土壤脱氢酶测定-TTC还原法

土壤脱氢酶测定-TTC还原法仪器： 试管、定量滤纸、三角瓶、分光光度计、摇床、 Ph 计试剂：TTC（氯化三苯基四氮唑）、浓HCkTris（三强甲基氨基甲烷）、甲醇、 TPF（三苯基甲臜za）配制：1. Ph 7.6、0.5mol/L Tris 缓冲溶液：60.57g Tris溶于水，用 1mol/LHC（按浓盐酸：水=1:1比例配制）准确调pH至7.6,定容至1000ml;2. 1% TTC容液：1g TTC溶于上述缓冲液，定容至100ml ；3. 1%葡萄糖溶液： 1g 葡萄糖溶于水，定容至 100ml;测定步骤：1. 4g过2mm（ 10目）筛新鲜土样于试管（25ml）,加1%TTC溶液2ml,1%葡萄糖溶液2ml，摇匀；同时每个处理设置用 Tris缓冲液2ml 代替TTC对照；2. 试管于恒温箱（烘箱）暗室37C培养24h，加甲醇20ml （少量多 次），移入50ml三角瓶，摇床（180-220r/min）振荡1h,过滤；3. 先用量筒测量滤液体积,然后将滤液于分光光度计 485nm 处测定 吸光度值，用水和待测液润洗，直接测量下一个样品。4. 整个实验设置无土壤对照（加 TTC溶液和葡萄糖溶液各2ml）。标准曲线制备：1. 准确称取TPF 50mg于 250ml甲醇中，母液浓度为200mg/L。2. 吸取 0, 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5ml 母液于 25ml 容量瓶，用 甲醇定容，TPF浓度分别为0, 2, 4, 8, 12, 16, 20mg/L。脱氢酶活性计算：脱氢酶活性（mgTPF/g干土 /h）=（ c*v）/ （干土质量*24）c：滤液中TPF的浓度（标准曲线查）；v:滤液的体积；干土质量：2g鲜土烘干后的质量；24：暗室培养的时间。