范例二全血DNA提取步骤的改进

赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖评选活动报名表姓名：李四职位：硕士研究生单位：系所 / 科室：联系电话：E-mail ：通讯地址：邮编： 参选项目：全血 / 血浆 DNA提取步骤的改进血浆和血清是检测释放入血的游离核酸最主要的标本来源，用来检测病毒、细菌，以及肿瘤细胞等等释放出来的游离核酸和蛋白质产物，在临床上被广泛应用于病原微生物和肿瘤标志基因的检测中，如，PCR 和定量背景：real-timePCR以及 RT-PCR ；用于基于血液样品的癌症生物标记的研究和验证、 检测；病毒和细菌核酸检测等。目前在市面上有多种抽提试剂盒。对试剂盒方法和传统苯酚氯仿抽提法进行对比有如下改进。改进一：试剂盒提取法，在标准的做法中，蛋白酶K直接被加入溶液体系，消化血液或血清中的蛋白和DNA酶是十分重要的步骤，这一步的好坏直接决定所提取核酸方法改进：的应用。大部分的试剂盒在这一步骤选用蛋白酶K 来消化蛋白和 DNA酶。经过试验对比发现，将蛋白酶 K 加入体系后，在 37水浴中孵育 1h 会大大提高 DNA的提取质量。改进二：用传统的 Triton/Pheno 提取法，对比发现，用传统的方法提取有利于确保提取的 DNA保持天然状态，获得更多小片段的 DNA。在这一方法中， 将 Triton X-100 加入血浆或血清中后， 98水浴 5min，再冰浴 5min，最后用苯酚 - 氯仿 - 异丙醇（24:25:1,V:V:V ）分离抽提 DNA。这一改进方法中， 小小的改进在于 98水浴 5min，这一步不仅可提高 DNA提取率，还有利于下游的实验，因为高温将降低 PCR抑制剂的活性。结果：（附图片）（左边为传统方法提取，右边为试剂盒提取）能过去之不能改进的方 面 实验结果更好 （可多选）： 节省实验经费 节约时间是 是否原创：否 （若了解，请注明原创者） ：谢菲尔德大学临床医学院