左卡尼丁对离心处理精子氧化应激保护作用的实验研究

青岛大学硕士学位论文左卡尼丁对离心处理精子氧化应激保护作用的实验研究姓名：唐光昕申请学位级别：硕士专业：泌尿外科学指导教师：王新生20110601 要方法：本实验分别研究正常精子与少弱精子对体外离心和左卡尼汀的反应。首先参关键词精子；氧化应激；活性氧；左卡尼汀 篧 琑 獂簊： 引言努力下取得了长足的进步和越来越多的信任，成为广大医生和不育夫妇的一个重要选项。随着生殖医学的发展，辅助生殖技术中的重要一环精子体外处理技术也引起了更多的关注。体外处理是辅助生殖技术治疗中的常规步骤，目的是获得没有精浆组分、细胞残片及病原污染物的精子悬液，回收足够数量具有正常形态和功能的优质精子】。理想的精子分离技术应当具备以下特征：僮骷蛞卓焖伲煤侠恚能够回收获得足够多量的优质精子；僮鞴滩换崴鹕司樱尽可能去除死精 青岛大学硕士学位论文色晶状体或白色透明细粉。或称维生素，是脂肪酸一种重要成分。肉碱有两种同分异构体形式左旋肉碱和右旋肉碱，哺乳动物体内仅左卡尼汀是否能减少精子离心过程中产生的活性氧从而减轻精子所受的氧化应激损 材料和方法正常精液样本份，选自各精液参数均符合正常标准者：少弱精组样本份，供精者年龄精液量 青岛大学硕士学位论文材料试剂：南京建成生物工程有限公司上海杰美基因医药科技有限公司青岛大学附属医院中心实验室上海科兴生物科技有限公司上海科兴生物科技有限公司上海哈勃公司生产主要仪器设备：恒温水浴箱电子天平上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂狟快速旋涡混匀器塑料试管、微量加样器、微量移液器头、管、孔板若干。 材料和方法选择顺利液化的精液进入下一步实验操作。液分别编入正常精子组和少弱精子组。哉游扛鋈胙难居梦考友魑莼煸鹊木杭尤个一溶液，而楹组各加入微升溶液。种雍组试管在室温下静置分钟，橛组的样本放入离各项指标的检测蚣觳庥玫装宓目字屑尤微升待测精液样本。 青岛大学硕士学位论文检测虮捎肓虼捅韧姿崴鹾希纬珊焐铮出现最大水浴蛴霉8侵蠓分钟，取出后流水冷却。梦苄牡奈喜愠吻逡海褂梅止夤舛燃撇馄湓处的吸收光度值。 材料和方法 青岛大学硕士学位论文图正常精子与少弱精子丙二醛检测结果对比直方图重 实验结果图正常精子与少弱精子各组化学发光度对比直方图 青岛大学硕士学位论文正常精子组丙二醛浓度比较少弱精子组活性氧化学发光度比较运用随机区组设计定量资料的方差分析处理少弱精子组活性氧化学发光数据资正常精子组活性氧化学发光度比较 取后先与适当浓度的左卡尼汀混合孵育一定时间，不但有利于精子进一步成熟，而能是引起男性不育的一个重要原因。有确切的证据提示人精子产生活性氧【子的毒性机理国内外学者提出了很多假说，得到广泛认同的主要有两点，一是影响引起减少，导致精子形态改变，精子功能及代谢异常。 青岛大学硕士学位论文道用维生素瘟迫蹙行 结 青岛大学硕士学位论文蒲牵跤牢赖龋街志佑呕矸椒谔逋馐芫械挠醚馵生殖与避孕，萄墩氯海艹辛嫉龋钚匝踔氯司釉硕芎痛婊盍浠姆治鯷中华男科学，：，：痷：孙玲，陈士岭等精液处理对精子生存环境活性氧浓度的影响愣窖：洪卫国，杨明蝗饧畹纳镅饔肹国外医学生理、病理科学与临床分册，死嗑杭熬右还闭骋合嗷饔檬笛槭壹煅槭植醄人民军医出版社， ， 琈珹谭迎春，陈子江等活性氧对精子功能的影响蕉揭，。：， ，：，甅，：，猚 珹，：商学军，王修来，黄字烽肉碱在男性生殖谢D锌蒲又荆： 理过程中扮演了不良角色。其对机体生殖和胚胎发育过程中的损伤已成为当前的研究热点。正常的生理条件下，机体中不断产生的少量活性氧与自身的抗氧化防御系 行陨诚低持蠷的来源与消除及其影响因素渤蒲踝杂苫 基、过氧化氢：咛及一氧化氮等褐蠷主要来楚，但目前学者们认为精子是氧化还原活动非常活跃的细胞，其过量活性氧可能主一氧化氮属于活性氧的一种，有研究表明对精子的成熟是非必需的，精液中的抗氧化防御系统精液中抗氧化防御系统主要有两大类：一类是酶促防御系统，主要通过酶促反其转化产物也对机体有氧化应激威胁，人体内的酶促防御系统主要有谷肤甘肤过氧化来消耗掉活性氧从而保护机体，是一切具有氧化威胁性物质的最终解决方案。