中国药品检验标准操作流程

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,中国药品检验标准操作规程,2010,年版,高效液相色谱法,1,1,、对仪器的一般要求,所用仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成 ，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。,1.1,色谱柱,最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 。反相色谱系统使用非极性添充剂 ，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱使用离子交换填充剂；分子排阻色谱使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。,填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分子量小于,2000,的化合物应选择孔径在,15nm,（,1nm=10,）以下的填料，分析分子量大于,2000,的化合物则应选择孔径在,30nm,以上的填料。,除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在,3,10m,之间，粒径更小（约,2m,）的填充剂常用于填装微径柱（内径约,2mm,）。,使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定的结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。,以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过,40,，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过,60,。,流动相的,PH,值应控制在,2,8,之间。当,pH,大于,8,时，可使载体硅胶溶解；当,pH,小于,2,时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用,PH,大于,8,的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机,-,无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等；当需使用,PH,小于,2,的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、有机,-,无机杂化填充剂等。,1.2,检测器,最常用的检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。,.,紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散色检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物的吸收光谱，故可用于待测物的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。,紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测溶液的浓度通常呈指数关系，故进行计算时，一般需经对数转换。,不同的,检,检测器,，,，对流,动,动相的,要,要求不,同,同。如,采,采用紫,外,外检测,器,器，所,用,用流动,相,相应符,合,合紫外,可见分,光,光光度,法,法（,中国药,典,典,2010,年版二,部,部附录, A,）项下,对,对溶剂,的,的要求,；,；采用,低,低波长,检,检测时,，,，还应,考,考虑有,机,机相中,有,有机溶,剂,剂的截,止,止使用,波,波长，,并,并选用,色,色谱级,有,有机溶,剂,剂。蒸,发,发光散,射,射检测,器,器和质,谱,谱检测,器,器通常,不,不允许,使,使用含,不,不挥发,盐,盐组分,的,的流动,相,相。