生物化学实验13 醋酸纤维素薄膜电泳电子课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生物化学实验技术,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生物化学实验13 醋酸纤维素薄膜电泳电子课件,醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白,实验类型：综合性,教学时数：,6,一、实验目的,1.,学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,2.,了解电泳技术的原理。,二、实验,原理,血清中含有数种蛋白质，它们的等电点大都在pH6以下，因此在pH6的缓冲液都以阴离子状态存在，通电后都向阳极移动，由于它们所带的电荷数目和分子量不同，在电泳场中泳动的速度不同，故可利用电泳法将它们分离。,点样线,阴极,阳极,2,1,清蛋白,醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维制成，它具有均一的泡沫状结构，厚度仅120m，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用量少，分离清晰，无吸附作用，快速简便等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白及酶的分离和免疫电泳等方面。,三、仪器与试剂,1,、材料：新鲜血清（无溶血现象）,2,、仪器：醋酸纤维薄膜（,28cm,）、常压电泳仪、毛细管、培养皿、玻璃板、竹摄、粗滤纸,3,、试剂：巴比妥缓冲液（,pH8.6,，离子强度,0.07M,），氨基黑染色液，漂洗液，透明液。,四、实验内容,1,、浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜一条（识别出光泽面与无光泽面，并在角上用笔做上记号），放在缓冲液中浸泡,20,分钟,。,2,、点样：把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。用毛细管取血清,2,3,L,，,均匀涂在点样器上，然后将点样器在膜条一端1.,5,cm,处,轻轻地水平接触并随即提起，这样血清样品即呈条状溶于纤维薄膜上,。,3,、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等,高。将,膜条平贴于泳槽支架的滤纸桥上，点样端靠近,负极。盖,严电泳室，通电进行电泳，调电压至,160V,，电流强度,0.40.7mA/cm,，电泳时间约为,1,小时。,4,、染色：电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡,10,分钟。,5,、漂洗：将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次（约,34,次,），至,无蛋白区底色脱净为止，再浸入蒸馏水中。,6,、透明和支持：将上述漂净的薄膜用滤纸吸干，待完全干燥后，浸入透明液中约,23,分钟，后取出平贴于洁净玻璃板上，干燥后即得背景透明的电泳图谱，可用光密度计直接测定各蛋白斑点，此图谱可长期保存。,