细胞生物学实验操作考核试题及评分标准

细胞生物学实验操作考核试题及评分标准实验一：显微镜的技术参数及特殊光镜的演示步骤考核目标及评分细则满分值一1. 熟悉实验原理。（3分）2. 明确实验目标。（2分）5二熟悉实验内容：1.普通光学显微镜的结构及技术参数（3分）2.几种特殊类型的光学显微镜（2分）5三选择仪器和药品：普通光学显微镜（2分）、暗视野显微镜（2分）、相差显微镜（2分）、荧光显微镜（2分）、倒置显微镜（2分）10四进行实验：1、 光学系统及成像原理(10分)2、 机械系统：（从下往上）(10分)3、 显微镜的技术参数(10分)4、 显微镜的使用(15分)5、几种特殊类型的光学显微镜的使用：暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜(20分)65分五根据实验现象得出结论：1、能够准确规范的操作各种显微镜（2分）2、熟悉各种显微镜的用途（3分）5六实验后整理：1、整理仪器并使其归位（5分）2、保持台面和地面整洁，实验后洗手（5分）10实验二：测微尺的使用及细胞大小的测量步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 安装并用镜台测微尺标定目镜测微尺（2分）2、然后用目镜测微尺测量装片细胞的大小。（3分）5三选择仪器和药品：普通光学显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、鱼血细胞装片、马蛔虫子宫细胞装片。（10分）10四进行实验：1、 调好显微镜，使其处于工作状态（10分）2、 在显微镜载物台上放置镜台测微尺，并调整好位置（10分）3、 按照下列公式计算目镜测微尺每格等于多少微米（10分）4、 细胞大小的测量（10分）5、 计算细胞大小（25分）65分五根据实验现象得出结论：根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积椭球形：V4ab2/3 a长半径， b短半径圆球形：V4/3r3 r半径圆柱形：Vr2h r半径， h高（5分）5六实验后整理：1、整理仪器并使其归位（5分）2、保持台面和地面整洁，实验后洗手（5分）10实验三：血涂片制备及瑞氏染色显示白细胞步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 采血并制备血涂片（2分）2、 瑞氏染色法显示血涂片中的白细胞（3分）5三选择仪器和药品：普通光学显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、鱼血细胞装片、载玻片、采血针、酒精棉球、瑞氏染液（10分）10四进行实验：1、 准备两张经过脱脂的干净载玻片。（5分）2、 2、用70酒精棉球消毒指腹或耳垂。（5分）3、用消毒过的针刺破指腹或耳垂的皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核白细胞较多），用载玻片的一端与血滴接触。取另一张载玻片，斜置血滴左缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以45为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将沾有血液的载玻片向前推进，速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀（初学者可把玻片放在桌上操作）。（20分）4、使涂片在空气中自然干燥备用。制作不理想者需要重新制备。（5分）5、待血涂片干燥后加瑞氏染色液58滴覆盖整个血膜，1min；（5分）6、直接清水冲洗，水流不宜过大，至水中无色即可。不可先倒掉染液，防止染液残渣留在细胞中影响染色结果。（10分）7、纱布擦干或吸水纸吸干玻片下端（无细胞面）的水，然后置于载物台上进行观察，先用低倍镜查找，后用高倍镜观察细节。（5分）8、拍照并进行结果分析：（5分）65分五根据实验现象得出结论：（5分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验四：血细胞的计数步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 指尖采血（2分）2、 红细胞进行计数。