,1.3,流动相,反相色,谱,谱系统,的,的流动,相,相首选,甲,甲醇,-,水系统,（,（采用,紫,紫外末,端,端波长,检,检测时,，,，首选,乙,乙腈,-,水系统,）,），如,经,经试用,不,不合适,时,时，再,选,选用其,他,他溶剂,系,系统。,应,应尽可,能,能少用,含,含有缓,冲,冲液的,流,流动相,，,，必须,使,使用时,，,，应尽,可,可能选,用,用含较,低,低浓度,缓,缓冲液,的,的流动,相,相。由,于,于,C18,链在水,相,相环境,中,中不易,保,保持伸,展,展状态,，,，故对,于,于十八,烷,烷基硅,烷,烷键合,硅,硅胶为,固,固定相,的,的反相,色,色谱系,统,统，流,动,动相中,有,有机溶,剂,剂的比,例,例通常,应,应不低,于,于,5%,，否则,C18,链的随,机,机卷曲,将,将导致,组,组分保,留,留值变,化,化，造,成,成色谱,系,系统不,稳,稳定。,各品种,项,项下规,定,定的条,件,件除固,定,定相种,类,类、流,动,动相组,成,成、检,测,测器类,型,型不得,改,改变外,，,，其余,如,如色谱,柱,柱内径,、,、长度,、,、载体,粒,粒度、,流,流动相,流,流速、,混,混合流,动,动相各,组,组成的,比,比例、,柱,柱温、,进,进样量,、,、检测,器,器的灵,敏,敏度等,，,，均可,适,适当改,变,变，以,适,适应供,试,试品并,达,达到系,统,统适用,性,性试验,的,的要求,。,。其中,，,，调整,流,流动相,组,组分比,例,例时，,以,以组分,比,比例较,低,低者（,小,小于或,等,等于,50%,）相对,于,于自身,的,的改变,量,量不超,过,过,30%,且相对,于,于总量,的,的改变,量,量不超,过,过,10%,为限，,如,如,30%,相对改,变,变量的,数,数值超,过,过总量,的,的,10%,时，则,改,改变量,以,以总量,的,的,10%,为限。,对于必,须,须使用,特,特定牌,号,号的填,充,充剂方,能,能满足,分,分离要,求,求的品,种,种，可,在,在该品,种,种项下,注,注明。,2,、系统,适,适用性,试,试验,色谱系,统,统的适,用,用性试,验,验通常,包,包括理,论,论板数,、,、分离,度,度、重,复,复性和,拖,拖尾因,子,子等四,个,个参数,。,。其中,，,，分离,度,度和重,复,复性尤,为,为重要,。,。,按各品,种,种项下,要,要求对,色,色谱系,统,统进行,适,适用性,试,试验，,即,即用规,定,定的对,照,照品溶,液,液或系,统,统适用,性,性试验,溶,溶液在,规,规定的,色,色谱系,统,统进行,试,试验，,必,必要时,，,，可对,色,色谱系,统,统进行,调,调整，,以,以符合,要,要求。,2.1,色谱柱,的,的理论,板,板数,(n),。,用于评,价,价色谱,柱,柱的分,离,离效能,。,。由于,不,不同物,质,质在同,一,一色谱,柱,柱上的,色,色谱行,为,为不同,，,，采用,理,理论板,数,数作为,衡,衡量柱,效,效能的,指,指标时,，,，应指,明,明测定,物,物质，,一,一般为,待,待测组,分,分或内,标,标物质,的,的理论,板,板数。,在规定,的,的条件,下,下，注,入,入供试,品,品溶液,或,或各品,种,种项下,规,规定的,内,内标物,质,质溶液,，,，记录,色,色谱图,，,，量出,供,供试品,主,主成分,峰,峰或内,标,标物质,峰,峰的保,留,留时间,t,R,（以分,钟,钟或长,度,度计，,下,下同，,但,但应取,相,相同单,位,位）和,峰,峰宽（,W,）半峰,高,高宽（,W,h/2,），按,n,16(t,R,/W),2,或,n=5.54(t,R,/W,h/2,),2,计算色,谱,谱柱的,理,理论板,数,数。,2.2,分离度,（,（,R,）,用于评,价,价待测,组,组分与,相,相邻共,存,存物或,难,难分离,物,物质之,间,间的分,离,离程度,，,，是衡,量,量色谱,系,系统效,能,能的关,键,键指标,。,。可以,通,通过测,定,定待测,物,物质与,已,已知杂,质,质的分,离,离度，,也,也可以,通,通过测,定,定待测,组,组分与,某,某一添,加,加的指,标,标性成,分,分（内,标,标物质,或,或其他,难,难分离,物,物质）,的,的分离,度,度，或,将,将供试,品,品或对,照,照品用,适,适当的,方,方法降,解,解，通,过,过测定,待,待测组,分,分与某,一,一降解,产,产物的,分,分离度,，,，对色,谱,谱系统,进,进行评,价,价与控,制,制。