试验一MS培养基配制和灭菌

实验一 MS培养基配制和灭菌一.目的和要求：1 .学会MS培养基的制作方法；2 .掌握高压灭菌的方法和基本操作。二、仪器与试剂1 .仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状银子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等2 .试齐1J: MS白Macro-e、Micro-e、有机母液、F祈、肌醇蔗糖，琼脂粉，1N NaoH和 1N HCl三、方法步骤（一）配方设计：以MS为基本培养基（mg/L）No.6-BANAAIBACK0012345（二）配制培养基（1）溶化琼脂：量取300ml左右蒸储水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全 融化。（2）各种母液的吸取：Macro-e 50mlMicro-e 1ml有机成分1mlFelt5ml肌醇10ml加在一起，倒入烧杯（1L）（3）加入糖：称取30g蔗糖，溶于溶有琼脂的 300ml蒸储水中。(4)根据实验设计，量取生长调节剂：加在一起，倒入烧杯。(5)定容:加蒸储水(用量杯)。(6)调节pH至，用pH试纸进行测定，用ImolHcl或1Mol NaoH调节。(7)分装:3040 ml/瓶6,培养基勿碰三角瓶口。(8)用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。(三)灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为，温度为120126C,保持1520 min。具体操作步骤：1. 加水；2. 把包扎好的培养基装入高压锅；3. 盖上热压锅盖，上紧螺帽(注意对角才?紧螺帽)关上气阀和安全阀；4. 加热；5. 排除冷空气；6. 排除冷空气后，关闭放气阀，待压力升到1Kg位置时，开始计算灭菌时间， 一般在1Kg压力(121 C)下灭菌1520分钟即可，但要注意保持稳定压力。7. 灭菌时间达到20分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀， 打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。四.作业1 .总结配制培养基的注意事项。2 .制作培养基前为何要提前配制母液实验二短柄五加无性系建立一.目的和要求：1 .学习并掌握外植体的消毒方法及具体操作；2 .掌握无菌操作技术。二、材料、仪器与试剂1 .材料：短柄五加休眠枝短柄五加（Eleutherococcus brachypuSHarms.）为五加科五加属灌木，在我国的 分布范围极其狭窄，主要分布于西北黄土高原，逐渐被认为是濒危植物。具茎具 有较高的药用价值，有治疗神经衰弱、妇女更年期综合症、继发性高血压、白细 胞减少等功效。2 .仪器：超净工作台、灭菌锅、弯头剪、枪状银子、烧杯（500ml）、培养皿 等3 .试剂：配制好的 MS培养基各种母液、1mol/L的NaOH、1mol/LHCL %的升 汞、70%勺乙醇。三、方法步骤（一）无菌操作准备阶段接种室：1、紫外灯提前照20-30min。2、70%乙醇或新洁尔喷雾消毒。操作人员：1、穿专用实验服，戴口罩。2、剪短指甲，流水洗手三次。操作阶段1、 清理工作台面，70%乙醇擦三次。2、 70%乙醇擦手三次。3、避免说话和来回走动（二）无性系建立1 .配制启动培养基CK MS MS+6-BA 0. 5 mg/L + L MS+6-BA mg/L + L MS+6-BA 2. 0 mg/L + L MS+6-BA 1.0 mg/L + L MS+6-BA 2. 0 mg/L + L2 .材料的选择：选用的枝条要求表面光滑、无病虫害。3 .培养步骤：(1)外植体消毒：去杂一流水水洗 12h70%乙醇(8-10s) 一无菌水洗 3-5次一 HgC2 (10min) 一无菌水水洗5次(2)接种：用剪刀将灭菌后的枝条剪成 长约11.5 cm的单芽茎段。将茎段按其自然 极性方向垂直插入培养基，每瓶只接一个。对接种用具、超净台面、操作者手等 进行适当灭菌处理，继续接种。(3)培养：培养物置于 25C左右的培养室中，每天光照 12小时，光照度 为 850-1200lx。(4)观察：定期观察培养物的生长情况，及时将污染材料取出。四、作业1、总结本实验外植体的消毒过程及关键步骤。2、进行试验结果的观测、比较和记录，并通过分析筛选出月季无性系建立的最 佳培养基配方。植物生长调节剂No. 接种数/个萌芽数/个 污染数/个 萌芽率/%芽生长情况6-BA NAA IBACK 0012 1.03 2. 04 1.05 2. 0