（3分）5三选择仪器和药品：普通光学显微镜、血球计数板、血盖片（2盒）、采血针（每人1只）、75酒精、消毒棉球、10010毫米玻璃试管（25只）、试管架（4个）、吸管（25支）、血球计数板（25块）、擦镜纸。试剂：生理盐水（0.9NaCl液）：称取4.5克氯化钠，溶于500毫升蒸馏水（10分）10四进行实验：1、准备细胞稀释液：准确量取5ml生理盐水加入试管中。（5分）2、制备血细胞稀释液：（1）用消毒干棉球醮75酒精消毒左手无名指或耳垂边缘，待酒精挥发后用采血针刺入皮肤约23mm深，让血液自然流出。（10分）2）用消毒干棉球拭去第1滴血液，待流出第2滴血成大滴时，用采血管吸血至20mm3刻度处。（10分） （3）将吸管内血液放入盛有生理盐水的小试管底部。（5分）3、滴片：将血细胞计数板擦干净，先盖好血盖片，然后用吸管吸取已稀释的细胞悬液，滴在血盖片边缘，让细胞液自动流入计数室内。静止片刻，待细胞下沉后可计数。（10分）4、计数：将计数板放在载物台上，在低倍镜下按一定方向逐格数出细胞数。（10分）5、计算：算出每立方毫米的细胞数。（15分）65分五根据实验现象得出结论：白细胞：白细胞个数/mm3 =四角的4个大方格（共416中格）内细胞数 /4 10稀释倍数（2分）红细胞：红细胞数/mm3 =中央大方格中的四角和中央的中方格（共5个中方格）内红细胞总数 /5 2510稀释倍数（3分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验五：线粒体的超活染色与观察步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 取口腔上皮细胞（2分）2、 采用詹纳斯绿染色法显示细胞中的线粒体。（3分）5三选择仪器和药品：光学显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、消毒牙签、吸水纸、擦镜纸。詹纳斯绿B染液、生理盐水。（10分）10四进行实验：（一）口腔粘膜上皮细胞涂片的制作：1、将载玻片刷洗干净，用纱布擦干，置于实验台的适当位置；（10分）2、蒸馏水漱口，将牙签粗的一端放入自己口腔中；（10分）3、用力适当的在口腔颊内刮几下（用力轻重适宜，以获得活力旺盛的细胞，又不损伤）（10分）4、将刮下的白色粘性物薄而均匀地涂在载玻片上（可用生理盐水，细胞容易展开；可不用，不用的容易贴壁）；（10分）（二）染色：5、在载玻片中央滴一滴中性红詹纳斯绿B（Janus green B）染液，均匀涂于染液中，染色0.51 min，加盖玻片后立即观察。（10分）6、拍照并对图片进行标注。（15分）65分五根据实验现象得出结论：5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验六：Brachet染色法显示RNA步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、取洋葱鳞茎内表皮细胞（2分）2、采用Brachet染色法显示细胞中的RNA及DNA。（3分）5三选择仪器和药品：药品：甲基绿（2%）-哌洛宁（1%）混合染料 （1：9）（5分）仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀等（5分）10四进行实验：1、取材：用镊子撕取一小块洋葱内表皮，剪成45mm2的小块，置于载玻片上。（10分）2、染色：用吸管吸取1滴甲基绿-哌洛宁混合染料（Unna 染料），滴在表皮上，染色30-40mins。（15分）3、冲洗：清水冲洗表皮至水无色即可，并用吸水纸吸干。（10分）4、观察：盖上盖玻片后镜检。（15分）5、拍照并描述结果（15分）65分五根据实验现象得出结论：（10分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验七：PAS法显示多糖步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 培养草履虫（2分）2、 采用过碘酸-希夫反应显示细胞质中的多糖成分（3分）。5三选择仪器和药品：仪器：离心机2台、离心管812支、显微镜、擦镜纸、量筒、染色缸812只、纱布等；（5分）药品：0.5%过碘酸（HIO4）溶液、Schiff试剂、10%偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）水溶液、1N盐酸、1%甲基绿水溶液，二甲苯、95%酒精、100%酒精。