,无论是,定,定性鉴,别,别还是,定,定量分,析,析，均,要,要求待,测,测峰与,其,其他峰,、,、内标,峰,峰或特,定,定的杂,质,质对照,峰,峰之间,有,有较好,的,的分离,度,度。除,另,另有规,定,定外，,待,待测组,分,分与相,邻,邻共存,物,物之间,的,的分离,度,度应大,于,于,1.5,。,2.3,重复性,用于评,价,价连续,进,进样后,，,，色谱,系,系统响,应,应值的,重,重复性,能,能。采,用,用外标,法,法时，,通,通常取,各,各品种,项,项下的,对,对照品,溶,溶液，,连,连续进,样,样,5,次，除,另,另有规,定,定外，,其,其峰面,积,积测量,值,值的相,对,对标准,偏,偏差应,不,不大于,2.0,；采,用,用内标,法,法时，,通,通常配,制,制相当,于,于,80,、,100,和,120,的对,照,照品溶,液,液，加,入,入规定,量,量的内,标,标溶液,，,，配成,3,种不同,浓,浓度的,溶,溶液，,分,分别至,少,少进样,2,次，计,算,算平均,校,校正因,子,子，其,相,相对标,准,准偏差,也,也应不,大,大于,2.0,。,2.4,拖尾因,子,子（,T,）,用于评,价,价色谱,峰,峰的对,称,称性。,为,为保证,分,分离效,果,果和测,量,量精度,，,，应检,查,查待测,峰,峰的拖,尾,尾因子,是,是否符,合,合各品,种,种项下,的,的规定,。,。拖尾,因,因子计,算,算公式,为,为：,T,W,0.05h,/2d,1,式中, W,0.05h,为,5%,峰高处,的,的峰宽,；,；,d,1,为,5%,峰高出,峰,峰顶点,至,至峰前,沿,沿之间,的,的距离,。,。,除另有,规,规定外,，,，峰高,法,法定量,时,时,T,应在,0.95,1.05,之间。,峰面积,法,法测定,时,时，若,拖,拖尾严,重,重，将,影,影响峰,面,面积的,准,准确测,量,量。必,要,要时，,应,应在各,品,品种项,下,下对拖,尾,尾因子,做,做出规,定,定。,3,、测定,法,法,3.1,内标法,按各品,种,种项下,的,的规定,，,，精密,称,称（量,）,）取对,照,照品和,内,内标物,质,质，分,别,别配成,溶,溶液，,精,精密量,取,取各适,量,量，混,合,合配成,校,校正因,子,子测定,用,用的对,照,照溶液,。,。取一,定,定量注,入,入仪器,，,，记录,色,色谱图,。,。测量,对,对照品,和,和内标,物,物质的,峰,峰面积,或,或峰高,，,，按下,式,式计算,校,校正因,子,子,校正因,子,子（,）（,A,S,/C,S,）,/(A,R,/C,R,),式中,A,S,为内标,物,物质的,峰,峰面积,或,或峰高,；,；,A,R,为对照,品,品的峰,面,面积或,峰,峰高；,C,S,为内标,物,物质的,浓,浓度；,C,R,为对照,品,品的浓,度,度。,再取各,品,品种项,下,下含有,内,内标物,质,质的供,试,试品溶,液,液，注,入,入仪器,，,，记录,色,色谱图,，,，测量,供,供试品,中,中待测,成,成分和,内,内标物,质,质的峰,面,面积或,峰,峰高，,按,按下式,计,计算含,量,量：,含量（,C,X,）,A,X,/(A,S,C,S,),式中,Ax,为供试,品,品峰面,积,积或峰,高,高；,C,X,为供试,品,品的,浓,浓度；,A,S,为内标,物,物质的,峰,峰面积,或,或峰高,；,；,C,S,为内标,物,物质的,浓,浓度；,为较正,因,因子。,采用内,标,标法，,可,可避免,因,因样品,前,前处理,及,及进样,体,体积误,差,差对测,定,定结果,的,的影响,。,。,3.2,外标法,按各品,种,种项下,的,的规定,，,，精密,称,称,(,量,),取对照,品,品和供,试,试品，,配,配制成,溶,溶液，,分,分别精,密,密取一,定,定量，,注,注入仪,器,器，记,录,录色谱,图,图，测,量,量对照,品,品溶液,和,和供试,品,品溶液,中,中待测,成,成分的,峰,峰面积,（,（或峰,高,高），,按,按下式,计,计算含,量,量：,含量（,C,X,）,C,R,(A,X,/A,R,),式中各,符,符号意,义,义同上,。,。,由于微,量,量注射,器,器不易,精,精确控,制,制进样,量,量，当,采,采用外,标,标法测,定,定供试,品,品中某,成,成分或,杂,杂质含,量,量时，,以,以定量,环,环或自,动,动进样,器,器进样,为,为好。,3.3,加校正,因,因子的,主,主成分,自,自身对,照,照法,测定杂,质,质含量,时,时，可,采,采用加,校,校正因,子,子的主,成,成分自,身,身对照,法,法。