实验七：植物染色体压片技术.ppt

实验七,植物有丝分裂染色体压片技术,一、实验目的了解植物细胞周期中染色体的动态变化学习植物染色体压片方法的基本技术。,二、实验原理有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。洋葱和大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。,（一）实验材料大蒜（Aillumsativum）根尖洋葱（Aillumcepa）根尖蚕豆（Viciafaba）根尖。（二）实验器具显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸、铅笔、吸管等等。（三）药品试剂卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液、0.002M8-羟基喹啉水溶液、0.050.2%秋水仙素溶液、对二氯苯饱和水溶液、1NHCl、95%乙醇、正丁醇、加拿大树胶。,三、实验材料、器具与试剂,四、实验方法（一）材料准备选取大蒜或洋葱放在培养盘或烧杯中，使幼根长出后，在2025继续培养。当根尖长13cm时，即可以进行预处理。（二）预处理为利于有丝分裂中染色体的观察和计数，固定之前进行预处理，这样可改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。一般在分裂高峰前处理1.5小时以上，方法如下：1秋水仙素水溶液常用浓度为0.050.2%，室温下处理24小时。对抑制纺锤体活动的效果明显，易于获得较多的中期分裂相，并且染色体收缩较直，有利于对染色体结构的研究。2对二氯苯饱和水溶液室温下处理35小时，对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好，对染色体小而多的植物中，计数染色体制片效果最好。3低温处理将材料如小麦，浸入蒸馏水内，放置到14冰箱中（玉米及水稻68）处理2024小时，也起到良好的效果。时间一般为上午79时，固定保存方法同上。,不同材料采用不同预处理方法获得的效果,*+优+良。,（三）固定通常采用的是卡诺氏固定液。目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中室温处理424小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内04保存备用。（四）解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1NHCl溶液，在60下水解820min（大蒜用8min，洋葱用8min，蚕豆侧根用10min，玉米用20min），解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗23次，以利于着色。（五）染色、压片制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色10分钟左右，加盖玻片。用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。（六）观察将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染色体的动态变化。,解离后倒出HCl，水洗2次，每次35min。将材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。,中期,前期,后期,