（5分）10四进行实验：1、取草履虫培养液适量，纱布过滤稻草后，离心无稻草的草履虫培养液1400转/分5min，取沉淀12滴滴于载玻片上；（15分）2、95%酒精固定10min，此过程中要防止酒精完全挥发干，要不断补充酒精；（10分）3、滴加几滴0.5% HIO4 作用15min；（5分）4、滴加Schiff试剂（暗处室温）作用3045min；（5分）5、亚硫酸水漂洗三次（除去多余的无色品红），每次2min；（10分）6、清水冲洗约1min后擦干玻片镜检。（10分）7、拍照并描述结果。（10分）65分五根据实验现象得出结论：细胞内的糖元呈红色-紫红色颗粒。显色深浅与细胞中乙二醇基含量成正比，多时呈深紫红色。（5分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验八：染色体玻片标本的制作步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、阻断小鼠股骨骨髓细胞到分裂中期（2分）2、采用低渗滴片法制备染色体玻片标本，利用显微镜观察中期分裂相。（3分）5三选择仪器和药品：注射器、解剖器具(剪刀、镊子、解剖刀)、离心管、吸管、试管、水浴锅、载玻片、离心机、显微镜；秋水仙素(0.01)、乙醇、冰醋 酸、生理盐水，0.075M KCl低渗液、Giemsa染料（10分）10四进行实验：1、前处理：取骨髓细胞前58小时向小鼠腹腔内注射秋水仙素（5g/g)。（将有丝分裂阻断在中期，增加中期分裂相的比例）（10分）2、取材：处死小鼠剖出股骨（注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失），将股骨上的肌肉拧擦干净后，取骨髓细胞。先剪去股骨两端，再用注射器和针头吸取生理盐水溶液，将针头插入骨髓腔，以生理盐水将骨髓细胞冲入离心管中(获得有丝分裂细胞，注意冲出骨髓细胞的动作要快，冲击量大，细胞多，并要求预温药液至25)。生理盐水用量大约6ml。（10分）3、染色体制备：（1）低渗：800-1000rpm离心8mins，去除上清液，加入6ml预温至25的0.075M 的KCl溶液，用吸管轻轻吹散细胞，置25条件下低渗20分钟。（使细胞膨胀，利于滴片时染色体分散）（5分）（2）预固定： 800-1000rpm离心8mins，去除上清，加入6ml新制的Carnoys固定液（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管轻轻将细胞吹散，固定10mins。（15分）（3）固定：离心，去上清，加入6ml新制的Carnoys固定液（甲醇：冰乙酸=3：1），混匀，固定10mins, (此步重复两次)。离心，去上清后，加入约0.5ml新Carnoys固定液，用滴管轻轻将细胞吹散，制成细胞悬液。（5分）4、滴片：（15分）取出预冷的干净载玻片 以60-75cm的高度滴片 自然干燥 Giemsa染料染色10mins流水冲洗12mins 镜检5、拍照并描述结果。（10分）65分五根据实验现象得出结论：5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验九：植物细胞骨架的光镜观察步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 取洋葱内表皮（2分）2、 用光镜观察细胞骨架的形态与分布。（3分）5三选择仪器和药品：水浴锅、5-10ml塑料离心管、镊子、剪 刀、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸等；6 mM 磷酸缓冲液PBS、1% triton X- 100 （去垢剂）、3% 戊二醛、咪唑缓冲液、0.2% 考马斯亮兰R250染料；洋葱（10分）10四进行实验：1、取材：撕取洋葱鳞茎内表皮5mm2，浸入装有6mM PBS 缓冲液的烧杯或小瓶内，使材料下沉，处理5mins；（5分）2、抽提：吸去PBS，加去垢剂1%Triton X-100液2ml，使液体充分浸泡材料，并立即放入37水浴锅中处理20mins；（10分）3、冲洗：吸去1%Triton，用M缓冲液(咪唑+螯合剂+ K+ + Mg2+ ）轻轻冲洗3次，每次3mins；（5分）4、固定：加3%戊二醛固定15mins；（10分）5、冲洗：吸去3%戊二醛固定液，用6mM PBS缓冲液冲洗3次，每次3mins；（10分）6、染色：吸去PBS缓冲液，滴几滴0.2%考马斯亮兰R250染料，染色10mins；（5分）7、制片：吸去染料，用蒸馏水洗2-3次，将标本平铺在载玻片上，加盖片；（10分）8、镜检：拍照洋葱表皮细胞骨架图并描述现象。