白血病的免疫分型

1 白 血 病 的 免 疫 分 型 2 流 式 细 胞 术 的 基 本 概 念=流 式 细 胞 术 （ Flow Cytometry, 简 称 FCM） 是 一 种可 以 快 速 、 准 确 、 客 观 ， 并 且 同 时 检 测 单 个 微 粒（ 通 常 是 细 胞 ） 的 多 项 特 性 的 技 术 ， 同 时 可 以 对特 定 群 体 加 以 分 选=研 究 对 象 为 生 物 颗 粒 ， 如 各 种 细 胞 、 微 生 物 及 人工 合 成 微 球 等=研 究 的 微 粒 特 性 包 括 多 种 物 理 及 生 物 学 特 征 ， 并加 以 定 量 3 散 射 光 信 号 和 荧 光 信 号=前 向 角 散 射 光 （ FSC, Forward Scatter）入 射 激 光 的 前 向 散 射 光 信 号细 胞 相 对 大 小 及 其 表 面 积=侧 向 角 散 射 光 （ SSC, Side Scatter）入 射 激 光 90角 的 散 射 光 信 号细 胞 粒 度 及 细 胞 内 相 对 复 杂 性=荧 光 素 与 特 异 抗 体 结 合 ， 荧 光 抗 体 与 细 胞抗 原 结 合 越 多 ， 产 生 的 荧 光 信 号 越 强 。 4 CD45/SS示 意 图 5 抗 原 分 布 表 面 ,胞 浆 ,核 内 是 共 同 检 测 还 是 分 别 检 测 ? CD3, CD4, CD8, tetramer cytokines DNACD3,4,8, tetramer+Cytokines CD3,4,8, tetramer+ DNA Cytokines+DNA CD3,4,8, tetramer+Cytokines+DNA 6 设 门 08-03307 7 设 门全 部 细 胞 门 内 细 胞 08-03307 8 9 血 液 肿 瘤 分 类 进 程 10 白 血 病 免 疫 分 型 的 理 论 基 础 白 血 病 /淋 巴 瘤 免 疫 分 型 采 用 的 抗 原 标志 是 表 达 于 正 常 造 血 细 胞 不 同 分 化 发 育 阶段 的 分 化 抗 原 。 虽 然 是 恶 性 肿 瘤 细 胞 ， 但仍 能 表 达 正 常 血 细 胞 所 具 有 的 抗 原 ， 因 而仍 可 依 据 其 抗 原 的 表 达 谱 对 白 血 病 /淋 巴 瘤进 行 免 疫 分 型 。 为 了 正 确 分 析 白 血 病 /淋 巴瘤 细 胞 ， 必 须 对 正 常 造 血 细 胞 分 化 抗 原 的表 达 模 式 有 充 分 的 了 解 。 只 有 熟 悉 正 常 细胞 的 抗 原 表 达 模 式 ， 才 能 辨 认 白 血 病 /淋 巴瘤 细 胞 的 存 在 。 11 细 胞 类 型 鉴 定 Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280 12 CD45/SS示 意 图正 常 骨 髓 细 胞 血 液 肿 瘤 细 胞老 化 粒 细 胞 、 噬 酸 细 胞 早 幼 成 熟 粒 细 胞 M3、 CML单 核 细 胞 M4、 M5 LGL淋 巴 细 胞 CLL、 ALL、 CLD正 常 前 体 细 胞 M0、 M1、 M2、 嗜 碱 性 粒 细 胞 M4、 M5、 ALL成 熟 红 细 胞 、 血 小 板 M6、 M7、 MM细 胞 碎 片 Pre-B-ALL 非 血 液 来 源 细 胞 13 B淋 巴 细 胞 分 化 与 抗 原 表 达 关 系 图 Wood and Borowitz (2006) Henry s Laboratory Medicine 14 T淋 巴 细 胞 分 化 与 抗 原 表 达 关 系 图 Wood and Borowitz (2006) Henry s Laboratory Medicine 15 粒 细 胞 分 化 与 抗 原 表 达 关 系 图 Wood and Borowitz (2006) Henry s Laboratory Medicine 16 单 核 细 胞 分 化 与 抗 原 表 达 关 系 图 Wood and Borowitz (2006) Henry s Laboratory Medicine 17 非 肿 瘤 T淋 巴细 胞 表 型 18 非 肿 瘤 B淋 巴细 胞 表 型 19 非 肿 瘤 粒 细 胞 、单 核 细 胞 表 型 20 非 肿 瘤 粒 细 胞 、单 核 细 胞 表 型 21 白 血 病 免 疫 分 型 根 据 白 血 病 细 胞 表 达 的 系 列 相 关 抗 原 ，确 定 其 系 列 来 源 。 如 ： 淋 系 T/B、 粒 单 系 、红 系 、 巨 核 系 等 。 