在,建,建立方,法,法时，,按,按各品,种,种项下,的,的规定,，,，精密,称,称（量,）,）取杂,质,质对照,品,品和待,测,测成分,对,对照品,各,各适量,，,，配制,测,测定杂,质,质校正,因,因子的,溶,溶液，,进,进样，,记,记录色,谱,谱图，,按,按上述,3.1,法计算,杂,杂质的,校,校正因,子,子。此,校,校正因,子,子可直,接,接载入,各,各品种,项,项下，,用,用于校,正,正杂质,的,的实测,峰,峰面积,。,。这些,需,需作较,正,正计算,的,的杂质,，,，通常,以,以主成,分,分为参,照,照，采,用,用相对,保,保留时,间,间定位,，,，其数,值,值一并,载,载入各,品,品种项,下,下。,测定杂,质,质含量,时,时，按,各,各品种,项,项下规,定,定的杂,质,质限度,，,，将供,试,试品溶,液,液稀释,成,成与杂,质,质限度,相,相当的,溶,溶液作,为,为对照,溶,溶液，,进,进样，,调,调节仪,器,器灵敏,度,度（以,噪,噪音水,平,平可接,受,受为限,）,）或进,样,样量（,以,以柱子,不,不过载,为,为限）,，,，使对,照,照溶液,的,的主成,分,分色谱,峰,峰高约,达,达满量,程,程的,10,25,或其,峰,峰面积,能,能准确,积,积分,【,通常含,量,量低于,0.5%,的杂质,，,，峰面,积,积的相,对,对标准,偏,偏差（,RSD,）应小,于,于,10%,；含量,在,在,0.5%,2%,的杂质,，,，峰面,积,积的,RSD,应小于,5%,；含量,大,大于,2%,的杂质,，,，峰面,积,积的,RSD,应小于,2%】,。然后,，,，取供,试,试品溶,液,液和对,照,照品溶,液,液适量,，,，分别,进,进样，,供,供试品,溶,溶液的,记,记录时,间,间，除,另,另有规,定,定外，,应,应为主,成,成分色,谱,谱峰保,留,留时间,的,的,2,倍，测,量,量供试,品,品溶液,色,色谱图,上,上各杂,质,质的峰,面,面积，,分,分别乘,以,以相应,的,的校正,因,因子后,与,与对照,溶,溶液主,成,成分的,峰,峰面积,比,比较，,依,依法计,算,算各杂,质,质含量,。,。,3.4,不加校,正,正因子,的,的主成,分,分自身,对,对照法,测定杂,质,质含量,时,时，若,没,没有杂,质,质对照,品,品，也,可,可采用,不,不加校,正,正因子,的,的主成,分,分自身,对,对照法,。,。同上,述,述,3.3,法配制,对,对照溶,液,液并调,节,节检测,灵,灵敏度,后,后，取,供,供试品,溶,溶液和,对,对照溶,液,液适量,，,，分别,进,进样，,前,前者的,记,记录时,间,间除另,有,有规定,外,外，应,为,为主成,分,分保留,时,时间的,2,倍，测,量,量供试,品,品溶液,色,色谱图,上,上各杂,质,质的峰,面,面积并,与,与对照,溶,溶液主,成,成分的,峰,峰面积,比,比较，,计,计算杂,质,质含量,。,。,若供试,品,品所含,的,的部分,杂,杂质未,与,与溶剂,峰,峰完全,分,分离，,则,则按规,定,定先记,录,录供试,品,品溶液,的,的色谱,图,图,，再记,录,录等体,积,积纯溶,剂,剂的色,谱,谱图,。色谱,图,图,上杂质,峰,峰的总,面,面积（,包,包括溶,剂,剂峰）,，,，减去,色,色谱图,上的溶,剂,剂峰面,积,积，即,为,为总杂,质,质峰的,校,校正面,积,积。然,后,后依法,计,计算。,3.5,面积归,一,一法,按各品,种,种项下,的,的规定,，,，配制,供,供试品,溶,溶液，,取,取一定,量,量注入,仪,仪器，,记,记录色,谱,谱图。,测,测量各,峰,峰的面,积,积和色,谱,谱图上,除,除溶剂,峰,峰以外,的,的总色,谱,谱峰面,积,积，计,算,算各峰,面,面积占,总,总峰面,积,积的百,分,分率。,用于杂质,检,检查时，,由,由于峰面,积,积归一化,法,法测定误,差,差大，因,此,此，通常,只,只用于粗,略,略考察供,试,试品中的,杂,杂质含量,。,。除另有,规,规定外，,一,一般不宜,用,用于微量,杂,杂质的检,查,查。,4,、注意事,项,项,4.1,流动相的,制,制备与保,存,存,用高纯度,的,的试剂配,制,制流动相,，,，必要时,照,照紫外,-,可见分光,光,光度法进,行,行溶剂检,查,查，应符,合,合要求；,水,水应为新,鲜,鲜制备的,高,高纯水，,可,可用超纯,水,水器制得,或,或用重蒸,水,水。