《动物细胞培养》PPT课件.ppt

皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，1014天后就要被身体排斥。,如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？,动物细胞工程,离体植物器官、组织或细胞,植物细胞工程常用的技术:,植物组织培养、植物细胞培养、植物体细胞杂交,温故而知新,细胞次生代谢产物,植物体细胞杂交,植物细胞A,植物细胞B,去细胞壁,原生质体融合,杂种细胞,植物细胞融合,这个过程中涉及的原理是？,细胞膜的流动性植物细胞的全能性,动物细胞工程,常用技术动物细胞培养动物组织培养细胞核移植体细胞克隆动物细胞融合单克隆抗体,动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。,一、动物细胞与组织培养1、概念：,是指在体外模拟动物体内环境，将动物的细胞或组织在无菌、温度适宜和营养充足的条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有的结构和功能的技术。目的是获得细胞或细胞代谢产物。,2、选料：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，因为这些细胞生命力旺盛，分裂能力强。,动物细胞培养过程：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,无限传代,单个细胞,加培养液,剪碎,胰蛋白酶,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,4、有关概念,原代培养：是指从供体获取组织或细胞后的初次培养。传代培养：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中，继续培养，称为传代培养。,细胞株：原代培养的细胞一般传至10代左右，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。,细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。,贴壁生长：动物细胞在液体培养基中生长一段时间之后，大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。接触抑制:细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时，就停止分裂增殖，这种现象叫做接触抑制。,动物细胞培养过程：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,10代细胞,原代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,遗传物质未改变,遗传物质改变,剪碎,胰蛋白酶,5、动物细胞培养条件：,1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH温度37左右PH7.2-7.44、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）,保证细胞顺利的生长增殖,问题：,1.为何要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来？2.比较动物细胞培养和植物组织培养所用的培养基的成分.3.动物细胞培养是否能像植物细胞一样最终培养成新个体？,获得细胞,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,2、植物组织培养和动物细胞培养的比较,6、动物细胞培养技术的应用,1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,2、器官移植的培养,3、获得细胞用于检测有毒物质,1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）A细胞系B细胞株C原代细胞D传代细胞,2、动物细胞工程技术的基础是-（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养,A,D,3、为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理（）A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.盐酸D.胰脂肪酶,教学反馈,B,4、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异B具有更强的全能性C.取材十分方便D分裂增殖的能力强,D,5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（）A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D培养至50代后继续传代的细胞是细胞株6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（）A原代培养B传代培养C细胞株D细胞系,B,D,7、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（）A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生了改变D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞,C,8、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答,(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是_，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是_.(3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有_等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为_.(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_处理，然后配置成_，再分装。(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是_。,幼龄动物的器官或组织、动物胚胎,剪碎,胰蛋白,使每个细胞能与培养液接触,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清,10,原代培养,胰蛋白酶,细胞悬浮液,细胞没有发生癌变,二动物细胞核移植和动物体细胞克隆,1概念,将某种动物细胞的细胞核移入同种或者异种动物的去除细胞核的成熟卵细胞内的技术。,动物体细胞克隆,是将供体细胞的细胞核与受体去核卵细胞的细胞质进行人工组合，借助卵细胞的发育能力，经过培养发育成胚胎进而形成个体的技术。其中的关键技术是细胞核移植技术。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物,动物细胞核移植,多利羊的产生过程：,另一头绵羊的子宫,2过程,供体动物的组织,细胞培育,供体细胞核,卵细胞,去核,去核卵细胞,注入,重组细胞,分裂,重组胚胎,胚胎移植,代孕母牛,新个体,用卵细胞的原因？,细胞已经发育成熟;细胞核较易取出；有重组和发育所需的因子便于发育成胚胎,受体卵母细胞为什么要先去核？,为了使克隆动物的遗传物质(核内)全部来自供体动物的细胞；保证获得其遗传特性。,克隆是100%的复制吗？,不是，克隆动物的核内DNA跟供体动物的体细胞一样，但其细胞质的DNA则来源于受体卵母细胞。此外，动物的行为，习性受还环境的影响，可能与供体动物不同。,二动物细胞核移植和克隆动物,1、应用前景,保护濒危物种增加动物的存活数量,用于组织器官的移植，皮肤移植,2存在的问题,成功率不高,克隆动物存在健康、生理缺陷、遗传缺陷等,三动物细胞融合,1概念,指在一定条件下2个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程,融合后形成的具有原来两个或多个细胞的遗传信息的细胞为杂交细胞。,2过程,不同的两个细胞,灭活病毒,或PEG,杂交细胞,3意义,克服远缘杂交的不亲和性,诱导动物细胞融合的方法,动物细胞融合的用途：,制备单克隆抗体,：仙台病毒,紫外线,丧失感染活性（不感染细胞）,保留融合活性（诱导细胞融合）,物理法化学法（PEG）生物法,四单克隆抗体,抗体：,由效应B淋巴细胞产生的，主要成分是球蛋白，一种效应B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,单克隆抗体概念的理解：,单克隆抗体：由这些细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体,单克隆:由单个效应B细胞通过无性繁殖获得细胞群,原始的方法：,获得抗体，特异性差，纯度低。,想获得单一抗体：,必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。,问题：,怎样才能获得单克隆抗体？,我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个淋巴细胞增殖呢？,设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,杂种细胞,目的:制备单克隆抗体.原理：,B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。,单克隆抗体制备过程,诱导细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,诱导其融合的方法有哪些？,？,？,抗原,效应B细胞,筛选,筛选,杂交瘤细胞,（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？融合形成杂交瘤细胞的特点？,思考：,（2）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,（3）制备过程为何要经过两次筛选？,细胞膜的流动性；杂交瘤细胞既能大量繁殖，又可以产生单一抗体,动物细胞融合、动物细胞培养技术,第一次筛选出杂交瘤细胞；第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞,（4）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,单克隆抗体的应用,与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。,1、作为诊断试剂,2、用于治疗疾病和运载药物作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤,植物、动物细胞融合的比较,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,制备单克隆抗体,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是-（）A细胞系B细胞株C原代细胞D传代细胞,2、动物细胞工程技术的基础是-（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养,A,D,3、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞4、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞,B,D,5、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异B具有更强的全能性C.取材十分方便D分裂增殖的能力强,D,7、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的淋巴细胞,A,再见,