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微生物的培养与应用精选大题例：（2018全国卷I)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素一抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_（答出两点即可）。氮源进入细菌后，可参与合成的生物大分子有_（答出两点即可）。（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是_，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理。（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133。乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是：。【答案】（1）细菌选择（2）碳源、无机盐蛋白质、DNA、RNA （3）碘液淀粉遇碘显蓝色，产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈（4）乙同学的结果中，1个平板的计数与另2个相差悬殊，结果的重复性差【解析】（1）M培养基若用于真菌的筛选，说明M培养基能满足真菌的生长，而能抑制其它微生物的生长，链霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长。加入了链霉素的培养基能筛选出真菌，该培养基属于选择培养基。（2）微生物生长需要多种营养物质除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮元素是蛋白质和核酸等生物大分子的组成元素，因此氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸。（3）淀粉与碘液会变成蓝色，筛选产淀粉酶的微生物，依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈，来筛选产淀粉酶的微生物。（4）乙同学结果不合理，因为1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单的用其平均数作为最终结果。模拟精做1（2019届广东省深圳实验，珠海一中等六校高三第一次联考）硝基苯酚是工业污水中重要污染物，某同学欲从污水处理厂污泥中分离分解硝基苯酚的细菌。请回答下列有关问题：（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配置培养基时应选择_(硝基苯酚，硝基苯酚+牛肉膏，硝基苯酚十葡萄糖）作为碳源，不采用其他两组的原因是。（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。分析造成第二划线区域的第一条线无菌落的可能原因是_（答一点即可）。（3）进行梯度稀释时的一般操作是将1mL菌液移入盛有_mL的无菌水中；常用_法进行活菌计数，其原理是_，但统计的菌落数往往_（填“多于”或“少于”)稀释液中的活菌数，原因是_。（4）实验数据显示，当培养基中加入碳源葡萄糖时，该细菌降解速率明显提高，原因可能是。【答案】（1）硝基苯酚其他两组分别含有其他碳源和氮源，不能保证硝基苯酚是唯一碳源和氮源（2）接种环接种环灼烧后未冷却划线（未从第一区域末端开始）（3）9稀释涂布平板培养基表面的一个菌落来源于一个活菌少于有些活菌在培养过程中死亡（个别菌落可能是由2个或多个细菌形成）（4）能源充足，细菌代谢繁殖加快【解析】（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配置培养基时应选择硝基苯酚作为碳源，不采用其他两组的原因是其他两组分别含有其他碳源和氮源，不能保证硝基苯酚是唯一碳源和氮源。（2）利用划线分离法纯化菌株时使用的划线工具是接种环；划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有接种环灼烧后未冷却，或者划线未从第一区域末端开始。（3）进行梯度稀释时，需要将1mL菌液移入盛有9ml的无菌水中；稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于稀释液中的一个活菌；由于菌落可能是由两个或多个细胞形成或者操作时有些活菌在培养过程中死亡，所以统计的菌落数往往少于稀释液中的活菌数。（4）当培养基中加入碳源葡萄糖时，该细菌降解速率明显提高，因为此时能源充足，细菌代谢繁殖加快。2（2019届四川省南充市高三第一次诊断性考试）有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强,人误食后如不及时医治就会危及生命。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：（1）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在含有碳源、氮源及_等的选择培养基上添加适量的_进行选择培养。（2）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是_。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之_（填“前”或“后”）调节。（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是。（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用 _直接计数，也可选用_法统计活菌数目。（5）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物_（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养，理由是_。