凡规,定,定,pH,值的流动,相,相，应使,用,用精密,pH,计进行调,节,节，除另,有,有规定外,，,，偏差一,般,般不超过,0.2pH,单位。配,制,制好的流,动,动相应通,过,过适宜的,0.45,m,（或,0.22,m),滤膜滤过,，,，以除去,杂,杂质微粒,。,。流动相,用,用前必须,脱,脱气，否,则,则容易在,系,系统内逸,出,出气泡，,影,影响泵的,工,工作、色,谱,谱柱的分,离,离效率、,检,检测器的,灵,灵敏度以,及,及基线稳,定,定性等。,流动相一,般,般贮存于,玻,玻璃、聚,四,四氟乙烯,等,等容器内,，,，不能贮,存,存在塑料,容,容器中。,因,因许多有,机,机溶剂如,甲,甲醇、乙,腈,腈等可浸,出,出塑料表,面,面的增塑,剂,剂，导致,流,流动相受,污,污染。贮,存,存溶剂一,定,定要盖严,，,，以防止,溶,溶剂挥发,引,引起组成,变,变化，也,防,防止氧和,二,二氧化碳,溶,溶入流动,相,相引起,pH,值变化，,对,对分离或,分,分析结果,带,带来误差,。,。磷酸盐,、,、醋酸盐,缓,缓冲液容,易,易发霉变,质,质，应尽,量,量新鲜配,制,制使用。,如,如确需贮,存,存，可在,冰,冰箱内冷,藏,藏，并在,3,天内使用,，,，用前应,重,重新滤过,。,。,4.2,溶剂的配,制,制与保存,除另有规,定,定外，采,用,用规定溶,剂,剂配制对,照,照品溶液,和,和供试品,溶,溶液，定,量,量测定时,，,，对照品,溶,溶液和供,试,试品溶液,均,均应分别,配,配制两份,。,。供试品,溶,溶液在注,入,入液相色,谱,谱仪前，,一,一般应经,适,适宜的,0.45,m,（或,0.22,m),滤膜滤过,，,，以减少,对,对色谱系,统,统产生污,染,染或影响,色,色谱分离,。,。应根据,试,试验要求,和,和供试品,的,的稳定性,，,，设置待,测,测溶液的,贮,贮存条件,（,（如温度,、,、遮光等,）,）。,4.3,色谱柱的,使,使用与保,存,存,根据实验,要,要求和流,动,动相的,pH,值范围，,参,参照色谱,柱,柱说明书,，,，选用适,宜,宜的色谱,柱,柱。安装,色,色谱柱时,应,应使流动,相,相流路的,方,方向与色,谱,谱柱标签,上,上箭头所,示,示方向一,致,致。除另,有,有规定外,，,，不宜反,向,向使用，,否,否则会导,致,致色谱柱,柱,柱效明显,降,降低，无,法,法恢复。,进,进样前，,色,色谱柱应,用,用流动相,充,充分冲洗,平,平衡。经,色,色谱系统,适,适用性试,验,验测试，,应,应符合要,求,求。,色谱柱在,使,使用过程,中,中，应避,免,免压力和,温,温度的急,剧,剧变化及,任,任何机械,震,震动。温,度,度的突然,变,变化或者,机,机械震动,都,都会影响,柱,柱内定相,的,的填充状,况,况；柱压,的,的突然升,高,高或降低,也,也会冲动,柱,柱内填料,，,，因此在,调,调节流动,相,相流速时,应,应该缓慢,进,进行。,试验结束,后,后，可按,色,色谱柱的,使,使用说明,书,书，对色,谱,谱柱进行,冲,冲洗和保,存,存。,一般来讲,，,，对于反,相,相色谱柱,，,，如使用,缓,缓冲液或,含,含盐溶液,作,作为流动,相,相，在试,验,验结束后,，,，应用,10,倍柱体积,（,（如,150mm,柱长，约,15ml,）的低浓,度,度的甲醇,/,乙腈,-,水溶液（,10%,20%,）冲洗，,使,使色谱柱,内,内的盐完,全,全溶解洗,脱,脱出，再,用,用较高浓,度,度的甲醇,/,乙腈,-,水溶液（,50%,）冲洗，,最,最后用高,浓,浓度的甲,醇,醇,/,乙腈,-,水溶液（,80%,100%,）冲洗，,使,使色谱柱,中,中的强吸,附,附物质冲,洗,洗出来。,如色谱柱,需,需长期保,存,存，反相,柱,柱可以贮,存,存于甲醇,或,或乙腈中,，,，正相柱,可,可以贮存,于,于经脱水,处,处理后的,正,正己烷中,，,，离子交,换,换柱可以,贮,贮存于含,5%,甲醇或含,0.05%,叠氮化纳,的,的水中，,并,并将色谱,柱,柱两端密,封,封，以免,干,干燥，室,温,温保存。,4.4,流动相的,调,调整,为满足色,谱,谱柱系统,适,适用性要,求,求，试验,中,中有时需,要,要调整流,动,动相组分,的,的比例。