实验二气孔状态观察.ppt

1.实验材料准备不足，影响了实验完成。2.怀疑铝盒在烘干前有水分，为何不称一下烘干后的铝盒重量呢？可以换算出来正确的鲜重和干重。3.试管的刻度不准确，应该用移液管来统一量取。4.结合含水量和水势进行比较分析。,实验一环境因素对植物水分状态的影响,存在问题：,实验二气孔运动的调节,（）气孔密度的观察（）钾离子对气孔开度的影响,肾形（双子叶植物）,哑铃形（单子叶植物）,气孔密度：单位叶片面积上的气孔数（显微镜视野面积内观测到的气孔数）,气孔开度：保卫细胞内壁间跨距,不同植物气孔的数目和大小,掌握测定气孔密度和开度的方法；学会分析影响因素对气孔运动的调节；学会利用显微镜物镜测微尺（物尺）标定目镜测微尺（目尺）的方法。,1.实验目的,2.1印迹法,以有机物质的溶胶（火棉胶、牛皮胶、醋酸纤维素胶、指甲油等）涂在植物的表面,胶体风干后凝成薄膜，这层膜上印有表皮组织各细胞的界迹边痕，从而显示出气孔的开闭情况。将印膜撕下，供观察和测量。,除用来观察气孔状况外，还可用于观测植物表皮上的细胞、茸毛、蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。优点:非破坏性取样；方便快捷。缺陷:界迹边痕不明显的样品印迹模糊；凹陷气孔难以取到印迹；清晰薄膜制作有难度。,2.实验原理,2.2固定法,优点:镜下观察较印迹法的醒目；植物材料可长期保存；凹陷气孔仍可观察。缺陷:破坏性取样；不适用于下表皮难于剥离的样品观察。,无水乙醇能使植物细胞迅速脱水、死亡，因而细胞壁硬化、细胞形状固定，气孔也得以保持原形，有利于以后镜检研究。,2.3K+对气孔开度的影响,气孔运动的机制（4种假说）:淀粉与糖转化学说K+积累学说苹果酸代谢学说玉米黄素假说,在光下，保卫细胞中的叶绿体通过光合磷酸化生成ATP，ATP驱动质膜上的K+-H+泵，使保卫细胞能逆浓度梯度从周围表皮细胞吸收K+，或从外界溶液中吸收K+，从而降低其渗透势，促进保卫细胞吸水，气孔开放。K+在保卫细胞的积累，可以促进气孔开放。Na+可以代替K+，使气孔开放，但效果如何？,K+积累学说,蚕豆叶片，竹叶菜（Commelinabenghalensis）载玻片、盖玻片、显微镜、测微尺、培养皿印迹法：火棉胶、棉花球、镊子、刀片；固定法：无水酒精、镊子0.5%KNO3、NaNO3溶液光源（生长箱或自然光）,3.材料、仪器设备与试剂,目镜测微尺(目尺)：是一块可放在目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。用以测量经显微镜放大后的物像大小。刻度大小随放大倍数变化而改变。物镜测微尺(物尺)：是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10m。实际长度不受放大倍数影响。专用于校正目镜测微尺(目尺)每格的相对长度。,目镜测微尺物镜测微尺,4.实验步骤,1）计算显微镜视野直径和面积（40，物尺）物尺放在视野直径线计算直径，视野面积S=(d/2)2。2）用物尺标定目尺（40）,由于不同显微镜镜筒长度不同，或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目尺测量物体大小时，必须先用物尺校正，以计算出在一定放大倍数目镜和物镜下目尺所代表的实际长度，然后才能用来测量物体大小。,低倍镜下找到物尺，并移至视野中部，高倍镜下标定目尺。,目尺每格1020/29（m）,目尺,物尺,每格10m,目尺29格对物尺20格,视野10格目尺r=?计算气孔密度17格目尺对应6格物尺目尺每格610/17（um）测气孔大小,目尺17格,物尺6格,计算气孔开度？m,将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2min，用镊子揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检；低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。,3）印记法观察气孔密度,4）固定法观察气孔密度,用镊子撕剥叶片下表皮（用刀片切一小口以利于撕取或直接将镊尖插入下表皮后侧拉），迅速（愈快愈好）放入无水乙醇中固定23min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。,5）K+、Na+对气孔开度的影响,3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和蒸馏水各15ml；每个培养皿放23张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25下，光照处理60min；依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。,实验步骤,1）计算显微镜视野直径和面积（40，物尺）2）用物尺标定目尺（40）3）印记法观察气孔密度：将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2min，用镊子揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。4）固定法观察气孔密度：用镊子撕剥叶片下表皮，迅速放入无水乙醇中固定23min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。5）K+、Na+对气孔开度的影响：3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和水各15ml；每个培养皿分别放23张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25下，光照处理60min；依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。,1）比较印迹法和固定法测定的气孔密度，如果两者结果有差异，试加以分析。,5.结果与分析,表1不同方法观察的气孔密度,表2不同溶液处理后的气孔开度,2）以H2O为对照，分析比较K+、Na+对气孔开度的影响。,6.注意事项,首先确定显微镜好用；胶棉液涂均匀、超薄一层；叶表皮取下后要迅速投入乙醇（2秒）；物镜测微尺安全使用，切勿压破，载物台由近及远，缓慢调节；先低倍镜下找到视野后，高倍镜下观察气孔数目、大小或标定目尺；物尺放在视野直径线计算直径；物尺和目尺0刻度对齐再标定，之后即可还物尺；固定法、印迹法各观察3个视野；胶膜朝上观察。,1）印迹法和固定法两种方法观察到的气孔密度，哪个大？为什么？2）哪种溶液中气孔开度最大？为什么？,7.思考题,