【答案】（1）水和无机盐有机磷农药（2）琼脂前（3）检测培养基平板灭菌是否合格（4）血细胞计数板稀释涂布平板（5）丙微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强【解析】 (1) 为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，就要人为提供有利于该微生物的生长条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此所用的选择培养基除了含有碳源、氮源及水和无机盐等微生物生长所需的基本营养成分外，还需添加适量的有机磷农药，以便进行选择培养。(2) 在制备固体培养基时，常需加入凝固剂琼脂。平板培养基配制的基本流程为：计算称量溶化调节pH灭菌倒平板，即调节pH应在灭菌之前调节。(3)为检测培养基平板灭菌是否合格，在接种前需随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，观察有无菌落形成。若无菌落形成，则说明培养基平板灭菌合格。(4) 测定并统计培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。(5) 依题意可知，甲、乙、丙培养液中的微生物从实验开始到停止生长所用的时间分别为32小时、45小时、16小时，说明微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强，因此应选择微生物丙作为菌种进行后续培养。3（2019届广东省华南师范大学附属中学、实验中学、广雅中学、深圳中学高三上学期期末联考）研究发现一些嗜冷细菌产生的蛋白酶可使乳蛋白分解，导致牛奶变质。为了筛选检测变质牛奶中的嗜冷细菌，某研学小组做了如图所示实验。(注:培养皿旁的数字代表菌落数目)，请回答下列问题：（1）牛奶饮用前要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，与煮沸消毒相比，巴氏消毒的牛奶在常温（约28）下保存时间较短，原因是_,导致牛奶中营养成分被分解而变质。（2）若要筛选嗜冷细菌，应将牛奶样品稀释液接种在以_为唯一氮源的固体培养基上，并且在_的环境条件下培养，以利于嗜冷细菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。（3）据图分析,研学小组采用的是_法分离和计数嗜冷细菌。（4）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？_（填“需要”或“不需要”），其原因是_。（5）按照菌落计数的要求，据图可得出1ml牛奶样品中嗜冷细菌的活菌数为_个，与用血球计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_。【答案】（1）（巴氏消毒的）牛奶中没有被杀死的微生物（或细菌）在适宜温度（或常温）下大量繁殖（2）乳蛋白低温（或较低温度）（3）稀释涂布平板（4）需要需要证明（或判断）培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）（5）3.9105少【解析】（1）由于巴氏消毒的温度为7580C之间，有些微生物在此温度下没有被杀死，故在适宜温度（或常温）下，（巴氏消毒的）牛奶中没有被杀死的微生物（或细菌）会大量繁殖，导致牛奶中营养成分被分解而变质。所以巴氏消毒的牛奶在常温（约28）下保存时间较短。（2）由于嗜冷细菌产生的蛋白酶可使乳蛋白分解，故要筛选嗜冷细菌，应将牛奶样品稀释液接种在以乳蛋白为唯一氮源的固体培养基上，并且在低温的环境条件下培养，以利于嗜冷细菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。（3）根据图示中将牛奶样品稀释后涂在培养基上进行菌落计数，可知研学小组采用的是稀释涂布平板法分离和计数嗜冷细菌。（4）由于不知道制备的培养基是否被污染，故需要设置不接种微生物的培养基进行对照，以证明（或判断）培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）。（5）菌体计数时应选择菌落数在30300之间的稀释倍数进行计数，由图中菌落数量可知，应选择稀释103的进行计数，故1ml牛奶样品中嗜冷细菌的活菌数为（36+39+42）30.1103=3.9105个。该种方法计数时，计数的是活菌的数量，且当两个或多个菌体连在一起生长时，平板上观察的只是一个菌落，故与用血球计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较小。4（2019届河北省唐山市高三上学期期末考试）淀粉酶可以通过微生物发酵生产。某科研小组想利用诱变育种的方法获得淀粉酶高产菌株，从而提高酶的产量。实验步骤：第一步：将菌株分为两组，甲组用一定剂量的诱变剂处理，乙组不处理做对照。第二步：配置_(固体、液体)培养基，该培养基的碳源应为_。第三步：将甲、乙两组的菌株采用_方法进行接种，以便使菌落分布较均匀，然后放在相同且适宜条件下培养。第四步：菌落形成后加入_染色，比较两组菌株菌落周围透明圈的大小。预期实验结果：a.若甲组中绝大多数菌落周围的透明圈大小与乙组相同，则说明诱变具有_。b.若_，则说明诱变具有不定向性。从甲组培养基中筛选菌落周围透明圈最_的菌株进行鉴定。【答案】固体淀粉稀释涂布平板法碘液低频性甲组中极少数菌落周围的透明圈与乙组相比变大或变小大【解析】第二步：筛选用固体培养基，该实验是为了筛选产淀粉酶的高产菌株，因此该培养基的碳源应为淀粉。第三步：将甲、乙两组的菌株采用稀释涂布平板法方法进行接种，以便使菌落分布较均匀，然后放在相同且适宜条件下培养。第四步：菌落形成后加入碘液染色，该培养基的碳源为淀粉，菌株能够水解淀粉，在菌落周围会形成透明圈，再比较两组菌株菌落周围透明圈的大小。预期实验结果：a、若甲组中绝大多数菌落周围的透明圈大小与乙组相同，则说明诱变没有效果，诱变具有低频性。b、若甲组中极少数菌落周围的透明圈与乙组相比变大或变小，则说明诱变具有不定向性。从甲组培养基中菌落周围透明圈最大的菌株可能淀粉酶的产量最高，筛选该菌株进行鉴定。
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