安捷伦1100及液相色谱仪的基本知识

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.安捷伦1100液相色谱仪各项性能指标悬赏分:5|解决时间:2010-10-16 22:13|提问者:4329211最佳答案朋友,直接致电agilent的800-820-3278免费电话就可以得到Agilent的满意答复了系列Agilent 1100泵系统 电子流控阀(EFC)控制的毛细液相泵系统,精度高、流速范围广 柱流速范围:1-20ul/min;10-100ul/min(可选件)0.001-2.5m1/min(EFC关闭状态) 高压制备泵系统,单元或双元高压制备泵流速范围:0.001-100m1/min 分析型泵系统流速范围:单元泵:0.001-10m1/min二元泵:0.001-5m1/min四元泵:0.001-10m1/min 品种齐全的Agilent 1100系列进样系统 标准手动进样器(分析型或制备型) 标准自动进样器样品瓶容量:可达100个(2mlx100)进样量:0.1-100ul(0.1-1800ul)可选件 微盘式自动进样器样品瓶容量:2x96(孔板),2x386(孔板)或100x2ml进样量:0.1-100ul(标准件)0.1-1500ul可选件 微量标准自动进样器/微盘式自动进样器进样量:0.01-8ul(标准);0.01-40ul(可选) 恒温标准自动进样器/微盘式自动进样器温度范围:4-40可设定步进1 220型微孔板式自动进样器组合化学样品管理系统样品瓶容量:各种规格试管 多达12个微孔板(96孔板,384孔板)进样量:0.1-5ul;0.1-20ulAgilent 1100系列检测器 可变波长扫描紫外检测器(VWD)波长范围:190?600nm 多波长检测器(MWD)精品.波长范围:190?950nm(双灯源) 二极管阵列检测器(DAD)波长范围:190?950nm(双灯源) 荧光检测器(FID)激发波长:200-700nm;发射波长:280-900nm光谱存储:全光谱 示差折光检测器(RID)温控:室温+5至55内置自动吹扫阀和自动溶剂循环阀 电化学检测器(ECD) LC/MS四极杆质量检测器(MSD) LC/MS离子阱质量检测器(Trap MSD)柱温箱和脱气机组件 柱温箱温度范围:室温下10至80可选件:柱切换阀 真空在线脱气机安捷伦1120液相色谱仪技术参数泵:流速精度:0.07% RSD流速范围:0.001-10.0ml/min,以0.001ml/min的增量自动进样器:进样量范围:0.1-100ul,以0.1ul的增量进样精度:0.25% RSD(5-100ul),1% RSD(1-5ul)样品容量:100个2ml样品瓶;或者2个半托盘,每个40个2ml样品瓶或15个6ml样品瓶柱温箱:温控范围:室温上10到60温控稳定性:0.15VWD:噪音:0.7510 -5AU波长范围:190-600nm主要特点仪器介绍特点介绍可选5种配置系统,工厂测试,开箱即用和各种检测器兼容:示差折光检测器(RID),荧光检测器(FLD),蒸发光散色检测器(ELSD)精品.易于使用的EZChrom Elite Compact软件,提供英中日界面LMD软件在故障发生前就可以实时通报新的最佳性能色谱柱提供可靠重现的结果附加服务: 1120 液相色谱仪有五种集成的一体化配置可供选择:1.等度泵 手动进样 VWD2.梯度泵 手动进样 VWD3.梯度泵 手动进样 柱温箱 VWD4.梯度泵 ALS 柱温箱 VWD5.等度泵 ALS 柱温箱 VWD其中包括了硬件、软件、色谱柱和LMD分析方法此仪器尚未上传分析方法相关资料1.安捷伦1120液相色谱仪详细技术参数与资料!相关仪器1.Agilent1200液相色谱仪(1200)2.液相色谱仪LC2100(LC2100)相关耗材1.安捷伦C8、C18液相色谱柱(规格:C8、C18)2.安捷伦氘灯(规格:Agilent 1100)3.顶空进样瓶、自动进样瓶(规格:20ml)4.色谱微量进样器、液体进样器、气体进样器(规格:ul)5.安捷伦液相色谱住(规格:C8,C18)6.Agilent ZORBAX StableBond SB-C18液相色谱柱(规格:Agilent SB-C18)7.真空泵、无油真空抽滤泵(规格:QP-01)8.液相色谱柱温箱(规格:JK-LCagilent1200安捷伦液相色谱仪技术参数方便地利用四种溶剂进行等梯度或梯度分析,适用于方法快速开发和快速配备流动相,以及冲洗 HPLC 系统流量范围宽,最高流速 10 mL/min ,延迟体积 800-1100 ?L,适用于微径柱、标准柱和半制备应用通过 Instant Pilot 组件或安捷伦化学工作站或 EZChrom 软件,可以容易地进行编程和控制包含微量真空脱气机,脱气效率高,实现了操作无障碍和最高性能,完全不需要通氦气直接从前面板快速更换维护部件通过自我诊断、内置日志和预编程的测试方法,快速判断问题早期维护反馈 (EMF) 长期不间断地监测仪器使用和用户预设的限度,一旦超出限度,将提供反馈信息精品.在所有安捷伦 1200 系列 HPLC 组件范围内可升级和扩展主要特点agilent1200安捷伦液相色谱仪特点介绍同时安捷伦1200系列快速高分离液相色谱系统同样和常规高效液相色谱仪一样耐用,也保留了常规液相色谱仪的方法和工作原理。主要特点1、安捷伦1200系列四元泵适用于方法开发、研究和各种需要连续而广泛地进行溶剂选择溶剂的应用,在选择溶剂和自动化方面具有最大的灵活性。2、 安捷伦1200四元系统可以在使用不同溶剂的方法之间进行快速切换,可以使用二元、三元和四元梯度,是市场上最灵活的系统。3、和任何安捷伦1200系列的自动进样器相结合后,安捷伦1200系列四元系统非常适合多方法高通量的工作流程。4、 比常规HPLC快20倍,并具有相同或更好的数据质量(分辨率、灵敏度、精密度),与HPLC相比高分辨率提高60%。具有相同或更好的数据质量(分辨率、灵敏度、精密度) 5、 延迟体积可配置,适用于各种应用。既可支持窄径柱又可支持标准柱- 适用于RRLC和HPLC不影响现有HPLC方法的兼容性。标准延迟体积配置(600 - 800 ?L),柱子最长300 mm最适合支持窄径柱上的 LC/MS。低延迟体积配置 (120 ?L)法规适应性,符合最严格的法规要求有范围广泛的 70多种 RRHT柱具有广泛的适用性从HPLC到RRLC能进行简便、快速而可靠的方法转移 RRHT和HPLC柱具有相同的化学性质2000 个样品/天。高通量配置, 通过交替柱再生(ACR)实现系统包括2台泵、2根色谱柱和一个用于交替柱切换的2Ps/10Pt阀。 6、基本系统快速高分离液相系统二元液相系统四元液相系统单元液相系统纯化系统HPLC-Chip/MS 系统纳流液相系统毛细液相系统 7、1200 系列检测器二极管阵列检测器SL精品.荧光柱检测器多波长检测器 SL示差折光检测器可变波长检测器多波长检测器SL仪器介绍安捷伦1200系列快速高分离液相色谱系统,系统配置灵活,可以使用二元、三元和四元梯度高效液相色谱系统。