生化制药基本技术生化制药技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第二章生物制药基本技术,生物制药是把生物体内的具有生物活性的基本物质,保持原来的结构和功能,又能在含有多种物质的液相,或固相中较高纯度的分离出来。它是一项严格、细致、,复杂的工艺过程,涉及物理、化学、生物学、工程等,方面的知识和操作技术,问题:1、标准化方法?2、如何发现或研制新药?,对于一个新研制的生物药物,从查阅文献开始,到,探索实验、条件考察(记录客观)、总结制定工艺规,程、制定分析鉴定方法,再进行中试放大,全面考察,工艺是否成熟,是否稳定等。,第二章生物制药基本技术,1,基本制造方法,1、提取法(Extraction,2、发酵法(Zymotechnics),3、化学合成(Chemical synthesize),组织培养法(Tissue culture),5、现代生物技术(Modern biotechnics):,Gene engineering,Enzyme engineering,Cell engineering,protein Engineering,Fermentation engineering,基本制造方法,2,生化制药的六个阶段,1.原料的选择和预处理,2固液分离,3.提取:从原料中经溶剂分离有效成分,制成粗品的工,艺过程,4.精制纯化:粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析,透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程。,5,成品加工/浓缩、干燥及保存、制剂:原料药(精制品),经精细加工制成片剂、针剂、冻干剂、粉剂等供临床应用的,各种剂型,生化制药的六个阶段,3,、原料选择和预处理,(Raw Material Selecting and Pretreatment),原料选择的基本准则:,1、在大量的信息资料和实践经验的基础上,选择目标原料。,2、选择有效成分含量高的新鲜材料;,3、来源丰富易得,4、制造工艺简单易行;,5、成本比较低;,6、原料的采集不破坏生态环境,选择对环境友好的原材料资,源,防止生物入侵。,、原料选择和预处理,4,预处理方法,1、动物组织先要剔除结缔组织、脂肪组织等非活性部分,植物种子去壳除脂;微生物要进行菌体与发酵液分离等,基本操作。便于贮存和运输。,2、冷冻法预处理:有些材料要冷冻保存或低温保存,以便,抑制微生物和酶的作用。,3、有机溶剂除去部分水分:用丙酮或乙醇进行脱水和脱脂,有利于贮存。,预处理方法,5,原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或,绞碎成适度的粒度,或将细胞破碎,使胞内活,性物质充分释放到溶液中,有利于提取或吸附,动物脏器组织:常用绞肉机机械法粉碎;,植物肉质组织:常用磨碎法;,微生物:常用自溶、冷热交替、加砂研磨、,超声、加压等处理方法,原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或,6,1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎,机、绞肉机、击碎机、刨片机。,动物组织多在冰冻状态绞碎、溶浆。,2物理法,A、反复冻融法:把待破碎的样品冷至-20-15,使,之凝固,然后缓慢的溶解,如此反复操作,大部分动物性,细胞及细胞内的颗粒可以破碎,B、冷热交替法:将材料投入沸水中,在90左右维持数,分钟,立即置于冰浴中,使之迅速冷却,绝大部分细胞被破,坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸,1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎,7,C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与,样品浓度、使用频率有关。用大肠杆菌制备各种酶,时,常用50100mg/L菌体浓度,在110Kc频率下,处理1015min。操作时注意避免溶液中气泡的存在,加压破碎法:加气压或水压,达0593432MPa,(210-350 kgf/cm2)的压力时,可使90%以上细胞被,压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。,C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与,8,3.生化及化学法,A.自溶法:将新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温,度下,利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏,使细胞内含,物释放出来的方法。自溶的温度,动物材料在0-4,微生,物在室温下。自溶时,需加少量的防腐剂,甲苯、氯仿,以,防止外界细菌的污染。,*由于自溶时间较长,不易控制,故制造具有活性的核酸,和蛋白质时比较少用。,3.生化及化学法,9,B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶,多用于微生物,对蜗牛酶、纤维酶及植物细胞也适用。如,用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时,采用pH8.0的,0.1 mol/L Tris-0.01mo/L EDTA制成2亿/m的细胞悬液,然后加入100g-1mg的溶菌酶,在37C保温10min,细菌胞壁即被破坏。,C.表面活性剂处理法:表面活性剂的分子中,兼有亲脂,性和亲水性基团,能降低水的界面张力,具有乳化、分散、,增溶作用。常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸,钠。,B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶,10,生化制药基本技术生化制药技术课件,11,生化制药基本技术生化制药技术课件,12,生化制药基本技术生化制药技术课件,13,生化制药基本技术生化制药技术课件,14,生化制药基本技术生化制药技术课件,15,生化制药基本技术生化制药技术课件,16,生化制药基本技术生化制药技术课件,17,生化制药基本技术生化制药技术课件,18,生化制药基本技术生化制药技术课件,19,生化制药基本技术生化制药技术课件,20,生化制药基本技术生化制药技术课件,21,生化制药基本技术生化制药技术课件,22,生化制药基本技术生化制药技术课件,23,生化制药基本技术生化制药技术课件,24,生化制药基本技术生化制药技术课件,25,生化制药基本技术生化制药技术课件,26,生化制药基本技术生化制药技术课件,27,生化制药基本技术生化制药技术课件,28,生化制药基本技术生化制药技术课件,29,生化制药基本技术生化制药技术课件,30,生化制药基本技术生化制药技术课件,31,生化制药基本技术生化制药技术课件,32,生化制药基本技术生化制药技术课件,33,生化制药基本技术生化制药技术课件,34,生化制药基本技术生化制药技术课件,35,生化制药基本技术生化制药技术课件,36,生化制药基本技术生化制药技术课件,37,生化制药基本技术生化制药技术课件,38,生化制药基本技术生化制药技术课件,39,生化制药基本技术生化制药技术课件,40,生化制药基本技术生化制药技术课件,41,生化制药基本技术生化制药技术课件,42,