,在,在调整流,动,动相组分,比,比例时，,以,以组分比,例,例较低者,（,（小于或,等,等于,50%,）相对改,变,变量不超,过,过,30%,且绝对改,变,变量不超,过,过,10%,为限，如,30%,相对改变,量,量的数值,超,超过,10%,时，则改,变,变量以,10%,为限。下,面,面举例说,明,明。,4.4.1,二元流动,相,相系统,例,1,两组分比,例,例为,50,：,50,按上述原,则,则，,50%,的最大相,对,对该变量,为,为,15%,，已超过,了,了绝对改,变,变量允许,的,的范围，,故,故该流动,相,相比例调,节,节的范围,是,是,10%,，即,40,：,60,至,60:40,。,例,2,两组分比,例,例为,2:98,按上述原,则,则，,2%,的最大相,对,对改变量,为,为,0.6%,，故该流,动,动相比例,调,调节的范,围,围是,1.4:98.6,至,2.6:97.4,。,4.4.2,三元流动,相,相系统,例,3,三组分比,例,例为,60:35:5,按上述原,则,则，可每,次,次调节流,动,动相系统,中,中比例较,低,低的两个,组,组分。,对于,35%,的组分，,其,其最大相,对,对改变量,为,为,10.5%,，已超过,了,了绝对该,变,变量允许,的,的范围，,故,故该组分,比,比例调节,的,的范围是,10%,，即,25%,45%,，则流动,相,相系统比,例,例的调节,范,范围是,50:45:5,至,70:25:5,。,对于,5%,的组分，,其,其最大相,对,对改变量,为,为,1.5%,，该组分,比,比例调节,的,的范围是,1.5%,，即,3.5%,6.5%,，则流动,相,相系统比,例,例的调节,范,范围是,58.5:35:6.5,至,61.5:35:3.5,。,4.5,杂质检,查,查时色,谱,谱参数,的,的设置,在进行,杂,杂质检,查,查时，,选,选择适,宜,宜的检,测,测灵敏,度,度和设,定,定适宜,的,的积分,参,参数非,常,常重要,。,。国内,药,药品质,量,量标准,中,中，通,常,常制备,与,与杂质,限,限度相,当,当浓度,的,的对照,溶,溶液，,用,用以调,节,节检测,灵,灵敏度,，,，使对,照,照溶液,的,的主成,分,分色谱,峰,峰高达,满,满量程,的,的,10%,25%,，再进,行,行供试,品,品溶液,的,的测定,，,，以峰,面,面积计,算,算单个,杂,杂质量,和,和总杂,质,质量。,目前国,内,内色谱,数,数据处,理,理系统,大,大致有,积,积分仪,和,和色谱,工,工作站,两,两种类,型,型，对,于,于传统,的,的积分,仪,仪，由,于,于记录,仪,仪的满,量,量程是,固,固定的,，,，因此,检,检测灵,敏,敏度的,调,调节通,常,常是调,节,节检测,器,器的灵,敏,敏度使,色,色谱峰,高,高达到,记,记录仪,满,满量程,的,的某个,范,范围；,而,而对于,色,色谱工,作,作站，,由,由于记,录,录标尺,的,的满刻,度,度是可,调,调的所,以,以通常,是,是调节,满,满刻度,的,的设定,值,值，使,色,色谱峰,的,的量程,占,占满刻,度,度的某,个,个范围,。,。,无论使,用,用的是,积,积分仪,，,，或者,是,是色谱,工,工作站,，,，如质,量,量标准,中,中没有,明,明确规,定,定峰面,积,积的取,舍,舍限值,，,，或没,有,有设定,灵,灵敏度,测,测试溶,液,液，则,在,在实际,检,检验中,，,，实验,者,者通常,根,根据以,往,往经验,设,设定积,分,分参数,和,和最小,峰,峰面积,，,，由此,也,也出现,了,了同批,样,样品的,杂,杂志总,量,量在不,同,同实验,室,室（或,不,不同实,验,验者）,之,之间差,异,异较大,的,的现象,。,。,如遇到,这,这种情,况,况，建,议,议实验,者,者在检,测,测灵敏,度,度调节,（,（或工,作,作站标,尺,尺量程,调,调整）,完,完毕后,，,，采用,对,对照溶,液,液逐步,稀,稀释法,配,配制系,统,统溶液,来,来确定,此,此色谱,系,系统的,检,检测限,，,，在与,供,供试品,溶,溶液及,对,对照溶,液,液相同,的,的标尺,下,下记录,色,色谱图,，,，通常,以,以信噪,比,比,3:1,时的相,应,应浓度,作,作为检,测,测限，,以,以该检,测,测限对,应,应的峰,面,面积作,为,为计算,杂,杂志总,量,量时色,谱,谱峰峰,面,面积的,取,取舍限,值,值。,谢谢观,看,看,/,欢迎下,载,载,BYFAITHI 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