[基础科学]实验方法

45页+参考+附录1 必须写的：1摘要 2关键词（生菜及其包藏，温度影响） 3材料与方法 4结果与分析 5讨论6 结论7文献8 英文不同温度对生菜贮藏保鲜的影响摘要：生菜 ( lettuce) , 又称叶用莴苣, 为菊科莴苣属一、二年生草本植物。a生菜广泛用于鲜食， 是各类中西快餐中最主要配菜之一。近年来， 随着人们生活水平的提高，生菜的消费呈现迅猛上升之势。生菜的贮藏温度影响着生菜的保鲜效果，本试验研究在不同的贮藏温度下生菜品质变化，为生菜贮藏保鲜温度的确定提供依据。b关键词：生菜；贮藏温度；保鲜；1. 材料与方法1.1 材料处理生菜，选取整齐、质地脆嫩、颜色翠绿或深绿，且无腐烂、无虫食的作为实验试材。适当剥去外部一些受损苞叶，使其大小整齐一致，将生菜用0.02%次氯酸钠浸泡3min,晾干水分后，五棵作为一个实验组，用塑料袋包装，分别在-4，0，4以及室温下贮藏。每隔2d测定一次贮藏生菜的生理指标，贮藏期间相对湿度为70%。1.2实验使用的化学试剂碳酸钙粉（石英砂），80%的丙酮；1mg.ml-1葡萄糖标准液，3，5-二硝基水杨酸试剂；去离子水；0.6%的硫代巴比妥蒜（TBA），10%的三氯乙酸（TCA）;0.2mol/LPH=7.0的磷酸缓冲液,0.1mol/L H202溶液; 0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液, 提取介质（0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮）,130mmol/LMet溶液, 750umo1/L NBT溶液, 100umol/L EDTA溶液，20umo1/L核黄素，蒸馏水；质量分数2% H202溶液，pH5.5磷酸缓冲液，0.05mol/L愈创木酚，20%的三氯乙酸（TCA）；pH5.5磷酸缓冲液，20%的三氯乙酸（TCA ）, PVP，0.1mol/L儿茶酚；1.3实验的仪器设备 天平，分光光度计，水浴锅，离心机，研钵，打孔器，烧杯，容量瓶，移液管，试管，漏斗，滤纸，光照箱，培养箱，冰箱，电导仪，1.4实验方法1.4.1失重率采用差量法计算。失重率（%）=(入贮前重量一贮藏后重量)/入贮前重量100%1.4.2叶绿素含量叶绿素含量的测定采用分光光度比色法1。取0.5g生菜叶片研磨，加少量的碳酸钙粉及80%丙酮进行研磨，匀浆过滤后用80%的丙酮定容至15ml，以80%的丙酮作对照，在分光光度计上测定665nm,649nm, 470nm处的光密度值。以Amon法公式计算叶绿素的含量。叶绿素总量（mg/g）= 1.4.3还原糖含量采用3,5一二硝基水杨酸(DNS)比色法。称取生菜叶片样品1g，加8mL蒸馏水匀浆，10000rpm离心20min，吸取上清液2.0mL，加1.5mL的DNS试剂，沸水中煮5min,冷却后蒸馏水用定容到25.0mL,测A540。以葡萄糖作标准曲线并计算还原糖含量。1.4.4电导率测定用打孔器取10片68mm的生菜叶片，用自来水冲洗数次，再用去离子水冲洗，然后用50ml的去离子水加盖浸泡1h, 测电导率S1，（以蒸馏水为空白对照组。煮沸12min，静置1h，再测电导率S2。相对电导率L=S1/S2.）。14.5丙二醛(MDA)含量 采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法。取生菜叶片样品1g加入2mL 10% TCA和少量石英砂,研磨，再加8ml TCA进一步研磨，匀浆液4000r/min离心10min。取2mL上清液，加2ml质量分数为0.6%TBA溶液，沸水中煮15min，冷却后离心，取上清液测定450，532和600nm波长下的吸光度值，以TCA溶液取代酶液作为空白。根据公式 MDA质量摩尔浓度(umol . L-1)= c . N. W -1计算出MDA浓度及生菜样品中的含量1.4.6超氧化物歧化酶(SOD)活性取生菜样品0.5g，加入6mL 提取介质（0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮），冰浴研磨，加入提取介质使得终体积为10ml。4下10500r/min离心20min，上清液为SOD粗酶液。酶活力测定：反应体系中顺次加入0.05mol/L pH7.8磷酸缓冲溶液3mL,130mmol/LMet溶液0.6mL,750umo1/L NBT溶液0.6mL, 100umol/L EDTA溶液0.6 mL,粗酶液0.2mL, 20umo1/L核黄素0.6mL，蒸馏水0.4ml振荡摇匀，以缓冲液作空白对照，不加酶液(以PBS代替)的反应管作为最大光化还原管，在40001ux下照光20min后立即避光迅速测定A560的值。SOD活性=（A0-AS）.VT.(0.5AO.WF.V1)-1 SOD比活力=SOD总活性.C-11.4.7过氧化物酶POD活力测定愈创木酚比色法测定过氧化物酶活性，取生菜叶片样品0.5g，加入pH5.5磷酸缓冲液6mL，冰浴研磨匀浆，匀浆液转移至离心管中，4000r/min离心10min，上清液转入25ml容量瓶，沉淀物用5ml pH5.5磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度。酶活性测定反应体系：2.9mL 磷酸缓冲液(pH5.5), 1.0mL 0.05mol/L愈创木酚,0.1mL粗酶液，最后加入0.1mL质量分数2% H202溶液，迅速颠倒混匀,于37水浴中15min,转入冰浴中，并加2.0ml20%三氯乙酸终止反应，过滤，稀释，以煮沸5min酶液代替粗酶液作为对照，测D470。以每分钟内D470 变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（U）过氧化物酶活性=1.4.8多酚氧化酶PPO活力测定比色法测定多酚氧化酶活性，1.4.9过氧化氢酶CAT活性测定紫外吸收法测定过氧化氢酶活性，称取0.5克生菜叶片加入23ml 4预冷的PH=7.0的磷酸缓冲液和少量石英砂研磨，转入25ml容量瓶中，用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，定容至刻度。于5下静置10min,取上部澄清部分4000r/min离心15min,上清液为提取粗酶液 ?，