国家标准《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》

GB/T中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量 的快速检测 Rapid method for organophosphate and carbamate pesticide residues in vegetables 2004-01-01 实 施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会 发布 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准 方法二 酶抑制率法1 范围 本标准规定了由酶抑制率法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速测定方法。 本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速测定。2 原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关系。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物乙酰胆碱水解，其水解产物显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。3 试剂3.1pH8.0 缓冲溶液： 用 分别取 11.9 克无水磷酸氢二钾与 3.2 克磷酸二氢钾， 1000毫升蒸馏水溶解。3.2 显色剂：分别取 160mg 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和 15.6mg 碳酸氢纳，用 20ml 缓冲溶液溶解，4C 冰箱中保存。3.3 底物 ：取 25.0mg 硫代乙酰胆碱，加 3.0ml 蒸馏水溶解，摇匀后置 4冰箱中保存备用，保存期不超过两周。3.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，按 5.2 测定项操作，A0 值应控制在 0.3 以上。4 仪器4.1 分光光度计或相应快速测定仪4.2 常量天平4.3 恒温水浴或恒温箱5 分析步骤5.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成 1cm 左右见方碎片，取样品 1g，放入烧杯或提取瓶中，加入 5ml 缓冲溶液，振荡 12min，倒出提取液，静置 35min待用。5.2 测定： 对照溶液测试：先于试管中加入 2.5ml 缓冲溶液，再加入 0.lml 酶液，0.1ml o （每批样品的控制时间应一致） 加入 0.lml 摇匀后于 37 C 放置 15min 以上显色剂， 。底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 分钟的吸光度变化值A0。 样品测试：先于试管中加入 2.5ml 样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应 3 分钟的吸光度变化值At。6 结果的表述计算6.1 结果计算 检测结果按公式（1）计算： 抑制率（） A0 -At/A0 100 .1 式中：A0 -对照溶液反应 3min 吸光值的变化值； At -样品溶液反应 3min 吸光值的变化值；6.2 结果判定 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50时，表示蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。抑制率50的样品需要重复检验 2 次以上。 对抑制率50的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。7 附则7.1 酶抑制法技术指标7.1.1 灵敏度指标 酶抑制率法的最低检测限应达到以下指标：甲胺磷 0.8mg/L，敌百虫0.25mg/L 呋喃丹 0.002mg/L。7.1.2 符合率 在检出的抑制率50的 10 份以上样品中，经气相色谱法验证，符合率应在 80以上。8 说明 韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒、胡罗卜等蔬菜中，含有破坏酶活性的物质，处理这类样品时，不要剪的太碎，浸提时间过长，必要时可采取整株蔬菜浸提。 农药浓度与抑制率对照表（实验条件：37） 浓度g/ml 0.4 0.8 1.6 甲胺磷 抑制率 35.0 52.0 69.0 浓度g/ml 0.4 0.6 0.8 1.2 1.6 3.75 氧乐果 抑制率 26.4 29.4 36.7 52.7 59.6 76.3 浓度g/ml 0.1 0.15 0.2 0.25 0.4 0.5 敌百虫 抑制率 13.6 22.9 37.2 50.6 63.9 73.9 浓度g/ml 0.001 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 呋喃丹 抑制率 25.2 50.3 58.8 66.8 73.2 78.9 国内外农药残留量最高限量标准 有机磷与氨基甲酸脂类农药 甲胺磷 氧乐果 甲萘威 敌百虫 WHO/FAO 的规定每日每公斤体重 4 03 10 10 允许摄入量ADIug/Kgbw EPA 规定每日每公斤参照摄入量 005 5 RfD mgKg 毒性（雄性大鼠经口 LD50）mg 2030 50 814 560 Kg 国 外 每 人 每 天 实 际 摄 入 量 ug 0936 03375 0006 /60Kg 国 内 每 人 每 天 实 际 摄 入 量 ug 239 29 /60Kg FAO 规定蔬菜农药残留量允许限 051 05 01 量（MRL）mgKg 国内规定蔬菜农药残留量允许限 量（MRL）mgKg