（10分）65分五根据实验现象得出结论：5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验十：活细胞观察与死、活细胞鉴别步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 取小鼠脾脏淋巴细胞2、 用台盼蓝法鉴定细胞死活。5三选择仪器和药品：仪器：镊子、剪 刀、注射器、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸等药品：0.9%生理盐水 、0.4%台盼蓝（生理盐水配制）（10分）10四进行实验：1、取材：取小鼠脾脏，用盛有2mL生理盐水的注射器冲击脾脏，下接一个10mL离心管。（25分）2、染色：取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加入约0.1ml（12滴）0.4%台盼蓝染液，混合，2min后立即制成临时装片，镜检。（20分）3、拍照描述结果并计算存活率：（20分）65分五根据实验现象得出结论：死细胞染成蓝色，活细胞不着色。（5分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验十一：动物细胞微丝束的光镜观察步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、 取小鼠血管平滑肌细胞或成纤维细胞（2分）2、 用考马斯亮蓝法光镜观察细胞骨架的形态与分布。（3分）5三选择仪器和药品：水浴锅、5-10ml塑料离心管、镊子、剪 刀、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸等；（5分）1M PBS、1% triton X- 100 （去垢剂）、3% 戊二醛、咪唑缓冲液、0.2% 考马斯亮兰R250染料（5分）10四进行实验：1、清洗盖片：将盖玻片清洗干净并高压灭菌或酒精消毒，置于无菌六孔细胞培养板中；（5分）2、培养细胞：原代或用传代培养冻存的平滑肌或成纤维细胞，于六孔培养板中长至50%60%融合；（5分）3、洗涤：弃去培养液，PBS洗涤3次，每次2min；（5分）4、抽提：吸去PBS，加去垢剂1%Triton X-100液1ml，室温处理20mins；（15分）5、冲洗：吸去1%Triton，用M缓冲液(咪唑+螯合剂+ K+ + Mg2+ ）轻轻冲洗3次，每次3mins；（5分）6、固定：加3%戊二醛固定15mins；（5分）7、冲洗：吸去3%戊二醛固定液，用PBS缓冲液冲洗3次，每次3mins；（5分）8、染色：吸去PBS缓冲液，滴几滴0.2%考马斯亮兰R250染料，染色10mins；（5分）9、制片：吸去染料，用蒸馏水洗2-3次，将长有细胞的盖片反扣在载玻片上，擦干镜检。（5分）10、拍照并描述现象：（10分）65分五根据实验现象得出结论：（5分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10实验十二：细胞凝集反应步骤考核目标及评分细则满分值一1、熟悉实验原理。（3分）2、明确实验目标。（2分）5二熟悉实验过程：1、取鸡血2、观察细胞凝集反应。5三选择仪器和药品：仪器：显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架（5分）试剂: 鸭血红细胞、抗凝血剂、PBS、土豆块茎。（5分）10四进行实验：1、2鸭血红细胞悬液制备新鲜鸭血加抗凝剂，生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，按红细胞压积用生理盐水配成鸭血红细胞悬液。（15分）2、土豆凝集素制备 土豆2克，加10ml PBS，浸泡2h（10分）3、细胞凝集反应土豆凝集素1滴、2鸭血红细胞液滴，于载玻片上混匀，静置20min，（10分）4 、对照PBS1滴、2鸭血红细胞液2滴（10分）5、镜检（10分）6、绘图并描述现象。（10分）65分五根据实验现象得出结论： 对照 凝集的鸡血细胞 （5分）5六实验后整理：1、废液倒入废液桶，固体物回收到指定容器中（5分）2、洗涤仪器并使其归位。（3分）3、保持台面和地面整洁，实验后洗手。（2分）10