T淋巴细胞功能测定

T T淋巴细胞功能测定淋巴细胞功能测定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实实验验流流程程1W1.双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验 2.酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA) OVA+CFA加强免疫加强免疫小鼠小鼠500 l 摘眼球取血摘眼球取血无菌取脾和胸腺无菌取脾和胸腺分离血清分离血清2W取脾和胸腺取脾和胸腺淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验 生理盐水加强免疫小生理盐水加强免疫小鼠鼠500 l 2WAfter 1W对照组对照组实验组实验组抗体效价抗体效价增殖功能增殖功能本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验内容实验内容1 小鼠摘眼球取血、小鼠摘眼球取血、分离血清分离血清1 淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!教学要求教学要求v掌握小鼠血清的分离掌握小鼠血清的分离v掌握淋巴细胞转化试验掌握淋巴细胞转化试验的基本原理及基本操作的基本原理及基本操作本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验(Lymphocyte transformation test)v原理原理v检测方法检测方法v操作步骤操作步骤v应用应用本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验分组及材料实验分组及材料v器材器材1.酒精棉球酒精棉球若干若干2.无菌纱布块无菌纱布块 1块块/组组3.无菌平皿无菌平皿1块块/组组4.无菌吸头（大、中、小）无菌吸头（大、中、小）4盒盒/room5.无菌无菌96孔培养板孔培养板1块块/组组6.可调微量加样器可调微量加样器4套套/room7.细胞计数板细胞计数板1套套/组组8.显微镜显微镜1台台/组组9.EP管管若干若干10.眼科剪、小镊子眼科剪、小镊子4套套/room11.细胞培养箱（细胞培养箱（37 5%CO2)12. 酶标仪酶标仪13. 离心机离心机2个个/room14. 超净台超净台2个个/roomv动物及试剂动物及试剂1.小鼠小鼠 2只只/组组(NS,OVA)2.培养液（培养液（IMDM) 无无FCS 100ml/room3.培养液（培养液（IMDM)20%FCS 30ml/room4.ConA（2.5,5,10g/ml) 各各1.5ml/tube 5.白细胞计数液（白细胞计数液（2%冰醋酸）冰醋酸）2瓶瓶/room6.MTT（5mg/ml) 1.5ml/room7.二甲亚砜（二甲亚砜（DMSO) 5ml/组组本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫血清分离过程免疫血清分离过程摘眼球取血RT for 2hrsRotation3000rpm for 20minTransfer serum to a new EPDouble diffusionStore at 4ELISA1.5ml EP本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验步骤实验步骤v单细胞悬液的制备：单细胞悬液的制备：1.1.小鼠脱臼处死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。小鼠脱臼处死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。2.2.于超净台内取出脾和胸腺组织于超净台内取出脾和胸腺组织( (各各1/2)1/2)，分别放入预先盛有，分别放入预先盛有2ml 2ml IMDMIMDM培养液的平皿内。培养液的平皿内。3.3.将将3-43-4层纱布覆盖到组织上，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻层纱布覆盖到组织上，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻压组织，将其捣碎。然后用压组织，将其捣碎。然后用10001000l l加样器隔着纱布将细胞悬液吸加样器隔着纱布将细胞悬液吸出，放入出，放入1.5ml EP1.5ml EP管中。管中。v细胞计数：细胞计数：1.1.取上述制备好的细胞悬液混匀后取出取上述制备好的细胞悬液混匀后取出2020l l，加到盛有，加到盛有980980l l计数液计数液的的EPEP管中，在显微镜下计数，计数方法见后。管中，在显微镜下计数，计数方法见后。2.2.调细胞浓度至调细胞浓度至1 110107 7/ml/ml，所需量为，所需量为1.5ml1.5ml，设需要的细胞悬液体积，设需要的细胞悬液体积为为Aml,Aml,可按公式：可按公式：?/ml?/mlA=1.5A=1.51 110107 7NOTE:在稀释前一定将原细胞悬液混匀，否则细胞长时间沉淀使细胞数不准。在稀释前一定将原细胞悬液混匀，否则细胞长时间沉淀使细胞数不准。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!细胞计数板细胞计数板v查出四个大方格的总细胞数查出四个大方格的总细胞数(X)v算出每个大方格的细胞数：算出每个大方格的细胞数：Y=X/4v每个大方格的体积为每个大方格的体积为V=1mm1mm0.1mm=0.1mm3=10-4mlv制备的细胞悬液的细胞浓度（制备的细胞悬液的细胞浓度（/ml)=Y 104稀释倍数稀释倍数(50)4本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!v细胞培养：细胞培养：1.