在分辨率、灵敏度和精确度不变的前提下,分析速度是常规高效液相色谱仪的20倍、分辨率提高了60%。分析方法此仪器尚未上传分析方法相关资料下载样本相关仪器1.SP7800气相色谱仪(SP7800)2.液相色谱仪LC2100(LC2100)3.真空泵、真空抽气泵(GM-0.3/0.5型号)以上为1100、1120、1200技术参数介绍看看对楼主有没有帮助。建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习!分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题,基本上问题都能得到解答,有问题可去那提问,百度上搜下就有。液相色谱仪科技名词定义中文名称:液相色谱仪英文名称:liquid chromatograph定义:精品.用液相色谱法对物质进行定性、定量分析的仪器。所属学科:机械工程(一级学科);分析仪器(二级学科);色谱仪器-色谱仪器仪器和附件(三级学科)本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布百科名片液相色谱仪英文:Iquid Chromatography 利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。目录一、简介1 二、工作原理及组成1进样系统1 2输液系统1 3.分离系统三、液相色谱仪的应用1 四、液相色谱仪常见故障处理1、气泡溢出1 2、柱压高原因1 3、既无压力指示,又无液体流过1 4、压力波动大,流量不稳定1 5、出峰不佳,峰分叉1 6、峰面积重复性不佳一、简介1 二、工作原理及组成1进样系统1 2输液系统1 3.分离系统三、液相色谱仪的应用1 四、液相色谱仪常见故障处理1、气泡溢出1 2、柱压高原因1 3、既无压力指示,又无液体流过1 4、压力波动大,流量不稳定1 5、出峰不佳,峰分叉1 6、峰面积重复性不佳展开编辑本段一、简介液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器精品.、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。 对高沸点、难气化合物的混合物通过色谱柱核淋洗剂并以实现分离。应用于生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等部门。 编辑本段二、工作原理及组成系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。 1进样系统 液相色谱仪一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。 2输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l4744X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。 3.分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为1050cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为25mm,由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为510m粒度的固定相(由基质和精品.固定液构成)固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。 另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。 再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。 编辑本段三、液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。 编辑本段四、液相色谱仪常见故障处理1、气泡溢出流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中1236小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.03.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。 精品.2、柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内; (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用4050的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。 3、既无压力指示,又无液体流过(1)泵密封垫圈磨损; (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。 4、压力波动大,流量不稳定原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。 5、出峰不佳,峰分叉(1)色谱柱被污染; (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。 6、峰面积重复性不佳(1)进样阀漏液; (2)加样针不到位。 (3)液量不足. 处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除精品.杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。高效液相色谱仪科技名词定义中文名称:高效液相色谱仪英文名称:high performance liquid chromatograph定义:用高效液相色谱法对物质进行定性、定量分析的仪器。所属学科:机械工程(一级学科);分析仪器(二级学科);色谱仪器-色谱仪器仪器和附件(三级学科)本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布百科名片南京美欣达高效液相色谱仪高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(精品.固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。目录系统组成、工作原理高效液相色谱发展历史高效液相色谱的特点高效液相色谱仪的应用1 高效液相色谱仪常见故障处理故障11 故障21 故障31 故障41 故障51 故障6系统组成、工作原理高效液相色谱发展历史高效液相色谱的特点高效液相色谱仪的应用1 高效液相色谱仪常见故障处理故障11 故障21 故障31 故障41 故障51 故障6展开编辑本段系统组成、工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 编辑本段高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)也叫高压液相色谱(high pressure liquid chromatography)、高速液相色谱(high speed liquid chromatography)、高分离度液相色谱(high resolution liquid chromatography)等。