根 据 白 血 病 细 胞 表 达 的 系 列 分 化 其 相 关抗 原 进 一 步 分 型 。 如 ： 早 前 B， 前 B， 普通 B 22 初 治 急 白 分 型Acute Leukemia Blasts Present 20%Myeloid LineageCD13+ and/orCD117+ and/orCD33+ CD7+ and/orCD2+ CD19+T-Lineage B-LineageMyeloid, no or minimal maturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-, CD14- PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-, CD14- CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic & Monocytic 红 系 和 巨 核 系 的 鉴 定 需 要 另 外 增加 二 线 抗 体 。如 :CD71、 GPA、 CD41、 CD61 23 24 AML-M4 25 26 初 治 急 淋 分 型Acute Leukemia Blasts Present 20%CD7+ and/or CD2+ CD19+T-Lineage B-Lineage CommonThymocyte MatureThymocyteCD2+CD5+Dual CD4+/CD8+sCD3- CD2+CD5+CD4+ or CD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8- TdT+CD10-clg-sig- Pre-BCD10+cig+TdT+sig- Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyte Early B-Precursor 27 B-ALL 28 29 白 血 病 免 疫 分 型 的 价 值n确 定 ALL的 细 胞 类 型 （ B细 胞 或 T细 胞 ） 和 ALL的 分 化 阶 段 。n鉴 定 AML的 特 征 。n对 形 态 学 上 未 分 化 的 急 性 白 血 病 有 助 于鉴 定 细 胞 类 型 。n诊 断 一 些 少 见 类 型 的 白 血 病 。 如 ： M6、M7、 M0等 。 30 多 发 性 骨 髓 瘤 （ MM） 多 发 性 骨 髓 瘤 是 浆 细 胞 异 常 增 生 性 疾 病 。正 常 浆 细 胞 为 CD38+/CD45dim/-， 使 用 CD38/CD45双 标 记 检 测 外 周 血 和 骨 髓 标 本 ， 可 以准 确 划 定 浆 细 胞 群 。 通 常 使 用 CD38和 CD45， 结合 轻 链 检 查 ， 对 多 发 性 骨 髓 瘤 细 胞 进 行 分 析 。另 外 ， 正 常 浆 细 胞 的 表 面 标 记 为 CD19+/CD56-，而 多 发 性 骨 髓 瘤 细 胞 通 常 为 CD19-/CD56+。CD138目 前 认 为 是 浆 细 胞 最 特 异 的 指 标 。 这 样 ，使 用 流 式 细 胞 仪 对 外 周 血 或 骨 髓 标 本 进 行 多 参数 分 析 ， 并 计 算 异 常 浆 细 胞 含 量 ， 对 于 多 发 性骨 髓 瘤 的 诊 断 和 治 疗 评 估 具 有 重 要 意 义 。 31 MM 32 流 式 免 疫 表 型 诊 断 血 液 肿 瘤 的 劣 势1、 纤 维 化 、 硬 化 的 骨 髓 可 能 没 有 足 够 的 细 胞 分 析 。2、 细 胞 太 多 聚 集 或 成 团 也 可 能 没 有 足 够 的 分 析 细 胞 。3、 硬 化 的 组 织 也 很 难 得 到 足 够 的 分 析 细 胞 。4、 组 织 结 构 关 系 、 形 态 关 系 丢 失 。5、 比 例 太 低 的 单 克 隆 B细 胞 很 难 检 测 到 。 33 流 式 免 疫 表 型 诊 断 血 液 肿 瘤 的 劣 势6、 没 有 异 常 免 疫 表 型 的 T细 胞 淋 巴 瘤 也 可 能 很 难 检 测 。7、 异 常 的 T细 胞 免 疫 表 型 不 一 定 提 示 T细 胞 肿 瘤 ， 也 可 能是 感 染 引 起 的 单 核 细 胞 增 多 症 、 反 应 性 皮 肤 病 、 炎 症 性疾 病 。8、 取 材 不 好 或 样 品 保 存 不 当 ， 可 能 导 致 假 阴 性 的 结 果 。9、 HL的 肿 瘤 细 胞 水 平 低 ， 所 以 免 疫 表 型 检 测 或 诊 断 HL不可 靠 。10、 治 疗 或 复 发 可 能 引 起 肿 瘤 细 胞 表 面 抗 原 改 变 。 34 谢 谢 !