋白定义一致 b HDL不受Lp a 污染c 分离过程影响因素少d 所需样品量小 0 1ml 且一次可分析50个样品e 用稀释器代替手工容量操作 操作简便 精密度良好 可以测定脂蛋白类 LDL C的检测方法 免疫分离法比浊法选择性测定法 免疫分离法 该法是通过使用包被有高亲和力的羊抗人apoAI和apoE多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳 用一种特制的具有离心过滤装置的双层试管 当一定量的血清和已包被有抗体的聚苯乙烯胶乳悬液被加入到双层离心试管中 使apoAI和apoE抗体与血清中的cM vLDL lDL和hDL发生作用 然后1500g离心5min 免疫沉淀的cM vLDL iDL和hDL被过滤装置截留在内层小试管内 含有lDL的滤液被外层试管回收 通过酶法测定滤液中胆固醇的浓度 即可得出lDL C的含量 比浊法 其测定原理是血清中lDL抗原与试剂中羊抗人lDL抗体作用 形成抗原抗体复合物 并产生浊度 该浊度的高低在过量抗体存在时 与抗原 lDL 的含量成正比 同时 由于反应液中含有稳定剂可使非ag Ab复合物 如脂类 大分子蛋白多聚物等 消浊 而消除非特异性干扰 用已知lDL C值的参考血清的浊度计算出待测标本中lDL C的浓度 选择性测定法 日本第一化学药品株试会社 Daiichi 推出lDL C直接测定试剂盒 该试剂盒为液体双试剂盒 适用于各类自动生化分析仪 在无需标本预处理的情况下 实现lDL C自动化分析 该法原理 14 是试剂1中的表面活性剂可使样品中的hDL vLDL和cM颗粒解离 胆固醇分子被释放出来 立即同胆固醇酶试剂反应 产生的h 2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色 此时lDL颗粒仍是完整的 加入试剂2 含另一种表面活性剂和偶联剂 它可使lDL颗粒解离释放出胆固醇 在胆固醇酶试剂的作用下 产生h2O2 参与trinder反应而显色 色泽的深浅与lDL C的含量成正比 通过与相应的标准品 lDL C的校正物 比较 计算出样品中lDL C的含量 Thankyou