是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。 使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、精品.分子量大、不同极性的有机化合物。 色谱柱的分类常见的分配住填料:碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(MOS/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、 碳四柱(Butyl/C4)、碳一柱(Methyl/C1)、阴离子交换柱(SAX)、 阳离子交换柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、 氰基柱(Cyano/CN/Nitrile) 常见的吸附柱填料:硅胶柱 编辑本段正相色谱柱与反相色谱柱的区别色谱柱的安装1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。 2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果,应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头,如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱,建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况,避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。 3、使用PEEK 材料的通用接头,只需用手拧紧不需要特定扳手,使用压力为5000psi;使用温度不得超过100。 流动相平衡1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。 2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱,以免柱性能损坏(添加5的有机溶剂冲洗色谱柱,同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡)。 3、流动相需脱气后使用,可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别,应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。 样品制备与操作1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外,如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。 2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成,会加速降低柱效。 3、色谱柱由高压匀浆法装填,能承受较高压力。为获得最佳分离效果,使用时请不要超过200kgf,而且避免压力突然上升或变化,否则会造成硅胶填料的破坏,减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外最高操作温度不要超过60。 精品.保存色谱柱1、如果流动相含有酸或无机盐,应当先用去离子水(20倍柱体积)冲洗干净。然后用用100乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封,并放在稳定的环境中存放。 2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落,避免造成色谱柱性能的降低。 色谱柱的再生: 用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子,建议按柱子的箭头方向冲洗,尽可能不反冲。冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇。 编辑本段发展方向因强调分析速度而发展出短柱,柱长310cm,填料粒径23µm。为提高分析灵敏度,与质谱(MS)联接,而发展出窄径柱、毛细管柱和内径小于0.2mm的微径柱(microbore)。细管径柱的优点是:节省流动相;灵敏度增加;样品量少;能使用长柱达到高分离度;容易控制柱温;易于实现LC-MS联用。 但由于柱体积越来越小,柱外效应的影响就更加显著,需要更小池体积的检测器(甚至采用柱上检测),更小死体积的柱接头和连接部件。配套使用的设备应具备如下性能:输液泵能精密输出1100µl/min的低流量,进样阀能准确、重复地进样微小体积的样品。且因上样量小,要求高灵敏度的检测器,电化学检测器和质谱仪在这方面具有突出优点。 编辑本段填充和性能评价色谱柱的性能除了与固定相性能有关外,还与填充技术有关。在正常条件下,填料粒度20µm时,干法填充制备柱较为合适;颗粒20µm时,湿法填充较为理想。填充方法一般有4种:高压匀浆法,多用于分析柱和小规模制备柱的填充;径向加压法,Waters专利;轴向加压法,主要用于装填大直径柱;干法。柱填充的技术性很强,大多数实验室使用已填充好的商品柱。 必须指出,高效液相色谱柱的获得,装填技术是重要环节,但根本问题还在于填料本身性能的优劣,以及配套的色谱仪系统的的结构是否合理。 无论是自己装填的还是购买的色谱柱,使用前都要对其性能进行考察,使用期间或放置一段时间后也要重新检查。柱性能指标包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度)下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性,或分离度。一般说来容量因子和选择性因子的重复性在5%或10%以内。进行柱效比较时,还要注意柱外效应是否有变化。 一份合格的色谱柱评价报告应给出柱的基本参数,如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压降等。 编辑本段使用和维护注意事项色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。 应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱精品.中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。 