按图所示加板。按图所示加板。2.2.将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于37 5%C037 5%C02 2培养箱中，培养箱中，培养培养4848小时。小时。vMTT掺入：掺入：（隔一天（隔一天 下午下午2:00）1.1.在终止培养前在终止培养前2 2小时，在显微镜下观察细胞转化情况。小时，在显微镜下观察细胞转化情况。2.2.每孔内加入每孔内加入MTTMTT（5mg/ml) 105mg/ml) 10l l，加完后轻轻，加完后轻轻搕搕板，使板，使MTTMTT和细胞混匀。和细胞混匀。3.3.在在37 5%C037 5%C02 2培养箱中继续培养培养箱中继续培养2 2小时，然后离心小时，然后离心2000rpm2000rpm，5min5min，轻轻弃，轻轻弃去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。4.4.加入加入100100l l 二甲亚砜（二甲亚砜（DMSO)DMSO)，将颗粒溶解，将颗粒溶解。 （隔一天（隔一天 下午下午4:004:00）v结果测定：结果测定：1.1.结果测量：用酶标仪测定光密度值：结果测量：用酶标仪测定光密度值：A570nmA570nm（用空白孔调零），记录结（用空白孔调零），记录结果。果。2.2.结果判定：结果判定： SISI（刺激指数）（刺激指数）=Con A=Con A刺激孔刺激孔 A A值值 / / 对照孔对照孔A A值值本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!预习内容预习内容v单克隆抗体的制备（理论单克隆抗体的制备（理论P70P70，实验，实验P106P106）v双向免疫扩散（理论双向免疫扩散（理论P241P241，实验，实验P116P116）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!v八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺v每孔加入每孔加入100 l调好的细胞悬液调好的细胞悬液v1-3孔加入孔加入10%FCS-IMDM 培养液，培养液， 100 l v4-6孔加入孔加入2.5 g/ml的的Con A, 100 l v7-9孔加入孔加入5 g/ml的的Con A, 100 l v10-12孔加入孔加入10 g/ml的的Con A, 100 l NOTE:ConA用用10%FCS-IMDM培养液配制培养液配制1-34-67-910-12Aspleen cell+10% IMDMspleen cell+ ConA 2.5g/mlspleen cell+ConA 5g/mlspleen Cell+ ConA 10g/mlB spleen cell+10% IMDMspleen cell+ ConA 2.5g/mlspleen cell+ConA 5g/mlspleen Cell+ ConA 10g/mlCthymus cell+10% IMDMthymus cell+ ConA 2.5g/mlthymus cell+ConA 5g/mlthymus Cell+ ConA 10g/mlD thymus cell+10% IMDMthymus cell+ ConA 2.5g/mlthymus cell+ConA 5g/mlthymus Cell+ ConA 10g/mlN.S.OVAN.S.OVA 返回返回本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!v八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺v每孔加入每孔加入100 l调好的细胞悬液调好的细胞悬液v1-3孔加入孔加入10%FCS-IMDM 培养液，培养液， 100 l v4-6孔加入孔加入2.5 g/ml的的Con A, 100 l v7-9孔加入孔加入5 g/ml的的Con A, 100 l v10-12孔加入孔加入10 g/ml的的Con A, 100 l 1-34-67-910-12Aspleen cell+10% IMDMspleen cell+ ConA 2.5g/mlspleen cell+ConA 5g/mlspleen Cell+ ConA 10g/mlB spleen cell+10% IMDMspleen cell+ ConA 2.5g/mlspleen cell+ConA 5g/mlspleen Cell+ ConA 10g/mlCthymus cell+10% IMDMthymus cell+ ConA 2.5g/mlthymus cell+ConA 5g/mlthymus Cell+ ConA 10g/mlD thymus cell+10% IMDMthymus cell+ ConA 2.5g/mlthymus cell+ConA 5g/mlthymus Cell+ ConA 10g/mlN.S.OVAN.S.OVA本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!感谢您浏览感谢您浏览v需要相关抗体试剂的可以访问需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎全球抗体搜索引擎vfantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台v需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您进行咨询，期待您的加入的加入