维生素谽、谷肤甘肤蛐了屎谒等都是人体内时刻 青岛大学硕士学位论文机体的过氧化损伤。贾戮褐蠷过高的相关因素因素，比如辐射和化学毒物；有些则尚未引起人们足够的重视，比如吸烟。有学者系统总结如下【：环境中的可能诱导氧化应激损伤的物理因素防御系统的清除能力下降，发生长期的过氧化损伤效应。国外学者在对鱼精子的光照射实验中发现精子中的仙钪盏贾戮佑肼炎拥慕岷铣晒式档汀緇 ，因此他们建议辅助生殖技术操作中尽量在暗处或红色光照下进行授精。辐射可能，另有动物实验发现，低强度微波引起的脂质过氧化水平增加和热效应可能是辐射造成雄性小鼠生殖毒性的原因。研究人员发现小鼠生殖能力的下降在低强度微波照射下 富钚韵陆担墓可闳胍不岫曰逶斐裳趸鹕俗饔谩。 青岛大学硕士学位论文【捎贒分子自身的化学结构因素，其内部的嘧啶与嘌呤脱氧核糖极易被精子尾部蛋白酪氨酸基团的磷酸化可能是精子实现运动功能的必要机制之一。国外 应该非常有限，而且卵细胞与精子不同，其内有完备的抗氧化酶系，具有较强的抗至今尚未出现有关的报道。操作简易快速，经济合理：芄换厥栈竦米愎欢嗔康挠胖示樱操作过程不会损如果精液因质量原因液化不良，应果断采取其他措施积极干预，以尽量减少活性氧 青岛大学硕士学位论文离心会诱使精子产生过量的活性氧，翟谟盏季褐蠷形成方面，离除之间存在一种动态平衡，即使精子在孵育或冻存过程中，通过向其所处的培养液 虽然很多实验早已证实离心能诱使精子产生过量的活性氧，然而这并没有引起人们足够的重视。离心处理作为一种简单有效的分离方法，无可替代的被广泛应用于辅助生殖技术的各个环节。例如密度梯度离心法已成为我国最广泛采用的精子体外处理技术之一，我院生殖科在用上游法提取精子前也常规用离心法浓缩一下精子，通过睾丸穿刺取精做试管婴儿时，也需用离心法将精子从组织中分离出来，尤其是在这方面已多有尝试，目前临床上已在应用的体内和体外抗氧化剂可分为以下几类：酮、儿茶素、羟基肉桂酸衍生物等，但目前还处在实验阶段。既然已有如此多的抗氧化剂已经应用于人体，为何精子的氧化应激损伤仍是当 青岛大学硕士学位论文尽量避免用单纯离心上游法处理，而是改用电泳法，电泳法是问世不久的新型精液优选处理方法。据介绍该法不仅能去除污染细胞如白细胞，而且能保持精子的活力、活率、正常形态率等多种优点，并能同时减少精子的鹕恕。第三种方法是辅助生殖技术治疗前加用的临时抗氧化预防措施，包括体内和体外两种途径。体内途径即戒烟、口服辅酶谻等药物以提高体内的抗氧化防御储备，国外抗氧化作用已得到公认。左旋肉碱应用现状及在辅助生殖技术中的应用前景 休克病人的再灌注损伤、心脏病、缓解疲劳、促进脂类代谢治疗脂肪肝、慢性肾衰近年来，左卡尼汀成为男性生殖治疗的新热点。学者发现附睾中含有大量的左为多个临床研究所证实。资料显示，弱精子症男性精液中的肉碱浓度与精子密度、活也属于一种弱精子。肉碱在精子运动、成熟和精子发生中的重要作用使我们推断， 青岛大学硕士学位论文卡尼汀可以改善精子的密度、活率等多项指标，这一推断己由国外学者的严格试验随机、对照的严密临床试验，在对患者进行了天的口服补充肉碱后发现，患者的精子数目、密度、直线活动率、左旋肉碱浓度等主要指标均有支持细胞功能的调节作用及其抗凋亡作用有关，也有可能是一起口服的乙酰肉碱衍 生了一定的协同作用。由上可知，左旋肉碱在精子细胞发育过程的中作用不是单一的，而是多种协同辅助生殖的成功率具有积极意义。 青岛大学硕士学位论文， 酚海趸肽行圆挥喙馗运叵盗醒芯縖山东大学，甊： ，：甅， ， 甎：，杂志，：琇甆猟，： 琤琤，：科大学，瓾，：琓琑删， ，：狟珺琒，：琈琁，：，珿 甈：琒琄： 青岛大学硕士学位论文药，：段晓明蝗饧疃愿纳迫司庸艿奶逋馐笛檠芯縖山西医科大学， 猘， 猚猚，猘 !：李铮，陈国武，商学军等左旋肉碱和乙酰左旋肉碱合用治疗少弱精子症有效性与安全性商学军，王修来，黄宇烽肉碱在男性生殖谢D锌蒲又荆：， 攻读学位期间的研究成果 衷心感谢低温男科学研究室和中心实验室刘忠强等老师在实验阶段对我的精心感谢青医附院泌尿外科各位老师在临床工作中给予我的耐心教诲及学习和生活谢谢。