一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。 经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要5075ml。 下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序,作为参考:硅胶柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次冲洗,然后再以相反顺序依次冲洗,所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次冲洗,再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液,那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质,在甲醇(乙腈)冲洗时重复注射100200µl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。 阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)、甲醇、水依次冲洗。 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。 色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。 在后两种情况发生时,小心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出12mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善,但是很难恢复到新柱的水平。 柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(530mm),可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效,这是值得的。 通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料,只能在pH29范围内使用。柱子使用一段时间后,可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶,特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷,使柱效下降,这时也可补加填料使柱效恢复。 每次工作完后,最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用,应每隔45天开机冲洗15分钟。反相色谱精品.百科名片reversed phase chromatography 根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛,现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。色谱特性目录基本信息详细介绍相关内容基本信息反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚,是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种,对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析,反相液相色谱正受到越来越多的关反相色谱法是以表面非极性载体为固定相,面以比固定相极性强的溶剂为流动相的种液相色谱分离模式反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸件水溶液,添加一定量乙腈、异内醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍,聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用 详细介绍反相色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定,保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增大,对于非极性化合物通常遵循以下规则:(弱)非键合硅胶 氰基 C1(TMS) C3 C4 苯基 C8 C18(强)溶质保留值与固定相表面积成正比,普通载体(80Å)的表面积约为250m/g,而300Å孔径载体的比表面积约为60m/g。当其他条件相同时,溶质在300Å孔径(低表面积)色谱柱上的保留值大约为80Å孔径色谱柱上保留值的1/4(60:250),小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨碳柱有利于强亲水性样品洗脱样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整,溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度在反相色谱中,采用高溶剂强度、低极性的流动相时可获得较低保留值固定相的不同也可以导致选择性发生变化,氰基、苯基、C8、C18等柱的选择性有很大差异,一般应优先考虑C8、C18柱,然后是氰基柱,再次是苯基柱 反相条件下,大多数蛋白质由于低PH、有机溶剂存在、温度高于室温和疏水键合相等综合原因发生变性,这些化合物可能以两种或两种以上独立或动态平衡的形式存在,它们通过色谱柱的保留速度不同,导致谱峰展宽、变形、甚至出现单一蛋白有多个峰的现象,部分变性也易使蛋白在柱上聚集,造成被洗脱蛋白的回收率低和鬼峰反相色谱固定相表面烷基链长度对蛋白质的反相保留和蛋白质的活性回收有很大差异,烷基链越长(C8、C22、C30),固定相疏水性越强,为使蛋白质等生物分子洗脱,流动相合机溶剂的含量较高,疏水性过强,会导致生物分子的不可逆吸附和生物活性损失,因此短链烷基固定相(C4、C8、苯基等)在生物大分子分离中表现出优势。对多数小蛋白,在低pH乙腈/水梯度下,用C3C8色谱柱分离,使蛋白完全展开并避免聚集或沉淀,能够得到理想的分离结果。 精品.相关内容在低pH流动相条件下进行分离,如(0.1% TFA适合于大多数样品,1025mmol/L磷酸对疏水性强的蛋白质更有利;以乙腈作有机溶剂,丙醇可能对疏水性强的蛋白质有利;柱温5080;将样品溶于6mol/L尿素或盐酸胍中(只可在室温)进行预处理;用疏水性更强的键合相(长链与短链烷基键合相);加两性表面活件剂分离大分子和疏水性强的蛋白质等实验条件有利于蛋白质样品完全变性或尽可能降低变性。如有侵权请联系告知删除,感谢你们的配合!精品
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